本文選題：轉(zhuǎn)移性前列腺癌　切入點(diǎn)：前列腺癌干細(xì)胞　出處：《蘇州大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：研究背景和目的:雄激素阻斷是晚期前列腺癌首選的治療方式,但隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng),原來(lái)效果很好的雄激素阻斷治療變?yōu)闊o(wú)效,腫瘤重新開始進(jìn)展,最終發(fā)展為去勢(shì)抵抗性前列腺癌,造成腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。干細(xì)胞學(xué)說(shuō)認(rèn)為隨著雄激素阻斷治療的進(jìn)行,腫瘤干細(xì)胞群體數(shù)量增加,從而導(dǎo)致前列腺癌的去勢(shì)抵抗和轉(zhuǎn)移。睪丸孤核受體4(TR4)在干/祖細(xì)胞分化過(guò)程中起到重要作用,前期研究TR4通過(guò)多種途徑促進(jìn)前列腺癌的進(jìn)展,包括促進(jìn)CD133陽(yáng)性前列腺癌干/祖細(xì)胞的化療耐藥。但TR4對(duì)CD133陽(yáng)性前列腺癌干/祖細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響尚未有報(bào)道。本研究目的在于探討TR4在CD133陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)機(jī)制,為轉(zhuǎn)移性前列腺癌的治療提供新的思路。研究方法:1、免疫磁珠法在去勢(shì)抵抗性前列腺癌C4-2及CWR22Rv1細(xì)胞株中分離出CD133陽(yáng)性細(xì)胞,檢測(cè)其干細(xì)胞標(biāo)志物及TR4表達(dá)水平。2、慢病毒技術(shù)在上述分離出的CD133陽(yáng)性前列腺癌干/祖細(xì)胞中沉默TR4,Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和3D侵襲實(shí)驗(yàn)觀察TR4對(duì)CD133陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響。3、收集30個(gè)前列腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,在CD133陽(yáng)性前列腺癌干/祖細(xì)胞中沉默TR4后,QPCR檢測(cè)篩選變化最明顯的基因。4、沉默TR4,Western blot檢測(cè)EZH2及下游轉(zhuǎn)移相關(guān)基因蛋白表達(dá)變化。5、預(yù)測(cè)TR4蛋白與EZH2啟動(dòng)子可能的結(jié)合位點(diǎn)。染色質(zhì)免疫共沉淀檢測(cè)TR4與預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合情況。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)TR4對(duì)EZH2啟動(dòng)子活性的調(diào)控。6、沉默TR4的同時(shí)過(guò)表達(dá)EZH2,觀察侵襲表型變化,正反驗(yàn)證TR4是否確實(shí)通過(guò)EZH2促進(jìn)前列腺癌干/祖細(xì)胞介導(dǎo)的前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移。7、構(gòu)建裸鼠移植瘤模型:分對(duì)照組及TR4沉默組對(duì)裸鼠進(jìn)行前列腺原位注射,使CWR22Rv1來(lái)源的CD133陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞成瘤,觀察腫瘤轉(zhuǎn)移情況,免疫組化檢測(cè)TR4及EZH2表達(dá)情況,進(jìn)一步驗(yàn)證靶向TR4對(duì)前列腺癌干/祖細(xì)胞介導(dǎo)的前列腺癌轉(zhuǎn)移的抑制作用。研究結(jié)果:1、免疫磁珠法分離出的CD133陽(yáng)性前列腺癌干/祖細(xì)胞具有明顯高于親本細(xì)胞的干細(xì)胞標(biāo)志物CD133和Nanog。TR4 m RNA和蛋白在分離出的干/祖細(xì)胞中均高表達(dá)。2、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)和3D侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示沉默TR4導(dǎo)致CD133陽(yáng)性的前列腺癌細(xì)胞侵襲能力明顯下降。3、在C4-2和CWR22Rv1細(xì)胞分離出的CD133陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞中沉默TR4后,有5個(gè)共同的基因m RNA表達(dá)變化最為明顯,分別是KAI1和TIMP2升高,IGF、HIF2α和EZH2下降。4、在C4-2和CWR22Rv1細(xì)胞分離出的CD133陽(yáng)性前列腺癌細(xì)胞及前列腺癌干細(xì)胞系PCSC中沉默TR4后,EZH2及其下游轉(zhuǎn)移相關(guān)基因NOTCH1、SLUG、TGFβ1和MMP9的蛋白表達(dá)均顯著下降。5、生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)EZH2的啟動(dòng)子區(qū)3個(gè)可能的TR4反應(yīng)元件。染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TR4蛋白結(jié)合到前兩個(gè)TR4反應(yīng)元件。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)TR4蛋白通過(guò)與第一個(gè)TR4反應(yīng)元件作用調(diào)控EZH2表達(dá)。6、沉默TR4的同時(shí)過(guò)表達(dá)EZH2,可部分逆轉(zhuǎn)沉默TR4引起的EZH2下游轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的下調(diào)及侵襲能力的下降。7、裸鼠前列腺原位注射成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照組腫瘤轉(zhuǎn)移比例高于TR4沉默組。免疫組化染色結(jié)果顯示TR4沉默組標(biāo)本EZH2蛋白的表達(dá)水平低于對(duì)照組。研究結(jié)論:1、TR4在前列腺癌干/祖細(xì)胞高表達(dá)。2、前列腺癌干/祖細(xì)胞中高表達(dá)的TR4促進(jìn)前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移。3、TR4通過(guò)結(jié)合于EZH2啟動(dòng)子TR4反應(yīng)元件,在轉(zhuǎn)錄水平轉(zhuǎn)錄調(diào)控EZH2表達(dá)。4、TR4通過(guò)促進(jìn)EZH2及其下游轉(zhuǎn)移相關(guān)基因NOTCH1、SLUG、TGFβ1和MMP9表達(dá),從而促進(jìn)前列腺癌干/祖細(xì)胞介導(dǎo)的前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:The effect of TR4 on the invasion and metastasis of CD133 - positive prostate cancer cells was studied . The expression level of TR4 protein was significantly lower than that in control group . The results showed that TR4 had higher expression level of EZH2 than that in control group .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Hongmei Zeng;Siwei Zhang;;The updated incidences and mortalities of major cancers in China, 2011[J];Chinese Journal of Cancer;2015年11期

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本文編號(hào)：1690062