本文關(guān)鍵詞：宮內(nèi)高糖對胎盤炎癥因子及子代胰腺Igf2基因印記的影響

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【摘要】：第一部分妊娠期糖尿病對胎盤炎癥因子的影響 目的：研究妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)患者胎盤合成釋放炎癥因子改變,明確高糖環(huán)境對胎盤滋養(yǎng)細胞合成釋放炎癥因子的影響。材料和方法：獲取臨床妊娠期糖尿病和正常對照組(Control, C)胎盤組織,采用實時定量PCR、酶聯(lián)免疫吸附試驗檢(ELISA)測胎盤炎癥因子合成釋放改變。體外以生理糖濃度(5mmol/L)和高糖環(huán)境(25mmol/L)培養(yǎng)人類滋養(yǎng)細胞系(HTR8/SVneo)48h再加脂多糖(lipopolysaccharide, LPS,1μg/ml)刺激24h,酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測上清炎癥因子釋放。 結(jié)果：GDM組胎盤較C組相比,抗炎因子脂聯(lián)素(Adiponectin, ADIPOQ)、白細胞介素5(Interleukin5, IL5)、白細胞介素13(Interleukin13, IL13)信使RNA (message RNA, mRNA)表達下降(p0.05),促炎因子白細胞介素6(Interleukin6, IL6)、白細胞介素8(Interleukin8, CXCL8) mRNA表達增加(p0.05),且白細胞介素6(Interleukin6, IL-6)在蛋白水平合成增加(p0.05)。體外實驗高糖培養(yǎng)人類滋養(yǎng)細胞系,結(jié)果其釋放IL-6增加(p0.05),Adiponectin減少(p0.05)。結(jié)論：高糖是引起胎盤和人類滋養(yǎng)細胞合成釋放炎癥因子發(fā)生改變,炎癥反應亢進的主要原因。 第二部分妊娠期糖尿病對小鼠胎鼠胰腺Igf2表達的影響及調(diào)控機制 目的：研究宮內(nèi)高糖環(huán)境下小鼠胎盤炎癥反應改變及胎鼠胰腺胰島素儲備功能、印記基因Igf2表達、Igf2差異甲基化區(qū)(differentially methylated region, DMR)的甲基化狀況及相關(guān)甲基化調(diào)節(jié)酶的改變,分析糖尿病發(fā)病相關(guān)基因的表達差異及可能的調(diào)節(jié)機制。 材料和方法：建立妊娠期糖尿病小鼠模型,在孕18.5天取出對照組(F1-Control)與實驗組(F1-GDM)胎盤、胎鼠胰腺(fetal mouse pancreas, FMP)進行比較,實時定量PCR檢測胎盤炎癥因子表達、胎鼠胰腺胰島素、印記基因Igf2、甲基化調(diào)控相關(guān)酶Dnmt1、Dnmt3a、Trim28、Tet1、Aicda表達,免疫組化觀察GDM胎鼠胰腺內(nèi)胰島素合成情況,并用MassARRAYTM EpiTYPER定量甲基化平臺對Igf2甲基化水平進行分析。 結(jié)果：宮內(nèi)高糖環(huán)境的子一代胎盤白細胞介素6(Interleukin6,I16)表達增加(p0.05),胰腺胰島素表達合成減少(p0.05),印記基因Igf2表達下降(p0.05),Igf2DMR2區(qū)5個CpG位點甲基化程度較對照組明顯增高(p0.05),胚胎發(fā)育期甲基化維持重要相關(guān)酶Dnmt1、Trim28表達上調(diào)(p0.05),去甲基化相關(guān)酶Aicda表達下降(p0.05)。 結(jié)論：宮內(nèi)高糖可致小鼠胎盤116表達改變,是引起胎盤炎癥環(huán)境改變的主要原因。同時胎鼠胰腺印記基因Igf2表達降低,可能是胎鼠胰島素儲備功能受損的原因之一。宮內(nèi)高糖環(huán)境胎鼠胰腺Igf2DMR2高甲基化狀態(tài)是引起Igf2表達降低的主要機制。胎鼠胰腺甲基化穩(wěn)態(tài)關(guān)鍵酶Dnmt1、Trim28表達升高及Aicda表達降低,是胰腺印記基因Igf2甲基化水平改變的主要原因。 第三部分白細胞介素6和高糖對胎鼠胰腺的影響 目的：探索宮內(nèi)改變環(huán)境中影響胎鼠表觀遺傳變化的主要原因及其可能機制。 材料和方法：體外原代培養(yǎng)孕18.5天胎鼠胰腺組織C (glucose5mmol/L), C+IL-6(glucose5mmol/L+IL-64000pg/ml), HG (glucose25mmol/L), HG+IL-6(glucose25mmol/L+IL-64000pg/ml)48h后,利用實時定量PCR檢測這四組胰腺印記基因Igf2、胰島素、Dnmt1、Trim28、Aicda表達改變,免疫熒光觀察不同培養(yǎng)條件下胎鼠胰腺內(nèi)胰島素合成情況,再次利用MassARRAYTM EpiTYPER定量甲基化平臺對Igf2甲基化水平進行分析。 結(jié)果：IL-6或HG培養(yǎng)均可使胎鼠胰腺胰島素合成減少(p0.05),Igf2表達降低(p0.05), Dnmt1、Trim28表達升高(p0.05),其中IL-6對胰島素、Igf2、Dnmt1的作用更為明顯,而HG對于Trim28的作用更為顯著,Aicda表達沒有顯著差異(p0.05)。IL-6或HG對Igf2DMR2區(qū)有4個CpG位點在IL-6或HG培養(yǎng)條件下出現(xiàn)高甲基化(p0.05),其中IL-6對CpG_5、CpG_7、CpG_11的作用更為明顯,而HG對于CpG_4的作用更為顯著, 結(jié)論：高糖和高IL-6對胎鼠胰腺Igf2表達和Igf2DMR2甲基化狀態(tài)均有影響,IL-6主要是通過上調(diào)Dnmt1,高糖是主要通過影響Trim28使得Igf2DMR2甲基化水平升高的,并成為引起胎鼠胰腺功能損傷及出生后長期不良結(jié)局的的機制之一。
【關(guān)鍵詞】：宮內(nèi)高糖 胎鼠胰腺 Igf2 甲基化 胰島素 妊娠期糖尿病 炎癥因子 高糖 人類滋養(yǎng)細胞系 白細胞介素6 Dnmt1 Trim28 CpG島
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.256
【目錄】：

• 致謝5-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-14
• 中英文縮寫詞對照表14-15
• 目次15-17
• 第一部分 妊娠期糖尿病對胎盤炎癥因子的影響17-33
• 引言17-19
• 材料與方法19-26
• 結(jié)果26-28
• 討論28-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻31-33
• 第二部分 宮內(nèi)高糖小鼠胎盤功能、胎鼠胰腺功能、IGF2表達及調(diào)控機制33-51
• 引言33-35
• 材料與方法35-42
• 結(jié)果42-46
• 討論46-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-51
• 第三部分 白細胞介素6和高糖對胎鼠胰腺的影響51-65
• 引言51-53
• 材料和方法53-56
• 結(jié)果56-61
• 討論61-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻63-65
• 全文總結(jié)65-66
• 綜述66-81
• 參考文獻77-81
• 個人簡介81-82

【共引文獻】

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本文編號：914389