發(fā)布時(shí)間：2017-11-15 04:30

  本文關(guān)鍵詞：NGAL、KIM-1對(duì)急性腎功能衰竭早期診斷的研究

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【摘要】：目的通過研究中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)和腎損傷分子(kidney injury molecule1,KIM-1)在急性腎損傷(Acute kidney injury,AKI)大鼠模型、人腎小管上皮細(xì)胞(Human Kidney Cell,HK-2)損壞模型以及臨床患者體內(nèi)的表達(dá)和變化,進(jìn)一步確定血、尿NGAL、KIM-1升高對(duì)預(yù)測AKI的可能性,為早期診斷AKI尋找可靠的生物學(xué)指標(biāo)。方法1、將40只SPF級(jí)的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分成五組。其中四組連續(xù)每天腹腔注射100mg/kg硫酸慶大霉素注射液,對(duì)照組則注射等劑量的生理鹽水。連續(xù)注射3d、5d、7d、10d后分別隨機(jī)處死其中一組,同時(shí)間對(duì)照組分別隨機(jī)處死2只大鼠。取出腎臟組織留作病理切片進(jìn)行HE染色和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn),同時(shí)研磨腎臟組織提取RNA,檢測其m RNA表達(dá)情況。留取血清及尿液標(biāo)本檢測其生化指標(biāo)以及NGAL、KIM-1變化。2、分別在不同時(shí)間點(diǎn)用0.1μmol/L H2O2處理HK-2,收集細(xì)胞上清液檢測NGAL、KIM-1分泌水平,同時(shí)收集細(xì)胞檢測m RNA表達(dá)情況。3、收集2015年2月-2015年12月臨床急性腎損傷患者血、尿標(biāo)本40例,同時(shí)收集20例腎臟健康人的血、尿標(biāo)本,作為對(duì)照。檢測其傳統(tǒng)生化指標(biāo)以及血、尿標(biāo)本中NGAL、KIM-1變化情況。結(jié)果1、SD大鼠血清NGAL和尿NGAL、KIM-1均在給藥3d后分別達(dá)(28.8±3.17)μg/m L、(3.63±0.50)μg/m L、(5.43±1.25)μg/m L,而血清KIM-1在給藥5d后達(dá)(4.51±0.41)μg/m L;免疫組化結(jié)果顯示給藥3d后腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)NGAL點(diǎn)狀表達(dá),隨著給藥時(shí)間的延長,NGAL表達(dá)量逐漸增多,顏色由淡紅色漸變?yōu)樯铋偌t色;在給藥3d后KIM-1沉積于腎小管管壁內(nèi),并隨著給藥時(shí)間的延長,其表達(dá)量逐漸增多,顏色由紅色漸變?yōu)樯铋偌t色;血清肌酐(serum creatinine,SCr)和尿素(blood urea nitrogen,BUN)在給藥7d后達(dá)(90.4±1.9)μmol/L、(62.2±1.2)mmol/L;血清胱抑素C(cystatin C,Cys C)在給藥5d后達(dá)(0.24±0.03)mg/L,與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;24h尿微量白蛋白(microalbuminuria,MALB)在給藥8d后升至(0.512±0.023)mg/24h,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)給藥5d后腎臟逐步出現(xiàn)腎小管擴(kuò)張,管壁細(xì)胞呈階段脫落、消失以及炎性細(xì)胞浸潤等變化。2、隨著H2O2處理人腎小管上皮細(xì)胞的時(shí)間延長,細(xì)胞培養(yǎng)液上清中NGAL、KIM-1的m RNA相對(duì)表達(dá)量升高,NGAL的分泌量也逐漸升高,至藥物處理12h,NGAL的m RNA表達(dá)量及蛋白分泌量均到達(dá)高峰,而處理24h后,開始呈下降趨勢;而KIM-1則隨藥物處理時(shí)間的推移,其m RNA表達(dá)量及蛋白分泌量均呈上升趨勢。3、臨床標(biāo)本中,與健康對(duì)照組相比較,病例組血液、尿液中NGAL、KIM-1均出現(xiàn)明顯升高,其中血液標(biāo)本分別達(dá)到(136.5±18.31)μg/L、(5.21±0.40)μg/L,尿液標(biāo)本分別為(28.84±4.06)μg/L、(2.11±0.50)μg/L而此時(shí)傳統(tǒng)生化指標(biāo)中肌酐、尿素均未見明顯改變。結(jié)論1、成功構(gòu)建大鼠急性腎損傷模型,SD大鼠出現(xiàn)急性腎損傷進(jìn)行性發(fā)展的典型表現(xiàn)。腎損傷發(fā)生早期,大鼠腎臟組織、血、尿標(biāo)本中即可檢測大量NGAL、KIM-1的表達(dá),提示兩者適合作為AKI的早期診斷標(biāo)志物。2、人腎小管上皮細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中被誘導(dǎo)氧化破壞后,大量表達(dá)和分泌NGAL、KIM-1,提示兩者適合作為判斷腎小管上皮細(xì)胞損傷的指標(biāo)。3、臨床病例組中血、尿NGAL、KIM-1的濃度均明顯高于健康對(duì)照組,血Cys C輕度高于健康對(duì)照組,提示前兩者是AKI的重要診斷指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R692.5

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6 周q，

本文編號(hào)：1188393