本文關(guān)鍵詞：Cad11高和低表達(dá)腎癌細(xì)胞分選與Cad11對(duì)腎癌細(xì)胞遷移作用的影響

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【摘要】：目的分選Ⅱ型成骨細(xì)胞型鈣黏附蛋白(cadherin-11,Cad11)高和低表達(dá)的腎癌細(xì)胞786-O細(xì)胞群,并證實(shí)Cad11在腎癌細(xì)胞786-O中的遷移作用。方法將質(zhì)粒pBMN-Ⅰ-GFP-Cad11轉(zhuǎn)染于Phoenix細(xì)胞進(jìn)行包裝,之后感染786-O細(xì)胞,流式細(xì)胞儀分選后擴(kuò)大培養(yǎng)建立786-LG細(xì)胞。將786-LG細(xì)胞經(jīng)Cad11抗體2C7孵育后用BSA封閉,洗滌后加入標(biāo)記APC的二抗,同時(shí)以786-LG細(xì)胞(未經(jīng)任何處理)和786-LG細(xì)胞(只加入標(biāo)記APC的二抗處理)作為陰性對(duì)照確定分選門,綠色熒光通道和紅色熒光通道進(jìn)行雙參數(shù)分析,流式細(xì)胞儀分選技術(shù)篩選Cad11高和低表達(dá)的786-O腎癌細(xì)胞群,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)分選細(xì)胞Cad11的表達(dá)。786-Cad11+和786-Cad11-細(xì)胞血清饑餓24h后接種于內(nèi)室(細(xì)胞數(shù)為1×104),每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞結(jié)晶紫染色計(jì)數(shù)穿過小室的細(xì)胞數(shù)目,以穿過膜的細(xì)胞數(shù)目評(píng)估Cad11對(duì)其腎癌細(xì)胞786-O的遷移作用。結(jié)果成功構(gòu)建786-LG細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,786-LG細(xì)胞中Cad11陽性細(xì)胞亞群占細(xì)胞總數(shù)的75.98%。Cad11細(xì)胞群分選后,GFP+/APC+雙陽性細(xì)胞和GFP+/APC-單陽性細(xì)胞分別占細(xì)胞總數(shù)的28.0%和20.1%。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果表明,Cad11相對(duì)表達(dá)量786-LG細(xì)胞為0.25±0.02,786-Cad11+細(xì)胞為0.60±0.03,786-Cad11-細(xì)胞為0.10±0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,F=132.32,P0.001。與786-LG細(xì)胞相比,兩個(gè)細(xì)胞亞群786-Cad11+和786-Cad11-中Cad11蛋白的表達(dá)量均有明顯變化,前者蛋白表達(dá)量升高至2.41倍(P=0.007),后者蛋白表達(dá)量降低至0.41倍(P=0.004),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,786-LG細(xì)胞遷移數(shù)目為114.33±4.09,786-Cad11+細(xì)胞遷移數(shù)目為139.00±5.19,786-Cad11-細(xì)胞遷移數(shù)目為77.67±3.71,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,F=49.65,P=0.000 2。結(jié)論成功建立了高和低表達(dá)Cad11的786-O細(xì)胞模型,并證實(shí)Cad11的表達(dá)與腎癌細(xì)胞的遷移密切相關(guān)。
【作者單位】： 天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： Ⅱ型成骨細(xì)胞型鈣黏附蛋白 分選 腎癌細(xì)胞 遷移
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81101596)
【分類號(hào)】：R737.11
【正文快照】： 中華腫瘤防治雜志,2015,22(6):427-431Chin J Cancer Prev Treat,2015,22(6):427-431腎癌是泌尿系統(tǒng)中常見的惡性腫瘤之一,約30%晚期腎癌會(huì)發(fā)生溶骨性骨轉(zhuǎn)移,患者表現(xiàn)為嚴(yán)重骨痛和病理性骨折,最終導(dǎo)致病死率增加[1-3]。近年研究發(fā)現(xiàn),Ⅱ型成骨細(xì)胞型鈣黏附蛋白(cadherin-11,Cad

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4 楊永安;谷江;張永春;王楠;朱致暉;楊清濤;祝慶亮;;京尼平特異性抑制線粒體解偶聯(lián)蛋白2對(duì)腎癌細(xì)胞抑制作用的研究[J];貴州醫(yī)藥;2013年02期

5 楊永安;谷江;張永春;王楠;朱致暉;楊清濤;祝慶亮;;線粒體解偶聯(lián)蛋白2在京尼平促進(jìn)腎癌細(xì)胞抑制作用中的研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年04期

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本文編號(hào)：1123097