本文關鍵詞：C3a分泌性表達載體及過表達C3a腎小管上皮細胞株的構建

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【摘要】：目的已有的研究表明包括糖尿病腎病在內的多種腎病患者腎小管上皮細胞存在C3a/C3aR軸過度活化現(xiàn)象,但有關C3a/C3aR軸過度活化在腎小管上皮細胞中的病理意義未知。文中構建分泌性過表達C3a的腎小腎小管上皮細胞株,為探討各種病理情況下C3a/C3aR軸過度活化的病理意義提供細胞模型。方法設計合成人C3a分泌性表達單元,將其克隆到慢病毒表達載體p Lenti6.3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位點,構建成C3a分泌性表達載體p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;將p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP和包裝質粒共轉染293 T細胞,包裝成C3a表達重組慢病毒LV-C3a;以LV-C3a感染人腎小管上皮細胞系HK2,根據(jù)LV-C3a上帶有殺稻瘟菌素抗性基因的特點,以殺稻瘟菌素篩選穩(wěn)定轉染細胞克隆;利用熒光定量PCR和ELISA方法對穩(wěn)定轉染細胞克隆的C3a表達水平和分泌情況進行分析,從中鑒定出穩(wěn)定分泌性過表達C3a的人腎小管上皮細胞株。結果 1成功構建了序列完全正確的C3a分泌性表達載體p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;2成功進行了重組慢病毒包裝,得到了高滴度(5×108個/m L)的C3a表達重組慢病毒LV-C3a;3成功進行了LV-C3a對HK2細胞的轉染,得到了穩(wěn)定轉染LV-C3a的HK2細胞株;基于熒光定量PCR和ELISA的分析證實,與HK2細胞比較,HK2-C3a細胞株中C3a mRNA表達水平顯著升高[(1.0±0.5)vs(1 321.0±18.0),P0.01],分泌的C3a水平顯著升高[(0.3±0.2)ng/m L vs(249.0±37.0)ng/m L,P0.01]。結論成功構建的C3a分泌性慢病毒表達載體和分泌性過表達C3a的人腎小管上皮細胞株為進一步研究各種病理情景中C3a/C3aR過度活化在人腎小管上皮細胞中的病理意義提供了很好的細胞模型,也為進一步開展C3a/C3aR過度活化在其他細胞中的病理意義創(chuàng)造了條件。
【作者單位】： 南京軍區(qū)南京總醫(yī)院國家腎臟疾病臨床醫(yī)學研究中心全軍腎臟病研究所;南京軍區(qū)南京總醫(yī)院比較醫(yī)學科;
【關鍵詞】： Ca CaR 慢病毒 腎小管上皮細胞 過表達
【基金】：國家自然科學基金(81370828)
【分類號】：R692
【正文快照】： 0引言補體系統(tǒng)的不適當激活也會導致組織的損傷。越來越多的研究表明,補體系統(tǒng)參與了多種人類疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[1-4]。補體活化與包括糖尿病腎病在內的多種病變相關[5-7]。但有關補體系統(tǒng)參與糖尿病腎病等腎組織損傷的機制仍未明了。膜攻擊復合物的形成是各種補體活化通路

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【共引文獻】

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本文編號：1028037