本文關鍵詞：超聲介導葉酸靶向攜氧載藥脂質微泡對乏氧卵巢癌細胞及巨噬細胞作用及機制研究

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【摘要】：第一部分葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡的制備及其基本性質鑒定目的:制備一種新型的葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡,檢測其基本特性。方法:采用機械振蕩法制備葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡和普通脂質微泡,觀察并比較兩種微泡的穩(wěn)定性,檢測其粒徑及粒度分布、電位、超聲介導釋氧能力、載藥量、包封率及葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡表面葉酸連接情況。結果:葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡與普通脂質微泡基本特性大體一致。微泡的穩(wěn)定性隨著時間及溫度變化而改變,兩種微泡4℃可穩(wěn)定存在兩周,兩周后微泡出現(xiàn)聚集現(xiàn)象,而37℃兩種微泡僅能穩(wěn)定存在2h,2h后微泡粒徑變大,但無聚集現(xiàn)象。葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡平均粒徑為(1.81±0.04)μm,Zeta電位分別為-(11.75±1.56)mv,載藥量為(24.60±1.23)%,包封率為(86.10±3.47)%,而普通脂質微泡平均粒徑為(1.78±0.05)μm,Zeta電位為-(14.93±0.50)mv,載藥量為(26.72±2.31)%,包封率為(93.51±4.74)%。超聲輻照能增加缺氧環(huán)境中微泡內氧氣的釋放。制備的葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡葉酸配體免疫熒光試驗陽性,與FITC標記的葉酸抗體結合率高達(96.29±0.67)%,明顯高于FITC標記的葉酸抗體與普通脂質微泡結合率(3.89±1.64)%(p0.05)。結論:成功制備了葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡,有望成為一種新型可用于超聲控釋的靶向藥物載體。第二部分葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對卵巢癌SKOV3細胞及巨噬細胞體外尋靶能力的鑒定目的:鑒定卵巢癌SKOV3細胞及巨噬細胞葉酸受體的表達情況,并觀察TOPLMBs對這兩種細胞體外尋靶能力。方法:體外培養(yǎng)卵巢癌SKOV3細胞及巰基乙酸鹽誘導法獲取小鼠腹腔巨噬細胞。免疫熒光法檢測兩種細胞葉酸受體的表達情況。觀察葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對卵巢癌SKOV3細胞及小鼠腹腔巨噬細胞結合情況,并設置普通脂質微泡組及游離葉酸干預組進行對照,評價葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡體外尋靶能力。結果:卵巢癌SKOV3細胞及小鼠腹腔巨噬細胞葉酸受體免疫熒光試驗強陽性。體外尋靶顯示,葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡組見微泡與SKOV3細胞大量且牢固結合,普通脂質微泡組和葉酸干預組幾乎不結合;葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡組微泡能與巨噬細胞大量結合進而被吞噬,明顯多于普通脂質微泡組及游離葉酸干預組。結論:葉酸受體在人卵巢癌SKOV3細胞和炎癥誘導的小鼠腹腔巨噬細胞高表達;葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對人卵巢癌細胞及巨噬細胞具備較強的體外靶向能力,有望成為未來卵巢癌及腫瘤相關巨噬細胞靶向治療理想的分子探針。第三部分超聲介導葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對乏氧卵巢癌SKOV3細胞增殖抑制及凋亡誘導作用及機制研究目的:構建乏氧卵巢癌SKOV3細胞株模型,研究超聲聯(lián)合葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對乏氧卵巢癌SKOV3細胞的增殖抑制及凋亡誘導作用及其機制。方法:采用Co Cl2化學法誘導構建乏氧SKOV3細胞株,將對數(shù)生長期乏氧SKOV3細胞進行不同處理,分組如下:a.培養(yǎng)液空白對照組b.紫杉醇組、c.紫杉醇+超聲組、d.攜氧載紫杉醇脂質微泡組、e攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組、f.葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡組、g.葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組。應用MTT比色法檢測細胞的增殖抑制率,流式細胞術檢測細胞凋亡情況。PCR檢測乏氧誘導轉錄因子HIF-1α和多藥耐藥基因MDR-1的表達,Western blot檢測HIF-1α蛋白和P-gp糖蛋白的表達情況。結果:隨著作用時間的延長,各處理因素對乏氧SKOV3細胞增殖抑制作用逐漸增強。其中,攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組及葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組對乏氧SKOV3細胞的抑制作用明顯,而葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組更為顯著,24 h,48 h和72 h分別為(64.61±12.53)%、(79.34±7.39)%及(89.83±5.61)%,顯著高于同一時間點的其余各處理組(P0.05),該處理組細胞凋亡率為(49.20±7.18)%,亦明顯高于其余各組(p0.05)。PCR及Western blot檢測結果顯示,攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組及葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組HIF-α及MDR-1基因及蛋白的表達有明顯下調趨勢,其中以葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組下調最為顯著,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但與攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:超聲聯(lián)合葉酸靶向攜氧載紫杉醇微泡可明顯提高紫杉醇對乏氧SKOV3細胞的殺傷能力,其機制可能與下調HIF-1α及MDR-1基因及蛋白的表達,從而增加細胞對紫杉醇的敏感性有關。第四部分超聲介導葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對巨噬細胞殺傷作用的研究目的:探討超聲聯(lián)合葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對體外培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細胞殺傷作用。方法:巰基乙酸鹽誘導法獲取小鼠腹腔巨噬細胞,過夜孵育后,細胞分為7組:a.對照組、b.紫杉醇組、c.組紫杉醇+超聲組、d.攜氧載紫杉醇脂質微泡組、e.攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組、f.葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡組、g.葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡+超聲組。細胞處理后24h,MTT比色法檢測巨噬細胞的存活率,流式細胞術檢測細胞凋亡情況。結果:各處理因素對巨噬細胞具有不同程度的殺傷作用,隨著時間延長,細胞存活率逐漸下降,其中葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡組細胞的存活率降低最為顯著,24h、48h、72h分別為(49.72±4.60)%,(44.99±7.19)%和(32.17±6.73)%,明顯低于其余各處理組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),該組24h細胞凋亡率為(48.36±9.39)%,明顯高于其余處理組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:超聲介導葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對巨噬細胞有一定的殺傷作用,其機制可能是葉酸受體介導巨噬細胞特異性吞噬靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡,進而增強超聲介導的機械效應導致細胞損傷。
【關鍵詞】：葉酸 攜氧載紫杉醇 卵巢癌 巨噬細胞
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31;R454.3
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-19
• 第一部分 葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡的制備及其基本性質鑒定19-26
• 1 材料和方法19-23
• 2 結果23-24
• 3 討論24-25
• 4 小結25-26
• 第二部分 葉酸靶向攜氧載藥脂質微泡對卵巢癌SKOV3細胞及巨噬細胞體外尋靶能力的鑒定26-31
• 1 材料和方法26-29
• 2 結果29
• 3 討論29-30
• 4 小結30-31
• 第三部分 超聲介導葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對乏氧卵巢癌SKOV3細胞增殖抑制及凋亡誘導作用及機制研究31-43
• 1 材料和方法31-36
• 2 結果36-40
• 3 討論40-42
• 4 小結42-43
• 第四部分 超聲介導葉酸靶向攜氧載紫杉醇脂質微泡對巨噬細胞殺傷作用的研究43-48
• 1 材料和方法43-44
• 2 結果44-46
• 3 討論46-47
• 4 小結47-48
• 參考文獻48-52
• 全文總結52-53
• 附圖53-61
• 本課題創(chuàng)新與不足之處61-62
• 文獻綜述62-72
• 參考文獻68-72
• 致謝72-73
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文及參研基金情況73

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號：907989