【摘要】： 血管性癡呆(vascular dementia, VD)是由各種腦血管病引起的獲得性智能及認知功能損害綜合征,屬神經內科的常見病、多發(fā)病。隨著社會人口的日益老齡化和腦血管病發(fā)病率以及對疾病診斷水平的不斷提高,VD的發(fā)病呈迅速增長趨勢,越來越嚴重地威脅著老年人的身心健康,給社會和家庭帶來沉重的負擔。目前VD的發(fā)病機制尚不清楚,也無特殊有效的治療方法,因此探討和闡明VD的發(fā)病機制,對于臨床制定更加合理的治療方案,更好改善VD患者的生存質量,具有重要的價值和理論意義。 事件相關電位(event-related potential,ERP)是一種較為客觀地反映大腦功能狀況的電生理檢測技術,涉及從刺激到認知加工過程,不包括反應決定和反應執(zhí)行,是對刺激進行識別和編碼后形成新的信息并儲存的過程,可以作為輔助診斷精神、神經性認知功能損害性疾病(如臨床早期及亞臨床期癡呆等),評估病程、療效及預后的重要指標。ERP主要由易受物理刺激特性影響的“外源性成分”如P1、N1、P2和不受刺激物理特性影響的“內源性成分”N2、P3組成�，F(xiàn)在研究最多、臨床應用最廣泛的就是N2、P3電位的研究。本研究證實應用小鼠,在非麻醉狀態(tài)下采取皮下插入電極的方法進行ERP電位的測試,亦可為動物的實驗研究提供客觀的、無創(chuàng)性的、定量的、有價值的電生理檢測手段。本實驗通過對小鼠進行反復雙側頸總動脈結扎-再灌注,制成VD的小鼠模型,并應用跳臺試驗、水迷宮試驗對正常組、假手術組及VD模型組小鼠進行了學習、記憶成績測定,證明多奈哌齊可改善小鼠的學習、記憶功能,亦可影響ERP電位。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)家族廣泛分布于細胞漿內,是一族含有絲氨酸/蘇氨酸殘基的蛋白激酶是將細胞外刺激信號傳遞到細胞核,引起細胞生物學反應的重要信號傳導系統(tǒng),是細胞內信號轉導的重要通路。MAPK家族的信號轉導通路,采用三級激酶級聯(lián)傳遞信號。細胞外信號調節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、C-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK),又稱為應激激活的蛋白激酶(stress activate protein kinase,SAPK)、p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase, p38 MAPK)均為MAPK家族成員,不同的細胞外刺激活化不同的MAPK通路,作用于不同的底物,引起特定的細胞生理反應。這些信號通路間相互作用在體內構成一個復雜的信號網絡。 ERK信號通路在生長因子介導的細胞增殖過程中發(fā)揮著重要作用,JNK/SAPK及p38 MAPK多在應激條件下激活,研究表明,這兩條通路的激活可能與細胞凋亡及應激時的多種病理生理過程有關。但二者激活后的生物學意義,尚未完全澄清,MAPK信號通路在小鼠的學習、記憶功能中的調節(jié)機制,VD小鼠JNK, ERK, p38 MAPK的變化目前尚未見報道。目前認為,多奈哌齊通過(1)可逆性抑制乙酰膽堿酶對乙酰膽堿的降解,增加乙酰膽堿含量,后者作用于毒蕈堿乙酰膽堿受體(M受體)可以激活ERK的表達,增加學習、記憶功能。(2)降低N-甲基-D-門冬氨酸(N-methyl-D-aspartate acid,NMDA)受體亞型NR1的表達,提高海馬NR2B的表達,有助于調整學習和記憶。(3)多奈哌齊可增加腦血流量,減輕淀粉樣蛋白的神經毒性及減輕自由基損傷導致的神經變性作用等,亦有助于VD小鼠的治療。(4)多奈哌齊可能是通過減少錐體細胞損傷,保護細胞正常的神經電生理功能,使ERP潛伏期較低灌注大鼠有所縮短。研究認為,多奈哌齊可明顯改善大鼠的學習、記憶功能。但對于VD小鼠JNK, ERK,p38 MAPK的變化的影響及VD小鼠ERP的作用目前尚未見報道。 本實驗應用免疫組化技術、原位雜交技術對VD小鼠海馬細胞的ERK、JNK、p38 MAPK的表達進行測定,并將各組跳臺試驗、水迷宮試驗的學習、記憶成績與海馬細胞的ERK、JNK、p38 MAPK的表達進行相關性分析,結果證明了正常組、假手術組無論是學習、記憶成績或是MAPK信號轉導通路均與VD模型組小鼠有顯著性差異,VD模型組小鼠學習、記憶功能減退,JNK,p38 MAPK增加,兩者成正相關,而ERK降低,成負相關,證明了MAPK信號轉導通路參與了小鼠的學習、記憶功能的機制。而多奈哌齊的應用可以通過減少JNK,p38 MAPK增加,增加ERK的表達改善VD小鼠學習、記憶功能。 本實驗的目的是進一步探討VD小鼠ERP的變化、MAPK家族在VD發(fā)病中的表達的變化及其機制,多奈哌齊對其影響。 1 VD小鼠模型的建立及VD小鼠學習、記憶成績的測試 1.1目的:研究VD小鼠模型的建立及VD小鼠學習、記憶成績的測試方法,各組分別進行跳臺試驗及水迷宮試驗,測試學習成績、試記憶成績,為進一步研究VD發(fā)病機制、防治措施及評價療效奠定基礎。 1.2方法: 1.2.1動物分組與模型制備:實驗動物選用3月齡雄性昆明小鼠306只,購自河北醫(yī)科大學實驗動物中心,許可證號:SCXK(冀)2003-1-003,清潔級2級,體重(32.5±2.5)g,適應性飼養(yǎng)1周,然后將小鼠隨機分為正常對照組(n=78)、假手術組(n=77)、VD模型組(n=75)、多奈哌齊組(n=76)。采用頸總動脈線結反復缺血再灌注法制備模型,假手術組僅暴露雙側頸總動脈而不結扎,且尾部不放血。多奈哌齊組為制備模型術后第2天,給予鹽酸多奈哌齊灌胃,劑量3mg·3，

本文編號：2625009