發(fā)布時間：2018-03-31 09:07

  本文選題：轉(zhuǎn)移性前列腺癌　切入點：前列腺癌干細胞　出處：《蘇州大學》2016年博士論文

【摘要】：研究背景和目的:雄激素阻斷是晚期前列腺癌首選的治療方式,但隨著治療時間的延長,原來效果很好的雄激素阻斷治療變?yōu)闊o效,腫瘤重新開始進展,最終發(fā)展為去勢抵抗性前列腺癌,造成腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。干細胞學說認為隨著雄激素阻斷治療的進行,腫瘤干細胞群體數(shù)量增加,從而導(dǎo)致前列腺癌的去勢抵抗和轉(zhuǎn)移。睪丸孤核受體4(TR4)在干/祖細胞分化過程中起到重要作用,前期研究TR4通過多種途徑促進前列腺癌的進展,包括促進CD133陽性前列腺癌干/祖細胞的化療耐藥。但TR4對CD133陽性前列腺癌干/祖細胞轉(zhuǎn)移的影響尚未有報道。本研究目的在于探討TR4在CD133陽性前列腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及相關(guān)機制,為轉(zhuǎn)移性前列腺癌的治療提供新的思路。研究方法:1、免疫磁珠法在去勢抵抗性前列腺癌C4-2及CWR22Rv1細胞株中分離出CD133陽性細胞,檢測其干細胞標志物及TR4表達水平。2、慢病毒技術(shù)在上述分離出的CD133陽性前列腺癌干/祖細胞中沉默TR4,Transwell侵襲實驗和3D侵襲實驗觀察TR4對CD133陽性前列腺癌細胞侵襲能力的影響。3、收集30個前列腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,在CD133陽性前列腺癌干/祖細胞中沉默TR4后,QPCR檢測篩選變化最明顯的基因。4、沉默TR4,Western blot檢測EZH2及下游轉(zhuǎn)移相關(guān)基因蛋白表達變化。5、預(yù)測TR4蛋白與EZH2啟動子可能的結(jié)合位點。染色質(zhì)免疫共沉淀檢測TR4與預(yù)測結(jié)合位點的結(jié)合情況。熒光素酶報告基因檢測TR4對EZH2啟動子活性的調(diào)控。6、沉默TR4的同時過表達EZH2,觀察侵襲表型變化,正反驗證TR4是否確實通過EZH2促進前列腺癌干/祖細胞介導(dǎo)的前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移。7、構(gòu)建裸鼠移植瘤模型:分對照組及TR4沉默組對裸鼠進行前列腺原位注射,使CWR22Rv1來源的CD133陽性前列腺癌細胞成瘤,觀察腫瘤轉(zhuǎn)移情況,免疫組化檢測TR4及EZH2表達情況,進一步驗證靶向TR4對前列腺癌干/祖細胞介導(dǎo)的前列腺癌轉(zhuǎn)移的抑制作用。研究結(jié)果:1、免疫磁珠法分離出的CD133陽性前列腺癌干/祖細胞具有明顯高于親本細胞的干細胞標志物CD133和Nanog。TR4 m RNA和蛋白在分離出的干/祖細胞中均高表達。2、Transwell侵襲實驗和3D侵襲實驗結(jié)果顯示沉默TR4導(dǎo)致CD133陽性的前列腺癌細胞侵襲能力明顯下降。3、在C4-2和CWR22Rv1細胞分離出的CD133陽性前列腺癌細胞中沉默TR4后,有5個共同的基因m RNA表達變化最為明顯,分別是KAI1和TIMP2升高,IGF、HIF2α和EZH2下降。4、在C4-2和CWR22Rv1細胞分離出的CD133陽性前列腺癌細胞及前列腺癌干細胞系PCSC中沉默TR4后,EZH2及其下游轉(zhuǎn)移相關(guān)基因NOTCH1、SLUG、TGFβ1和MMP9的蛋白表達均顯著下降。5、生物信息學分析發(fā)現(xiàn)EZH2的啟動子區(qū)3個可能的TR4反應(yīng)元件。染色質(zhì)免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)TR4蛋白結(jié)合到前兩個TR4反應(yīng)元件。熒光素酶報告基因?qū)嶒炞C實TR4蛋白通過與第一個TR4反應(yīng)元件作用調(diào)控EZH2表達。6、沉默TR4的同時過表達EZH2,可部分逆轉(zhuǎn)沉默TR4引起的EZH2下游轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的下調(diào)及侵襲能力的下降。7、裸鼠前列腺原位注射成瘤實驗結(jié)果顯示,對照組腫瘤轉(zhuǎn)移比例高于TR4沉默組。免疫組化染色結(jié)果顯示TR4沉默組標本EZH2蛋白的表達水平低于對照組。研究結(jié)論:1、TR4在前列腺癌干/祖細胞高表達。2、前列腺癌干/祖細胞中高表達的TR4促進前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移。3、TR4通過結(jié)合于EZH2啟動子TR4反應(yīng)元件,在轉(zhuǎn)錄水平轉(zhuǎn)錄調(diào)控EZH2表達。4、TR4通過促進EZH2及其下游轉(zhuǎn)移相關(guān)基因NOTCH1、SLUG、TGFβ1和MMP9表達,從而促進前列腺癌干/祖細胞介導(dǎo)的前列腺癌侵襲轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:The effect of TR4 on the invasion and metastasis of CD133 - positive prostate cancer cells was studied . The expression level of TR4 protein was significantly lower than that in control group . The results showed that TR4 had higher expression level of EZH2 than that in control group .

【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Wanqing Chen;Rongshou Zheng;Hongmei Zeng;Siwei Zhang;;The updated incidences and mortalities of major cancers in China, 2011[J];Chinese Journal of Cancer;2015年11期

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本文編號：1690062