本文關(guān)鍵詞：不同化學(xué)基團對卵巢癌Skov-3細胞生物學(xué)行為影響的實驗研究

  更多相關(guān)文章： 化學(xué)基團 卵巢癌細胞 自組裝單分子膜 細胞轉(zhuǎn)移

【摘要】：目的：本研究將不同化學(xué)基團(-CH3、-NH2、-OH、-COOH、-SH)接枝于基片上,構(gòu)成帶有不同單一化學(xué)基團的自組裝單分子膜(SAMs),構(gòu)建含有不同化學(xué)基團的細胞微環(huán)境,研究微環(huán)境中不同化學(xué)基團對卵巢癌細胞生長特征及細胞轉(zhuǎn)移的影響,闡明微環(huán)境中化學(xué)基團在卵巢癌發(fā)生和發(fā)展中的作用及機制,為卵巢癌的治療探索一條新途徑。方法：1.體外培養(yǎng)人卵巢癌細胞Skov-3,與攜帶不同的化學(xué)基團(-OH、-COOH、-NH2、-SH、-CH3)的自組裝單分子膜(self-assembled monolayers, SAMs)共培養(yǎng)。2.通過接觸角實驗反應(yīng)不同化學(xué)基團的親疏水性。3.掃描電鏡(Scanning Electron Microscope, SEM)觀察與攜帶不同的化學(xué)基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞形態(tài)。4. DAPI染色法觀察與攜帶不同的化學(xué)基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞在60min的早期粘附情況。5.細胞骨架染色觀察與攜帶不同的化學(xué)基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞肌動蛋白粘著斑的變化。6.SKOV-3細胞與攜帶不同的化學(xué)基團共培養(yǎng)5天,MTT法檢測其細胞增殖率。7.檢測不同化學(xué)基團的細胞毒性：Calcein/PI染色觀察與攜帶不同的化學(xué)基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3的死活細胞數(shù)目；LDH檢測細胞培養(yǎng)上清中LDH的酶活性,來檢測細胞毒性8.流式細胞儀檢測與攜帶不同的化學(xué)基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞凋亡。9.流式細胞儀檢測與攜帶不同的化學(xué)基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞周期。10. Transwell小室檢測與攜帶不同的化學(xué)基團共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細胞遷移能力。11.實時熒光定量PCR (qRT-PCR)檢測與細胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因E-cadherin和β-catenin的表達。成果：1.接觸角實驗表明-OH為極親水性基團,-COOH和-NH2為親水性基團,-CH3為極疏水性基團。2.掃描電鏡顯示在-CH3表面Skov-3細胞鋪展?fàn)顟B(tài)差,呈球形；相對于其他基團,-NH2表面細胞呈多邊形,鋪展面積大,細胞核增大,細胞間相互連接。3.-COOH、-NH2基團表面的SKOV-3的DAPI細胞染色數(shù)目均明顯多于對照組(P0.05)。4.細胞骨架染色顯示-CH3干預(yù)后的Skov-3細胞形態(tài)及邊界不清,膜周染色變淡,細胞核區(qū)模糊；而-COOH和-NH：表面上的細胞呈多邊形。5.MTT實驗結(jié)果表明-CH3表面卵巢癌SKOV-3細胞增殖明顯受到抑制(P0.01),NH2可促進細胞增殖。6. Calcein/PI染色及LDH實驗結(jié)果提示：-SH、-CH3對卵巢癌Skov-3具有細胞毒性；7.-CH3有促進Skov-3細胞凋亡及死亡的作用(P0.05)。8.與-OH和-CH3共培養(yǎng)的SKOV-3細胞在有絲分裂相(G2/M)的百分比分別是明顯少于對照組(P0.01)。9.與-CH3共培養(yǎng)的Skov-3細遷移數(shù)明顯低于對照組(P0.01)。10.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示：-CH。明顯增加E-cadherin、β-catenin基因表達,而在-NH2組E-cadherin、β-catenin基因表達均明顯下調(diào)。結(jié)論：1.不同化學(xué)基團可影響卵巢癌Skov-3細胞形態(tài)和細胞粘附：親水性基團-NH2表面,卵巢癌Skov-3細胞生長狀態(tài)佳,細胞粘附數(shù)量多；-CH3、-SH、-OH表面細胞形態(tài)差,對細胞粘附無明顯影響。2.不同化學(xué)基團可影響卵巢癌Skov-3細胞的增殖、細胞毒性、細胞周期及凋亡：疏水性基團-CH�？梢种萍拥鞍椎男纬�,抑制細胞的有絲分裂,使卵巢癌Skov-3細胞增殖能力明顯下降,且具有細胞毒性,促進細胞凋亡及死亡；-NH2、-COOH不具有細胞毒性；-NH2促進細胞增殖。3.不同化學(xué)基團可影響卵巢癌Skov-3細胞的遷移：-OH、-CH3抑制卵巢癌Skov-3細胞的遷移能力,-NH2促進細胞遷移。4.不同化學(xué)基團通過EMT過程影響卵巢癌Skov-3細胞生物學(xué)行為：-NH2使E-cadherin、β-catenin基因表達明顯下調(diào),促進Skov-3的發(fā)生發(fā)展。而-CH3組E-cadherin、β-catenin基因的表達明顯上調(diào),CH3可能通過影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化而抑制卵巢癌細胞的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移。本實驗研究提示了-CH3不利于卵巢癌Skov-3細胞的生長,具有抑制其生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的作用,-CH。對于探索設(shè)計新的卵巢癌治療方案具有潛在作用,可能為卵巢癌的治療探索一條新途徑。
【關(guān)鍵詞】：化學(xué)基團 卵巢癌細胞 自組裝單分子膜 細胞轉(zhuǎn)移
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-12
• 第一章 文獻研究12-19
• 1.1 自組裝單分子膜(SAMs)技術(shù)12-13
• 1.1.1 自組裝單分子膜(SAMs)概述12
• 1.1.2 SAMs在生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域的研究12-13
• 1.2 微環(huán)境與腫瘤細胞關(guān)系的研究13-17
• 1.2.1 腫瘤微環(huán)境概述13-14
• 1.2.2 細胞外基質(zhì)對腫瘤細胞的影響14-15
• 1.2.3 微環(huán)境中細胞間的相互作用15-16
• 1.2.4 微環(huán)境中化學(xué)基團與細胞關(guān)系的研究16-17
• 1.3 上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化(EMT)與腫瘤細胞的關(guān)系17-19
• 第二章 實驗研究19-44
• 1.1 實驗材料19-20
• 1.1.1 實驗細胞株19
• 1.1.2 主要實驗儀器19
• 1.1.3 實驗耗材19-20
• 1.1.4 實驗試劑20
• 1.2 實驗方法20-29
• 1.2.1 帶有不同末端化學(xué)基團的SAMs制備20-21
• 1.2.2 SAMs表征檢測21
• 1.2.3 卵巢癌細胞的培養(yǎng)21-22
• 1.2.4 電鏡掃描細胞形態(tài)22-23
• 1.2.5 DAPI染色檢測細胞粘附23
• 1.2.6 染色觀察細胞骨架23-24
• 1.2.7 MTT法檢測細胞X椫陳，
  
  本文編號：961379
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