本文關(guān)鍵詞：過表達人抗菌肽LL37腺病毒構(gòu)建及轉(zhuǎn)染陰道上皮細胞

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【摘要】：背景:LL-37作為唯一存在人體的抗微生物肽,不僅能促內(nèi)皮細胞增殖,而且具有較強的促進血管生成能力,在組織修復(fù)初期的血管生成中起重要作用。目的:構(gòu)建過表達人抗菌肽LL37基因的重組腺病毒,體外轉(zhuǎn)染犬陰道上皮細胞,檢測抗菌肽LL37的表達和分泌情況。方法:PCR法擴增LL37基因片段,構(gòu)建融合綠色熒光蛋白(EGFP)和LL37的重組腺病毒表達質(zhì)粒,限制性內(nèi)切酶酶切和測序法鑒定構(gòu)建的重組腺病毒表達質(zhì)粒,采用HEK293包裝后反復(fù)凍融擴增、純化過表達LL37的腺病毒,終點稀釋法檢測腺病毒滴度。體外分離培養(yǎng)犬陰道上皮細胞,轉(zhuǎn)染過表達LL37腺病毒,分別于轉(zhuǎn)染后1,2,3,5和7 d采用熒光顯微鏡觀察細胞轉(zhuǎn)染情況,ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清液中LL37的分泌表達情況。結(jié)果與結(jié)論:1限制性內(nèi)切酶酶切鑒定與DNA測序證實成功構(gòu)建了GV314-LL37腺病毒表達載體,包裝純化后腺病毒滴度達到3×109 pfu/m L;2犬陰道上皮細胞可在體外成功分離培養(yǎng)并穩(wěn)定傳代;3過表達LL37腺病毒可高效轉(zhuǎn)染陰道上皮細胞,轉(zhuǎn)染24 h后熒光顯微鏡下即可見綠色熒光蛋白表達,隨時間延長表達逐漸增強,轉(zhuǎn)染72 h時表達最強,轉(zhuǎn)染效率達89%;4ELISA證實陰道上皮細胞轉(zhuǎn)染過表達LL37腺病毒后表達分泌LL37,轉(zhuǎn)染后細胞培養(yǎng)上清中LL37表達量顯著高于空白組,表達呈時間依賴性,轉(zhuǎn)染3 d表達最強,轉(zhuǎn)染后7 d仍持續(xù)分泌表達;5結(jié)果說明,成功構(gòu)建了過表達人抗菌肽LL37基因的重組腺病毒,轉(zhuǎn)染犬陰道上皮細胞后高效表達分泌LL37,為構(gòu)建具有抗感染能力和促血管生成的功能性組織工程化陰道奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院婦3科;
【關(guān)鍵詞】： 陰道 上皮細胞 抗菌肽 組織工程 組織構(gòu)建 LL 陰道上皮細胞 腺病毒 轉(zhuǎn)染 國家自然科學(xué)基金
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年項目(81100395)~~
【分類號】：R711
【正文快照】： 0引言Introduction 多種先天及后天因素均可導(dǎo)致陰道組織缺損,如先天性無陰道、兩性畸形、腫瘤術(shù)后造成的陰道缺損等[1]。目前臨床應(yīng)用的陰道成形術(shù)主要有采用皮片或皮瓣、乙狀結(jié)腸、腹膜組織替代修復(fù)陰道缺損。但這些方法會不同程度地導(dǎo)致陰道干澀、攣縮、異味、陰道瘢痕狹

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1 陳雯;賴愛鸞;;孕激素對大鼠陰道上皮細胞的影響[J];吉林醫(yī)學(xué);2012年14期

2 牛戰(zhàn)琴,石一復(fù),祁文瑾;大鼠陰道上皮細胞對白色念珠菌生長抑制作用的初探[J];科技通報;2005年04期

3 牛戰(zhàn)琴;石一復(fù);呂時銘;葉紅;;雌激素對陰道上皮細胞抗念珠菌作用的影響[J];中國病理生理雜志;2006年01期

4 王昌留,姜國厚,王為綱,萬軍力,宋黎;硒對小鼠陰道上皮細胞分裂影響的研究[J];微量元素與健康研究;1998年02期

5 黃學(xué)惠;劉朝暉;廖翌;廖秦平;;陰道上皮細胞先天免疫對陰道假絲酵母菌病影響的研究[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2009年03期

6 牛戰(zhàn)琴,石一復(fù),呂時銘,葉紅;陰道上皮細胞的抗念珠菌作用及雌激素對此的影響[J];現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展;2004年06期

7 蔣寒青,易慶,康白,樸永哲,祝元麗;乳桿菌DM8909對大腸桿菌粘附陰道上皮細胞抑制作用的研究[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;1997年05期

8 劉軍;寧安紅;張蓓蓓;曹婧;;乳酸桿菌代謝產(chǎn)物對一些常見菌黏附陰道上皮細胞的抑制作用的初步探討[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2009年08期

9 薛龍;劉偉;李文芳;章杰;周佳;謝林海;李慶林;;BMSCs分化為陰道上皮細胞的可行性探索[J];江西醫(yī)藥;2010年09期

10 劉朝暉;陳磊;;陰道上皮細胞先天性抗假絲酵母菌的作用研究[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 吳文湘;廖秦平;;體外培養(yǎng)人陰道上皮細胞感染白色念珠菌后細胞因子的表達改變[A];中華醫(yī)學(xué)會第一屆全球華人婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

2 牛戰(zhàn)琴;石一復(fù);;雌激素對陰道上皮細胞抗念珠菌作用的影響[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 向曦;陳琢;徐麗君;馬永貴;陸付耳;黃光英;;潔澤1號對陰道上皮細胞與白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和NF-κB表達的影響[A];第八屆全國中西醫(yī)結(jié)合婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會論文及摘要集[C];2012年

4 滕茂芳;劉樹范;;放射治療對宮頸和陰道上皮細胞的影響[A];中國抗癌協(xié)會婦科腫瘤專業(yè)委員會第六次全國學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

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1 河南 副主任醫(yī)師 許雪梅 戴秀娟;孕婦如何做好自身衛(wèi)生[N];家庭醫(yī)生報;2009年

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1 李亞楠;陰道上皮細胞體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向上皮細胞分化的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 牛戰(zhàn)琴;陰道上皮細胞抗念珠菌作用及其機制的研究[D];浙江大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 董芹;潔澤1號對陰道上皮細胞抗白色念珠菌天然免疫相關(guān)因子影響的實驗研究[D];華中科技大學(xué);2012年

2 向曦;潔澤1號對陰道上皮細胞與白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和NF-κB表達的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

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本文編號：922990