目的對金黃色葡萄球菌（簡稱金葡菌）一種新型金屬磷酸酶（metallophosphatase,MPP）SA1662進(jìn)行遺傳特征分析及生物學(xué)功能鑒定。方法從金葡菌基因組DNA中克隆SA1662基因,通過序列比對和構(gòu)建進(jìn)化樹分析其遺傳特征;構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)的重組蛋白經(jīng)Ni柱純化后,測定酶活性。應(yīng)用同源重組技術(shù)構(gòu)建SA1662基因缺失株,分析SA1662基因缺失對金葡菌生長、萬古霉素敏感性、細(xì)菌自溶性和細(xì)菌生物菌膜形成的影響,探討SA1662的生物學(xué)功能。結(jié)果 SA1662蛋白具有MPP類蛋白結(jié)構(gòu)域,并含有特征性金屬離子結(jié)合位點(diǎn),與金葡菌和施維茨葡萄球菌中相關(guān)蛋白有更近的親緣關(guān)系。該蛋白酶活性依賴于Mg²⁺和Mn²⁺,特別是Mg²⁺。與野生型菌株相比,SA1662基因缺失后,細(xì)菌生長速度減慢,萬古霉素敏感性、TritonX-100誘導(dǎo)下的細(xì)菌自溶性和細(xì)菌生物菌膜形成能力均下降。結(jié)論 SA1662蛋白為一種新型的金葡菌MPP,在細(xì)菌抗逆性中起著重要作用。 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2020,33(02)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

金葡菌SA1662和不同細(xì)菌已知金屬磷酸酶的比對

SA1662基因缺失株對萬古霉素的敏感性

0 SA1662基因缺失株的自溶性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]金黃色葡萄球菌重要毒力因子的功能及其抑制劑研究進(jìn)展[J]. 陳菲菲,狄紅霞,藍(lán)樂夫.  科學(xué)通報(bào). 2013(36)



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