本文關(guān)鍵詞：微環(huán)境在多囊腎病囊腫發(fā)生與發(fā)展中的作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 多囊腎 常染色體顯性 微環(huán)境 巨噬細(xì)胞

【摘要】：研究目的：本課題探討了常染色體顯性遺傳多囊腎病(ADPKD)中囊腫襯里上皮細(xì)胞與巨噬細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞構(gòu)成的微環(huán)境對腎小管上皮細(xì)胞的影響,探尋其中可能發(fā)揮作用的因子及其相關(guān)機(jī)制。方法：1.建立小鼠巨噬細(xì)胞(RAW 264.7)與人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞(Ox161細(xì)胞)共培養(yǎng)模型,以實(shí)時PCR技術(shù)與免疫印跡技術(shù)檢測不同刺激因素對巨噬細(xì)胞極化的影響。2.建立MDCKⅡ細(xì)胞、小鼠巨噬細(xì)胞(RAW 264.7)與人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞(Ox161細(xì)胞)三維共培養(yǎng)模型,比較MDCKⅡ細(xì)胞不同條件下囊泡直徑。以免疫印跡技術(shù)檢測MDCKⅡ細(xì)胞與多囊腎病相關(guān)通路蛋白的表達(dá)。3.以實(shí)時PCR技術(shù)、免疫印跡技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測小鼠巨噬細(xì)胞(RAW 264.7)與人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞(Ox161細(xì)胞)不同共培養(yǎng)模式與刺激條件下TNF-α的表達(dá)與分泌。4.以實(shí)時PCR技術(shù)、免疫印跡技術(shù)檢測MDCKⅡ細(xì)胞與小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7)、人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞(Ox161細(xì)胞)共培養(yǎng)條件下FIP2表達(dá)。5.繁殖并鑒定Pkd1 IKO小鼠,于4周齡予腹腔注射他莫昔芬誘導(dǎo)Pkdl基因敲除,于5周齡建立單側(cè)腎臟缺血再灌注模型。6.收集Pkd1 IKO小鼠IRI急性期腎組織標(biāo)本,免疫印跡法檢測其TNF-α、FIP2蛋白的表達(dá),實(shí)時PCR技術(shù)檢測其TNF-α、FIP2表達(dá)。結(jié)果：1.三維培養(yǎng)條件下,與對照組相比,MDCKⅡ細(xì)胞與M2型巨噬細(xì)胞、囊腫襯里上皮細(xì)胞共培養(yǎng),其囊泡直徑明顯增加(P0.05)。MDCKII細(xì)胞與M2型巨噬細(xì)胞、囊腫襯里上皮細(xì)胞共培養(yǎng),其pSTAT3、pAkt、pERK、pCREB、PCNA表達(dá)增加。MDCKⅡ細(xì)胞與M1型巨噬細(xì)胞、囊腫襯里上皮細(xì)胞共培養(yǎng),其FIP2蛋白表達(dá)增加。2. Pkd1 IKO小鼠單側(cè)腎臟IRI后,急性期損傷側(cè)腎臟TNF-α、FIP2表達(dá)增加,Cre+小鼠較Cre-小鼠腎臟損傷更重,FIP2表達(dá)更高。結(jié)論：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,ADPKD中囊腫襯里上皮細(xì)胞與巨噬細(xì)胞構(gòu)成的微環(huán)境,可促進(jìn)囊腫周圍腎小管上皮增殖。微環(huán)境可能在腎損傷條件下,通過促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞FIP2的表達(dá)升高,改變其纖毛功能與極性。結(jié)合動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果,在“二次打擊”存在的條件下,微環(huán)境中TNF-α濃度增高,可能參與“三次打擊”,參與ADPKD的囊腫的形成和發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：多囊腎 常染色體顯性 微環(huán)境 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-11
• 前言11-13
• 第一部分 腎囊腫微環(huán)境對腎小管上皮細(xì)胞增殖的影響及其相關(guān)機(jī)制13-37
• 前言13-15
• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)15-17
• 材料與方法17-27
• 結(jié)果27-35
• 討論35-37
• 第二部分 腎損傷條件下微環(huán)境的改變及對腎小管上皮細(xì)胞作用與機(jī)制的探討37-58
• 前言37-39
• 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)39-41
• 材料與方法41-49
• 結(jié)果49-56
• 討論56-58
• 全文總結(jié)58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 綜述63-73
• 參考文獻(xiàn)66-73
• 在讀期間完成和發(fā)表的文章73-74
• 致謝74

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1010074