發(fā)布時間：2018-01-24 12:56

  本文關(guān)鍵詞： 鄰苯二甲酸二丁酯 鄰苯二甲酸單丁酯 類固醇激素合成 vimentin NF-κB　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景與目的鄰苯二甲酸酯(phthalates,PAEs)是一類重要的環(huán)境污染物,在全球環(huán)境中已達到普遍檢出的程度,人群暴露非常普遍。鄰苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)是污染最嚴重、機體內(nèi)暴露水平最高的PAEs之一。DBP活性代謝產(chǎn)物為鄰苯二甲酸單丁酯(monobutyl phthalate,MBP)。前期的研究主要針對DBP對雄性生殖發(fā)育的干擾作用,但關(guān)于DBP/MBP暴露下對雌性生殖發(fā)育影響的研究卻很少,尤其是低劑量下暴露。本次研究探討低劑量鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)對類固醇激素合成的刺激作用以及NF-κB-vimentin信號通路在DBP干擾類固醇激素合成中的作用。方法1.21天齡雌性SD大鼠按體重隨機分成7組,分別是溶劑對照組、注射對照組、1mg/kg/dayDBP、10mg/kg/dayDBP、500mg/kg/dayDBP、PDTC 組以及1mg/kg/day DBP+PDTC組。從出生后21天開始處理直到出生后33天,共13天。第34天麻醉取血,動物處死后取卵巢、子宮等組織,稱重后,一部分保存子宮和卵巢保存于4%多聚甲醛中,另外一部分置于-80℃保存。2.原代培養(yǎng)卵巢顆粒細胞(mGCs)作為體外細胞模型,免疫熒光細胞化學(xué)法測定細胞純度。3.CCK-8法測定mGCs細胞活力。4.ELISA檢測大鼠血清和細胞培養(yǎng)液上清中孕酮和雌二醇水平。5.免疫組織化學(xué)檢測大鼠卵巢組織中vimentin表達。6.免疫熒光細胞化學(xué)染色聯(lián)合激光共聚焦法觀察mGCs vimentin表達。7.qRT-PCR測定大鼠組織和mGCs細胞中vimentin mRNA表達。8.Western Blot 測定大鼠組織和 mGCs 細胞中 vimentin、NF-κB p65 和 p-p65蛋白表達。9.應(yīng)用RNAi技術(shù)下mGCs細胞中vimentin的表達,再用MBP(10~(-10)M)刺激mGCs,觀察mGCs類固醇激素合成的改變。10.EMSA法檢測NF-1κB與vimentin啟動子區(qū)域結(jié)合活力。結(jié)果1.大鼠子宮在1mg/kg/day DBP暴露后,體積和重量明顯高于對照組(P0.05)。2.mGCs 的純度為(94.7±1.9)%。3.與對照組相比,mGCs 活性在 10~(-12)、10~(-11)、10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7)、10~(-6)M MBP暴露后,均沒有明顯變化。4.與對照組相比,大鼠在1mg/kg/day和10mg/kg/dayDBP暴露后,血清孕酮合成明顯增加,500mg/kg/dayDBP暴露后,則明顯減少(P0.05)。而血清雌二醇合成各劑量組均明顯下降。相對于對照組,mGCs在10~(-10)M MBP暴露后,孕酮合成明顯增加(P0.05),而雌二醇合成無明顯改變。5.1mg/kg/day DBP暴露后,大鼠卵巢vimentin蛋白和mRNA表達量明顯高于對照組。500mg/kg/day DBP暴露下,vimentin蛋白和mRNA表達量明顯低于對照組(P0.05)。mGCs暴露于10~(-10)MMBP,vimentin蛋白表達量相對于對照組明顯增加(P0.05)。6.當抑制mGCs vimentin表達后,孕酮合成量也隨之減少(P0.05)。7.大鼠注射PDTC明顯下調(diào)大鼠卵巢vimentin表達和孕酮合成,并阻滯DBP對vimentin表達和孕酮合成的刺激作用(P0.05)。BAY11-7082明顯降低mGCs vimentin表達和孕酮合成,并阻滯MBP對vimentin表達和孕酮合成的刺激作用(P0.05)。8.EMSA實驗結(jié)果表明,MBP(10~(-10)M)增加NF-1κB與vimentin啟動子區(qū)域結(jié)合活性(P0.05)。結(jié)論低劑量DBP/MBP可以通過誘導(dǎo)p-p65表達上調(diào),從而進一步刺激vimentin表達和孕酮合成增加,最終促進雌性生殖發(fā)育。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Phthalate ( PAEs ) is a kind of important environmental pollutant , which has been generally detected in the global environment . The population exposure is very common . Dibutyl phthalate ( di - n - butyl phthalate , DBP ) is one of the most polluted and most exposed PAEs in the body . The DBP active metabolite is monobutyl phthalate ( MBP ) . The effects of DBP on the development of female reproductive development were studied . The effects of low dose dibutyl phthalate ( DBP ) on steroid hormone synthesis and the effect of NF - 魏B - vimentin signaling pathway on the synthesis of vimentin were studied . Conclusion Low - dose DBP / MBP can increase the expression of vimentin and increase the synthesis of progesterone , and eventually promote the development of female reproductive development .

【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張農(nóng),張月娥,陳忠年,張秀榮,李茂深;VIMENTIN AND TUMOR DIAGNOSIS[J];Chinese Journal of Cancer Research;1991年01期

2 孫志福,高鐘禹,張傳森,王風(fēng)榮,魏守禮;Vimentin在正常及腫瘤組織中分布的研究[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;1991年02期

3 姚樂申;張保國;李燕;江春平;袁毅路;;vimentin在三陰性乳腺癌中的表達及臨床意義[J];實用老年醫(yī)學(xué);2012年06期

4 ;Effect of dl-praeruptorin A on desmin and vimentin content in rat ischemia/reperfusion myocardiocytes[J];Chinese Medical Journal;2007年24期

5 趙芯梅;智發(fā)朝;楊小明;呂超藍;王煥景;康濱;呂有勇;劉斯奇;姜泊;;結(jié)腸黏膜vimentin降解在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機制中的作用[J];現(xiàn)代消化及介入診療;2009年03期

6 包陸君;高宜錄;王君宇;宋奎;;vimentin在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年24期

7 ;mRNA Expression of Vimentin Gene in Lens of Transgenic Mouse and DNA Amplification in Human Cataracts[J];眼科學(xué)報;1995年03期

8 ;Hypoxia-inducible factor-1α induces the epithelial-mesenchymal transition of human prostatecancer cells[J];Chinese Medical Journal;2006年09期

9 楊秀麗,郝燕生,鄭永軍,李玉松,王文勇;Vimentin在正常家兔與白內(nèi)障家兔眼晶體的分布[J];美中國際眼科雜志;2001年02期

10 呂海俠,劉勇,李敏杰,肖新莉,丁海燕,凌鳳東;人腦不同發(fā)育期vimentin陽性細胞的分布[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年14期

相關(guān)會議論文 前10條

1 ;Epithelial-mesenchymal transition of oral epithelial cells immortalized by HPV16 E6 and E7[A];2004年上海市口腔醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2004年

2 ;Alterations in the intracellular Ca~(2+) concentration and vimentin in endothelial cells following tumor cell-endothelial cell interactions[A];中國藥理學(xué)會第十一屆全國化療藥理學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2012年

3 盧一平;楊立;;The Explorative Study of Expression and Drug Intervention of Vimentin, Anti-Vimentin antibodies, C4d in Chronic Allograft Nephropathy[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

4 王，

本文編號：1460094