本文關(guān)鍵詞：氟對(duì)大鼠腎小管上皮細(xì)胞的毒性作用及硒干預(yù)機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:本課題主要以大鼠腎小管上皮細(xì)胞為研究對(duì)象,采用單氟、單硒及硒氟聯(lián)合培養(yǎng)細(xì)胞,旨在探討硒對(duì)氟誘導(dǎo)大鼠腎小管上皮細(xì)胞的拮抗作用和相關(guān)機(jī)制的研究。方法:腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)不同濃度氟、硒和硒氟聯(lián)合染毒培養(yǎng)48和72 h后,運(yùn)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況;觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化運(yùn)用HE染色法;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位的變化;運(yùn)用試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中氧化應(yīng)激酶的活性;Real-Time PCR檢測(cè)凋亡相關(guān)因子Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2 m RNA表達(dá)水平;Western-blot免疫印跡檢測(cè)Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.染氟48、72和96 h時(shí),染氟組5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L和40 mg/L均對(duì)細(xì)胞增殖呈抑制作用。低濃度染硒組能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖,高濃度染硒組能夠抑制細(xì)胞的增殖。與等劑量染氟組相比,硒干預(yù)組細(xì)胞增殖顯著加快。2.顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu),對(duì)照組細(xì)胞生長正常,形態(tài)自然,細(xì)胞排列緊密;染氟組細(xì)胞體積增大,細(xì)胞間隙變寬,連接不緊密,出現(xiàn)多核現(xiàn)象,異常細(xì)胞數(shù)量增多;染硒組細(xì)胞形態(tài)與對(duì)照組大致相近;與等劑量染氟組相比,硒干預(yù)組細(xì)胞形態(tài)趨于正常。3.細(xì)胞培養(yǎng)液中氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示,隨染氟濃度的升高,細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD、CAT、T-AOC和GSH-PX的活性逐漸降低;NO和MDA含量逐漸增多。染硒組差異不明顯。與等劑量染氟組比,硒干預(yù)組中SOD、CAT、T-AOC和GSH-PX活性均升高;NO和MDA含量均降低。4.細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位變化,隨染氟濃度的升高,凋亡率升高,線粒體膜電位降低;染硒組細(xì)胞凋亡率和線粒體膜電位無明顯變化;與等劑量染氟組相比,硒干預(yù)組細(xì)胞凋亡率顯著降低,線粒體膜電位顯著升高。5.凋亡相關(guān)因子m RNA表達(dá)情況,隨染氟濃度的升高,除Bcl-2 m RNA表達(dá)水平降低外,其他凋亡因子Caspase-3、Caspase-9和Bax m RNA表達(dá)水平顯著升高。與等劑量染氟組相比,硒干預(yù)組Bcl-2 m RNA表達(dá)水平升高,而Caspase-3、Caspase-9和Bax m RNA表達(dá)水平都顯著降低。6.凋亡相關(guān)因子蛋白表達(dá)測(cè)定結(jié)果,與對(duì)照組比較,隨染氟濃度的升高,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白表達(dá)上調(diào),而Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)。染硒組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與等劑量染氟組相比,硒干預(yù)組Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Bax蛋白表達(dá)下調(diào),而Bcl-2蛋白表達(dá)上調(diào)。而各組中pro-Caspase-3和pro-Caspase-9蛋白表達(dá)沒有明顯變化。結(jié)論:1.硒對(duì)氟誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡有拮抗作用。2.硒可以通過調(diào)節(jié)抗氧化酶活性,提高機(jī)體抗氧化能力,加快自由基的清除,使細(xì)胞免受氧化損傷。3.硒可以通過調(diào)節(jié)凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2的表達(dá),抑制凋亡信號(hào)傳導(dǎo),從而拮抗細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R692;R599

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本文編號(hào)：1180160