本文設(shè)計(jì)合成了氟化超支化聚酰胺-胺并研究其作為流感DNA疫苗遞送載體的能力。首先采用邁克爾加成反應(yīng)合成超支化聚酰胺-胺聚合物[hyperbranched poly(amido amine)s,HP],并進(jìn)行氟化修飾(fluorinated HP,F-HP)通過設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增目的基因,構(gòu)建流感病毒PR8的核蛋白(nucleoprotein,NP)基因真核表達(dá)質(zhì)粒,作為DNA疫苗,F-HP與NP質(zhì)粒通過靜電作用形成納米復(fù)合物(F-HP/NP)。結(jié)果表明:所合成的HP的分子質(zhì)量為59.7 kDa多分散系數(shù)(polydispersity index,PDI)為2.67,F-HP中氟元素的含量為20%(質(zhì)量比,w/w),聚合物能與NP質(zhì)粒絡(luò)合形成球形的納米粒。聚合物與DNA質(zhì)量比為5～10時(shí),納米復(fù)合物的粒徑分布在100 nm左右,并隨質(zhì)量比的升高而減小。氟化修飾有利于提高納米復(fù)合物的細(xì)胞攝取及溶酶體逃逸能力,進(jìn)一步提高NP的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平。體內(nèi)免疫實(shí)驗(yàn)表明,與HP/NP納米復(fù)合物相比,氟化修飾的F-HP/NP納米復(fù)合物對CD8~+T細(xì)胞具有更強(qiáng)的免疫應(yīng)答誘導(dǎo)效應(yīng)。以上結(jié)果說明氟化修飾的超支化聚酰胺-胺作為DNA疫苗載體具有可行性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)揚(yáng)州大學(xué)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會批準(zhǔn)。
【文章目錄】：
材料與方法
結(jié)果
    1 超支化聚酰胺-胺陽離子聚合物的合成、氟化修飾及表征
    2 流感病毒PR8的NP基因重組質(zhì)粒構(gòu)建
    3 聚合物/質(zhì)粒DNA納米復(fù)合物的制備及表征
    4 細(xì)胞毒性
    5 細(xì)胞攝取與溶酶體逃逸
    6 免疫熒光鑒定NP蛋白的表達(dá)
    7 體內(nèi)檢測CD8+T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)
討論

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本文編號：2871353