本文關(guān)鍵詞：程序化冷凍和玻璃化冷凍技術(shù)實(shí)用性的對(duì)比研究

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【摘要】：1978年,世界第一例試管嬰兒Louis Brown誕生的消息傳來(lái),世界各國(guó)的人們集聚無(wú)比興奮的心情與追逐先進(jìn)的欲望,紛紛開(kāi)始開(kāi)展這項(xiàng)技術(shù)。隨著輔助生育技術(shù)(assisted reproductive technology,ART)的發(fā)展,胚胎冷凍技術(shù)已經(jīng)成為其發(fā)展不可分割的一部分。盡管人類(lèi)的胚胎低溫保存已然成為人類(lèi)輔助生殖中公認(rèn)的技術(shù),然而植入前胚胎在哪一個(gè)階段實(shí)施低溫冷凍儲(chǔ)藏的效果最佳尚未明了。程序化慢速冷凍法是一項(xiàng)較成熟的冷凍技術(shù),廣泛的應(yīng)用于輔助生殖領(lǐng)域,而目前玻璃化冷凍作為一種新的冷凍保存方法,與傳統(tǒng)的程序慢速冷凍相比顯得更加簡(jiǎn)單快速有效,其在復(fù)蘇率、囊胚形成率、囊胚孵出率等方面都具有一定的優(yōu)勢(shì)。而且玻璃化冷凍技術(shù)應(yīng)用的同時(shí)還減少了實(shí)驗(yàn)室的工作量、降低了成本,最大限度的提高了每次促排卵/取卵周期可供嘗試的妊娠次數(shù),顯示出了更強(qiáng)的實(shí)用性。目的:本實(shí)驗(yàn)以小鼠4細(xì)胞、8細(xì)胞及囊胚胚胎作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,以Cryoloop為載體,分別進(jìn)行兩種不同的冷凍方式,探討和對(duì)比兩種冷凍方法對(duì)于不同時(shí)期的小鼠胚胎冷凍效果。方法:1昆明小鼠常規(guī)促排卵,體外受精,分別于HCG后48~50小時(shí)、60~62小時(shí)和85~96小時(shí)取4細(xì)胞、8細(xì)胞和3至4期囊胚進(jìn)行程序化和玻璃化冷凍。2玻璃化冷凍與復(fù)蘇:胚胎首先用預(yù)平衡液7.5%(v/v)EG、7.5%(v/v)DMSO平衡2分鐘;然后轉(zhuǎn)入15%(v/v)EG、15%(v/v)DMSO、0.65M sucrose的玻璃化冷凍液中,時(shí)間控制在30秒內(nèi)。胚胎復(fù)蘇采用0.33M、0.2M、0M sucrose復(fù)蘇液,梯度稀釋逐步洗脫冷凍保護(hù)劑,平衡時(shí)間分別為2min、3min和5min。3程序化冷凍與復(fù)蘇:胚胎在冷凍液中處理后裝入麥管,置入冷凍儀,起始溫度20℃,以-2℃/min的速度降至-7℃,在-7℃保持5分鐘,人工植冰,保持10分鐘。以-0.3℃/min的速度降至-35℃,以-50℃/min的速度降至-150℃,從程序降溫儀中取出麥管放入液氮中,在液氮內(nèi)將麥管轉(zhuǎn)入麥管盒中,放入胚胎保存液氮。結(jié)果:1.四細(xì)胞組程序化冷凍了104枚胚胎,解凍后存活97,存活率93.2%(97/104),繼續(xù)培養(yǎng)到72小時(shí)后,囊胚形成率為84.5%(82/97),囊胚孵出率65.9%(54/82)。玻璃化冷凍了118枚胚胎,解凍后存活109枚,存活率92.3%(109/118),胚胎繼續(xù)培養(yǎng)到72小時(shí)后,囊胚形成率為84.5(82/97),囊胚孵出率65.9%(54/82)。兩組4細(xì)胞胚胎在存活率,囊胚形成率,囊胚孵出率的差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)2.八細(xì)胞組程序化冷凍了110枚胚胎解凍后存活90枚,存活率81.8%,培養(yǎng)至72小時(shí)后,囊胚形成率為84.4%(76/90),囊胚孵出率為76.3%(58/76)。玻璃化冷凍了112枚胚胎,解凍后存活102枚,存活率91.1%,胚胎培養(yǎng)到72小時(shí)后,囊胚形成率為93.2%(97/112),囊胚孵出率為88.7%(86/97)。兩組8細(xì)胞胚胎在存活率,囊胚形成率,囊胚孵出率的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義囊胚組程序化冷凍了101枚胚胎,解凍后存活83枚,存活率82.2%(83/101),凍融后囊胚孵出率為61.4%(51/83)。玻璃化冷凍了92枚胚胎,解凍后存活85枚,存活率92.4%。凍融后囊胚孵出率為82.4%(70/85)。兩組囊胚分別進(jìn)行玻璃化冷凍與程序化冷凍并解凍后在存活率,囊胚孵出率的差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義結(jié)論:玻璃化冷凍技術(shù)比程序化冷凍技術(shù)在冷凍8細(xì)胞和囊胚胚胎方面更有優(yōu)勢(shì),更具有實(shí)用性。
【關(guān)鍵詞】：玻璃化冷凍 四細(xì)胞 八細(xì)胞 桑椹胚 囊胚 胚胎 發(fā)育程序化冷凍 植冰
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R714.8
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-23
• 附表23-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 綜述 玻璃化冷凍技術(shù)與程序化冷凍技術(shù)在人類(lèi)輔助生殖技術(shù)中的地位32-42
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 致謝42-43
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷43

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1 馮貴雪;陳煥華;張波;;玻璃化冷凍技術(shù)臨床應(yīng)用的安全性[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2014年01期

2 叢晶;吳效科;;玻璃化冷凍技術(shù)的研究進(jìn)展[J];國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2008年03期

3 丁穎;鄧成艷;;玻璃化冷凍技術(shù)在保存人類(lèi)不同發(fā)育階段卵細(xì)胞和胚胎中的應(yīng)用[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2008年03期

4 張靜;黃筱金;曾芳;;胚胎玻璃化冷凍技術(shù)治療不孕癥1例[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年08期

5 龐敏;張坤;滕雪峰;李維娟;陽(yáng)娟;陳博;;玻璃化冷凍技術(shù)在輔助生殖中的應(yīng)用[J];新疆醫(yī)學(xué);2012年11期

6 翁寧;孫曉玲;程?hào)|凱;田芝瑩;許薇;周玉言;;囊胚期胚胎玻璃化冷凍技術(shù)的臨床應(yīng)用研究(附一例成功分娩報(bào)道)[J];生殖醫(yī)學(xué)雜志;2006年06期

7 林春蓮;;人類(lèi)卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的研究進(jìn)展[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2011年04期

8 王俊霞,朱桂金,魏玉蘭,王雁林;應(yīng)用胚胎玻璃化冷凍技術(shù)獲得臨床妊娠及分娩一例[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2004年02期

9 陳莉;劉琦;;玻璃化冷凍技術(shù)在人類(lèi)輔助生殖中的應(yīng)用[J];中華男科學(xué)雜志;2010年06期

10 孫迎利;張敏;常秀峰;張建平;朱愛(ài)萍;馬曉偉;余裕爐;;鋼絲環(huán)法胚胎玻璃化冷凍技術(shù)的初步應(yīng)用[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2010年08期

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1 李游;蘇瓊;伍瓊芳;;玻璃化冷凍技術(shù)在PCOS不孕患者中的臨床應(yīng)用[A];第七次全國(guó)婦科內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 王嵩;卵子的玻璃化冷凍[N];中國(guó)婦女報(bào);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 于曉光;程序化冷凍和玻璃化冷凍技術(shù)實(shí)用性的對(duì)比研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：970681