本文關(guān)鍵詞：ANG及其突變體與RI相互作用對膀胱癌血管生成的影響及分子機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 血管生成素 血管生成 核糖核酸酶抑制因子 蛋白相互作用 突變體

【摘要】：目的研究血管生成素(ANG)及其突變體與核糖核酸酶抑制因子(對)蛋白的相互作用,探討兩者相互作用對膀胱癌血管生成的影響及分子機(jī)制。方法1.以pCMV-3xflag-ANG為模板,用高保真的Pyrobest聚合酶進(jìn)行突變反應(yīng)得到pCMV-3xflag-ANGH13R和pCMV-3xflag-ANGH114R。以pcDNA3.1-RI為模板,pGEX-4T-1為載體擴(kuò)增對序列,得到pGEX-4T-RI質(zhì)粒用于后續(xù)的相互作用實(shí)驗(yàn)。2.胞內(nèi)的相互作用采用免疫共沉淀、免疫熒光共定位法。胞外的相互作用采用GST融合蛋白下拉實(shí)驗(yàn)。3.將pEGFP-C1-ANGH13R、pEGFP-C1-ANGH114R、pEGFP-C1-ANG質(zhì)粒(本課題組構(gòu)建保存)轉(zhuǎn)染人膀胱癌BIU87細(xì)胞,檢測RI與ANG及其突變體相互作用對BIU87細(xì)胞的影響及介導(dǎo)PI3K/AKT/mTOR信號通路蛋白的影響。4.雞胚絨毛尿囊血管實(shí)驗(yàn)和小管實(shí)驗(yàn)檢測ANG及其突變體對人膀胱癌血管形成的影響。應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測過表達(dá)RJ對ANG及其突變體促rRNA轉(zhuǎn)錄活性的影響。5.腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、腫瘤中微血管等通過建立BALB/C裸鼠模型檢測。結(jié)果1.通過酶切和測序后,pGEX-4T-RI、pCMV-3 X flag-ANGH13R、 pCMV-3×flag-ANGH114R質(zhì)粒構(gòu)建成功。2.ANG及其突變體與對在人膀胱癌BIU87細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外都存在相互作用。3.通過轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株pEGFP-C1-ANGH13R, pEGFP-C1-ANGH114R(本課題組構(gòu)建保存)后,檢測AKT/PI3K/mTOR信號通路蛋白,結(jié)果表明各主要靶蛋白有明顯變化。4.雞胚絨毛尿囊(CAM)血管形成實(shí)驗(yàn)和小管形成實(shí)驗(yàn)檢測ANG及其突變體均可促進(jìn)腫瘤血管的形成。雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測RI可抑制核糖體rRNA(rRNA)的轉(zhuǎn)錄活性。5. BALB/c裸鼠模型顯示,ANG及其突變體可促進(jìn)移植瘤的生長和新生血管形成。結(jié)論1.ANG及其突變體與對在體內(nèi)外均存在相互作用。2.ANG及其突變體可促進(jìn)膀胱癌腫瘤血管形成。3.過表達(dá)RI抑制rRNA的轉(zhuǎn)錄活性。4.ANG及其突變體與RI的相互作用,介導(dǎo)和調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞BIU87的PI3K/AKT/mTOR信號通路可影響膀胱癌的腫瘤血管生長及腫瘤細(xì)胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：血管生成素 血管生成 核糖核酸酶抑制因子 蛋白相互作用 突變體
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.14
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-14
• 第一部分 突變質(zhì)粒構(gòu)建及鑒定14-18
• 1 材料14
• 2 方法14-16
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-18
• 第二部分 ANG及其突變體與對蛋白相互作用的研究18-25
• 1 材料18
• 2 方法18-21
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-25
• 第三部分 ANG及其突變體對膀胱癌體內(nèi)外血管生成的影響及分子機(jī)制研究25-34
• 1 材料25
• 2 方法25-29
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-34
• 第四部分 ANG及其突變體對BALB/C裸鼠膀胱癌移植瘤生長和自發(fā)性轉(zhuǎn)移的影響34-40
• 1 材料34
• 2 方法34-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-40
• 討論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 文獻(xiàn)綜述45-56
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 致謝56-57
• 碩士期間發(fā)表的論文57

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 朱恒奇,徐秀英,陳琳,黃培堂;重組人組織型纖溶酶原激活劑及其突變體的溶血栓研究[J];中國生化藥物雜志;2003年06期

2 周紅霞;周梅仙;吳潔;胡卓逸;劉景晶;;人源血管內(nèi)皮生長因子突變體的克隆、分離純化及活性研究[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年03期

3 白常樂;;鼠疫桿菌的誘導(dǎo)維生素依賴突變體的發(fā)生率[J];地方病譯叢;1979年03期

4 任啟生;;IL-6的結(jié)構(gòu)與功能分析[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);1991年03期

5 吳松泉，劉麗，歐陽應(yīng)斌，，黃培堂，梁植權(quán);重組人腫瘤壞死因子突變體的構(gòu)建和表達(dá)[J];溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1996年03期

6 王瀟,沈心亮,應(yīng)蓮芳,蘇彩霞,吳敏,鄭榮梁;基因重組人腫瘤壞死因子-α突變體的構(gòu)建[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1999年02期

7 白應(yīng)林,王瑋,陳玲愛,翁曼麗,馬志方;淀粉酶生產(chǎn)菌(Bacillus subtilis BF-7658)孢子形成突變體的分離和特性[J];遺傳學(xué)報(bào);1977年04期

8 胡忠,彭麗萍,蔡永華;一個(gè)黃綠色的水稻細(xì)胞核突變體[J];遺傳學(xué)報(bào);1981年03期

9 劉寶英,聶尚海,杜清友,丁紅梅,劉農(nóng)樂,王會(huì)信;人胰島素樣生長因子1突變體的構(gòu)建、表達(dá)及其鑒定[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;1999年02期

10 梁秋娟;張華莉;涂自智;肖獻(xiàn)忠;;熱休克轉(zhuǎn)錄因子1及其突變體的研究進(jìn)展[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2008年03期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 易小平;陳芳遠(yuǎn);盧升安;周開達(dá);;空間環(huán)境誘發(fā)水稻突變體特異親和性研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（上冊）[C];1999年

2 戴新賓;張榮銑;許長成;匡廷云;;水稻葉綠素b減少突變體的光抑制特性研究[A];全國植物光合作用、光生物學(xué)及其相關(guān)的分子生物學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2001年

3 金衛(wèi)華;曹軍衛(wèi);姚保利;雷銘;;細(xì)菌視紫紅質(zhì)多突變體的構(gòu)建及其功能研究[A];第二屆中國青年學(xué)者微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

4 胡天岑;王奎鋒;李連維;陳靜;蔣華良;沈旭;;SARS冠狀病毒3CL蛋白酶突變體的結(jié)構(gòu)對其聚合-活性關(guān)系的提示[A];中國晶體學(xué)會(huì)第四屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議學(xué)術(shù)論文摘要集[C];2008年

5 李鵬麗;王寧寧;;微型番茄黃葉突變體的獲得與鑒定[A];中國植物生理學(xué)會(huì)第十次會(huì)員代表大會(huì)暨全國學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2009年

6 程備久;mail.hf.ah.cn);李展;mail.hf.ah.cn);朱蘇文;mail.hf.ah.cn);李純;mail.hf.ah.cn);李培金;mail.hf.ah.cn);謝傳曉;mail.hf.ah.cn);;玉米對生突變體的遺傳與分子標(biāo)記研究[A];第八屆全國激光生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨《激光生物學(xué)》創(chuàng)刊十周年慶祝會(huì)會(huì)議指南及論文摘要[C];2002年

7 許曉明;張榮銑;;水稻葉綠素缺乏突變體的吸收光能分配特性[A];中國植物生理學(xué)會(huì)全國學(xué)術(shù)年會(huì)暨成立40周年慶祝大會(huì)學(xué)術(shù)論文摘要匯編[C];2003年

8 林植芳;彭長連;徐信蘭;林桂珠;張景六;;兩個(gè)新的水稻缺葉綠素b突變體光合作用的熱穩(wěn)定性[A];中國植物生理學(xué)會(huì)第九次全國會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

9 魏玉波;梁乃亭;布哈麗且木;;水稻永綠突變體及應(yīng)用價(jià)值[A];中國科協(xié)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集——核科技、核應(yīng)用、核經(jīng)濟(jì)論壇[C];2005年

10 夏宗薌;鄔鍵;甘建華;黃仲賢;;細(xì)胞色素b_5的一系列突變體的晶體結(jié)構(gòu)及其與性質(zhì)、功能的關(guān)系[A];第九次全國生物物理大會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2002年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 記者 張克;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)水稻衰老調(diào)控分子機(jī)制[N];科技日報(bào);2014年

2 錢海豐 編譯;植物耐鹽基因的研究[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

3 記者 馮衛(wèi)東;美發(fā)現(xiàn)能控制小鼠胖瘦的基因[N];科技日報(bào);2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李成;誘導(dǎo)超氧化物歧化酶錯(cuò)誤折疊的因素及其分子機(jī)制[D];武漢大學(xué);2012年

2 張子棟;透明顫菌血紅蛋白及其突變體蛋白對芳香族污染物清除作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

3 Syed Noor Muhammad Shah;黃瓜品系9930誘導(dǎo)突變體的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

4 康樂群;家蠶新突變體4齡幼蟲致死基因的定位克隆及功能研究[D];江蘇科技大學(xué);2015年

5 史貴霞;大豆子葉折疊突變體cco的轉(zhuǎn)錄組分析及相關(guān)基因的功能研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 胡方;人腫瘤壞死因子α30和42位氨基酸突變體結(jié)構(gòu)與生物活性分析[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

7 郭笑;谷胱甘肽過氧化物酶突變體及其模擬物的表達(dá)與表征[D];吉林大學(xué);2015年

8 張所兵;兩個(gè)水稻株高突變體變異機(jī)制的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

9 邵繼榮;水稻溫敏失綠突變體冷激應(yīng)答的細(xì)胞與分子機(jī)理研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 任學(xué)良;水稻低植酸突變體籽粒的品質(zhì)與發(fā)育特性及相關(guān)分子遺傳學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林婷婷;水稻窄葉白化突變體nul1(t)的鑒定與基因定位[D];西南大學(xué);2015年

2 趙艷娜;擬南芥生長素合成YUCCA基因參與調(diào)控雄配子發(fā)育的機(jī)理研究[D];上海師范大學(xué);2015年

3 朱環(huán)環(huán);兩個(gè)水稻苗期致死突變體abl25和ygll遺傳分析與基因定位[D];上海師范大學(xué);2015年

4 李紅;采用分子動(dòng)力學(xué)模擬探究VWF-A1突變體G561S的親和力變化機(jī)制[D];華南理工大學(xué);2015年

5 谷慧英;芥菜開花整合子SOC1與開花抑制因子SVP、FLC蛋白相互作用[D];西南大學(xué);2015年

6 蔣發(fā)明;斑馬魚消化器官突變體的遺傳篩選和Ubel蛋白的原核表達(dá)純化及抗體生產(chǎn)[D];西南大學(xué);2015年

7 王蓓華;支架蛋白RACK1及其突變體與氯離子通道蛋白1(CLIC1)相互作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

8 張玲;水稻矮化并花發(fā)育異常突變體dwarf and deformed flower 2 (ddf2)的基因定位與候選基因分析[D];西南大學(xué);2015年

9 徐金剛;水稻光氧化突變體812HS葉片光合和抗氧化特性的研究[D];南京師范大學(xué);2015年

10 畢煬輝;ZNF750基因S70X突變體在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的功能研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：1003136