本文關(guān)鍵詞：丙戊酸鈉通過對(duì)SMAD4的雙重作用抑制前列腺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制

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【摘要】：研究背景前列腺癌在美國是最常見的男性惡性腫瘤,在中國,其發(fā)病率也逐年飆升。一旦發(fā)病,死亡率也很高。前列腺癌細(xì)胞有較高轉(zhuǎn)移特性,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在其中發(fā)揮重要作用,發(fā)生EMT的細(xì)胞會(huì)逐漸失去上皮細(xì)胞特性,形態(tài)學(xué)上更加細(xì)長,接近間質(zhì)細(xì)胞形態(tài),且獲得間質(zhì)細(xì)胞易于遷移的特性。EMT使得腫瘤細(xì)胞獲得極大遷移特性,從而發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移,威脅患者生命。腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制以及如何抑制腫瘤轉(zhuǎn)移一直是醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)課題,針對(duì)EMT,眾多通路被認(rèn)為參與其中,包括TGF-β、Notch、Wnt以及ERK/MAPK等。TGF-β通路在其中發(fā)揮重要作用,TGF-β下游的SMAD4又是此通路信息傳遞的重要一環(huán),SMAD4可將攜帶上游信息的R-SMADs轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核內(nèi),從而調(diào)控轉(zhuǎn)錄翻譯等過程,對(duì)細(xì)胞活動(dòng)產(chǎn)生影響。因此,進(jìn)一步明確其中的調(diào)控機(jī)制是首要問題,之后再結(jié)合前期研究,結(jié)合藥物的生物學(xué)機(jī)制,研究藥物在其中可以發(fā)揮的作用及其機(jī)制,對(duì)未來前列腺癌的治療有重要意義。目的前期研究已證實(shí)丙戊酸鈉(VPA)可以抑制前列腺癌轉(zhuǎn)移,并減低TGF-β通路中重要分子SMAD4的蛋白質(zhì)水平。VPA對(duì)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化有何影響、其影響作用如何產(chǎn)生等還亟待認(rèn)識(shí)。方法培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞、建立前列腺癌動(dòng)物模型,經(jīng)VPA處理后,檢測(cè)其中EMT標(biāo)記物及SMAD4的表達(dá)水平,并與對(duì)照組比較。SMAD4蛋白分子的單泛素化水平也一同得到檢測(cè)。應(yīng)用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及shRNA技術(shù)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)SMAD4蛋白水平后,再檢測(cè)EMT標(biāo)記物水平及在VPA處理前后的變化,以驗(yàn)證VPA對(duì)SMAD4的作用是否影響VPA對(duì)EMT的作用。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn),在前列腺癌細(xì)胞及動(dòng)物模型中,VPA都能明顯升高E-cadherin水平(p0.05)并明顯減低N-cadherin (p0.05)及Vimentin (p0.05)的表達(dá)水平。SMAD4的mRNA及蛋白水平在VPA處理下都減低(p0.05),我們同時(shí)發(fā)現(xiàn),SMAD4的單泛素化水平在VPA處理后明顯升高(p0.05)。敲除SMAD4可以明顯升高E-cadherin表達(dá)水平,但SMAD4的過表達(dá)卻能消除VPA對(duì)EMT的抑制作用,表明VPA對(duì)EMT的調(diào)控需要通過其對(duì)SAMD4的作用來實(shí)現(xiàn)。結(jié)論VPA通過減低SMAD4表達(dá)水平并升高其單泛素化水平來抑制前列腺癌EMT。未來VPA可以作為新的惡性腫瘤治療藥物。
【關(guān)鍵詞】：丙戊酸鈉 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 SMAD4 前列腺癌
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符號(hào)說明10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-18
• 1 材料13-14
• 1.1 細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)13
• 1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)13
• 1.3 試劑和耗材13
• 1.4 主要儀器13-14
• 2 方法14-18
• 2.1 溶液配置14
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)14-15
• 2.3 Western blotting檢測(cè)15-16
• 2.4 實(shí)施熒光定量PCR檢測(cè)16-17
• 2.5 免疫組化檢測(cè)17
• 2.6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染17
• 2.7 動(dòng)物模型的建立17
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析17-18
• 結(jié)果18-24
• 1 VPA抑制前列腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT18-19
• 2 VPA抑制SMAD4蛋白表達(dá)水平并升高其單泛素化水平19-20
• 3 VPA抑制裸鼠前列腺癌模型的生長20-21
• 4 VPA在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中抑制前列腺癌EMT及SMAD4表達(dá)21-22
• 5 VPA抑制EMT的機(jī)制是通過其對(duì)SMAD4的抑制來實(shí)現(xiàn)22-24
• 討論24-27
• 綜述27-36
• 參考文獻(xiàn)36-42
• 致謝42-43
• 碩士在讀期間發(fā)表的論文目錄43-44
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表44

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