本文關(guān)鍵詞：十溴聯(lián)苯醚上調(diào)MAPKs蛋白并損傷血睪屏障的研究

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【摘要】：目的探索雄性ICR暴露十溴聯(lián)苯醚(decabromodiphenyl ether,BDE-209)對(duì)小鼠睪丸MAPK通路相關(guān)蛋白、血睪屏障緊密連接蛋白Claudin-11以及血睪屏障超微結(jié)構(gòu)的影響;此外,還對(duì)不同濃度BDE-209染毒處理Ser W3細(xì)胞MAPK通路相關(guān)蛋白和緊密連接蛋白Claudin-11表達(dá)水平影響進(jìn)行初步研究,為闡明BDE-209的雄性生殖毒性機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。方法體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,4周齡雄性ICR小鼠,52只,體重15~21克,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,隨機(jī)分為4組,即溶劑對(duì)照組(0 mg/kg BW)、低劑量組(100 mg/kg BW)、中劑量組(300 mg/kg BW)和高劑量組(500 mg/kg BW),每組13只,經(jīng)灌胃染毒6周后處死,冰浴情況下分離臟器、稱重,然后將生物樣本保存于-80℃超低溫冰箱直至檢測(cè)。對(duì)睪丸組織進(jìn)行HE染色進(jìn)行光鏡觀察以及電鏡觀察超微結(jié)構(gòu);Western Blot方法檢測(cè)小鼠睪丸MAPKs通路中的相關(guān)蛋白(p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK)和Claudin-11表達(dá)變化;體外實(shí)驗(yàn)中,用不同濃度BDE-209(0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml和40μg/ml)處理Ser W3,24h后觀察細(xì)胞形態(tài)變化,MTT方法檢測(cè)細(xì)胞存活百分率、LDH實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳酸脫氫酶毒性、Western Blot方法檢測(cè)MAPK通路相關(guān)蛋白(p38、p-p38、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK)和血睪屏障緊密連接蛋白Claudin-11的表達(dá)變化。結(jié)果BDE-209染毒處理雄性ICR小鼠6周后,發(fā)現(xiàn)各劑量組雄性ICR小鼠的體重增加緩慢,從第三周開始,中劑量組和高劑量組小鼠的體重具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),小鼠睪丸系數(shù)和附睪系數(shù)顯著降低(P0.05)。HE染色發(fā)現(xiàn)隨著染毒劑量加大,睪丸輸精管中的精子數(shù)目明顯減少,睪丸支持細(xì)胞數(shù)減少,細(xì)胞排列不緊密,支持細(xì)胞間間隙增寬,間質(zhì)細(xì)胞間隙明顯增寬,生精細(xì)胞間隙增大,支持細(xì)胞數(shù)、生精細(xì)胞數(shù)以及間質(zhì)細(xì)胞數(shù)顯著減少。超微結(jié)構(gòu)結(jié)果表明,與溶劑對(duì)照組相比,劑量組出現(xiàn)明顯支持細(xì)胞緊密連接解體、斷裂。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均顯示,MAPKs通路中p-p38/p38和p-JNK/JNK值顯著增加,差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義(P0.05);以及Claudin-11的表達(dá)顯著降低(P0.05)。結(jié)論BDE-209可以引起睪丸組織和Ser W3細(xì)胞中MAPKs通路相關(guān)蛋白表達(dá)增加、Claudin-11的表達(dá)降低,并且引起睪丸組織中支持細(xì)胞緊密連接破壞,提示BDE-209可能通過MAPKs通路引起支持細(xì)胞BTB損傷。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R697.22

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7 管，

本文編號(hào)：1149535