發(fā)布時(shí)間：2017-11-28 12:28

  本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的Angiomotin過表達(dá)對(duì)骨轉(zhuǎn)移前列腺癌細(xì)胞遷移的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:研究細(xì)胞遷移相關(guān)蛋白Angiomotin(Amot)在骨轉(zhuǎn)移前列腺癌細(xì)胞PC3-mm2遷移中的作用及相關(guān)機(jī)制,為PCa骨轉(zhuǎn)移的防治提供研究基礎(chǔ)。方法:1.利用慢病毒感染包裝技術(shù)構(gòu)建Amot穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞PC3mm2-Amot和陰性對(duì)照細(xì)胞PC3mm2-CDH;利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PC3mm2-Amot細(xì)胞的遷移能力;2.利用q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)PC3mm2-Amot中骨轉(zhuǎn)移相關(guān)基因m RNA的表達(dá)變化;構(gòu)建質(zhì)粒p IRES2-Amot,同時(shí)以p IRES2-EFGP為陰性對(duì)照,分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞中過表達(dá)Amot,Western blotting檢測(cè)β-catenin的核內(nèi)表達(dá)。將質(zhì)粒p IRES2-Amot和pc DNA-β-catenin瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞中分別過表達(dá)Amot和β-catenin,利用免疫共沉淀技術(shù)(anti-Cad11抗體免疫共沉淀)分別檢測(cè)免疫復(fù)合物中Amot與β-catenin的表達(dá);利用免疫共沉淀技術(shù)(anti-Amot抗體免疫共沉淀)檢測(cè)PC3mm2-Amot細(xì)胞中Patj與Amot的結(jié)合情況。結(jié)果:1.成功構(gòu)建了Amot穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞株P(guān)C3mm2-Amot。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PC3mm2-Amot細(xì)胞在5 h和10 h內(nèi)的細(xì)胞遷移能力較對(duì)照細(xì)胞PC3mm2-CDH明顯增強(qiáng)(P0.05),劃痕愈合率分別為10.2%±0.6%和19.0%±0.8%。Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示當(dāng)transwell下室為10%FBS的培養(yǎng)基時(shí),實(shí)驗(yàn)組平均每高倍視野(×200)遷移出膜細(xì)胞數(shù)為對(duì)照組的3.62倍,遷移促進(jìn)率為263.6%(P0.05)。當(dāng)transwell下室為成骨細(xì)胞條件培養(yǎng)基時(shí),實(shí)驗(yàn)組平均每高倍視野(×200)遷移出膜細(xì)胞數(shù)為對(duì)照組的2.46倍,遷移促進(jìn)率為146.2%(P0.05)。當(dāng)transwell下室為成骨細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),實(shí)驗(yàn)組平均每高倍視野(×200)遷移出膜細(xì)胞數(shù)為對(duì)照組的1.98倍,遷移促進(jìn)率為97.96%(P0.05)。2.q RT-PCR結(jié)果表明,與PC3mm2-CDH細(xì)胞相比,PC3mm2-Amot細(xì)胞中骨轉(zhuǎn)移相關(guān)基因COX-2、C3上調(diào)最為顯著,而CXCR4、MCP-1、IL-6、PTHrp無明顯改變;Western blotting結(jié)果表明Amot在PC3細(xì)胞中的過表達(dá)導(dǎo)致β-catenin的核內(nèi)表達(dá)增強(qiáng);anti-Cad11抗體免疫共沉淀結(jié)果顯示,在PC3細(xì)胞中分別過表達(dá)Amot或β-catenin,均會(huì)導(dǎo)致β-catenin或Amot與Cad11結(jié)合的下降,即p IRES2-Amot轉(zhuǎn)染組中Amot和Cad11結(jié)合的蛋白量顯著增加,β-catenin與Cad11結(jié)合的蛋白量顯著減少;pc DNA-β-catenin轉(zhuǎn)染組中Amot和Cad11結(jié)合的蛋白量顯著減少,β-catenin與Cad11結(jié)合的蛋白量顯著增加。anti-Amot抗體免疫共沉淀結(jié)果顯示并未檢測(cè)到Patj蛋白條帶。結(jié)論:1.Amot過表達(dá)可促進(jìn)骨轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞PC3-mm2的遷移。2.在骨轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞中,Amot的過表達(dá)可導(dǎo)致β-catenin核內(nèi)表達(dá)增高,并且二者對(duì)Cad11的結(jié)合存在相互競(jìng)爭(zhēng)的關(guān)系,同時(shí)Amot過表達(dá)導(dǎo)致COX-2和補(bǔ)體C3表達(dá)升高,進(jìn)而導(dǎo)致破骨細(xì)胞發(fā)生和重塑,引起溶骨性損傷。3.Patj信號(hào)通路并不是Amot在骨轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞中的主要信號(hào)途徑。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐棟梁,張新濤,王國(guó)海,李佛保,胡俊勇;390例病理確診轉(zhuǎn)移性骨腫瘤的臨床分析[J];癌癥;2005年11期

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本文編號(hào)：1233982