本文關(guān)鍵詞：脂肪源性干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞聯(lián)合移植治療大鼠壓力性尿失禁的實驗研究

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【摘要】：目的:1.體外分離培養(yǎng)大鼠脂肪源性干細(xì)胞(Adipose-derived stromal cells,ADSCs)和成纖維細(xì)胞;2.建立壓力性尿失禁(Stress urinary incontinence,SUI)模型,觀察不同數(shù)量的異體ADSCs和成纖維細(xì)胞聯(lián)合移植于尿道中段周圍后對尿動力學(xué)指標(biāo)的影響及細(xì)胞注射后尿道及周圍組織的形態(tài)學(xué)變化,比較各組對壓力性尿失禁的治療效果。方法:1.采用膠原酶I分離提取大鼠ADSCs,經(jīng)流式細(xì)胞儀對表面標(biāo)志物進行鑒定;采用改良式兩步酶消化法獲取成纖維細(xì)胞,用免疫組織化學(xué)法將其鑒定;根據(jù)不同細(xì)胞群貼壁能力的差異使用差速貼壁離心法使兩者純化;利用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的增殖情況及形態(tài)學(xué)變化,為后續(xù)實驗提供理想的細(xì)胞源。2.36只SD雌性未孕大鼠隨機分為兩組:正常組6只,未造模且未行注射治療;實驗組30只進行陰道持續(xù)擴張和雙側(cè)卵巢切除術(shù),2周后所有大鼠均用BL-420生物機能檢測儀測定最大膀胱容量和腹壓漏尿點壓力,驗證模型均建立成功。3.將造模成功后1個月的所有實驗組大鼠又隨機分為5組(6只/組)。在顯微鏡下將40u L的細(xì)胞數(shù)量分別為1×104、1×105、1×106的ADSCs和成纖維細(xì)胞混懸液分別移植于大鼠尿道中段周圍的3點和9點處,而生理鹽水作為對照組,并設(shè)立空白組,術(shù)后1個月進行尿動力學(xué)指標(biāo)檢測,評估對壓力性尿失禁的治療效果。4.細(xì)胞移植1個月后處死大鼠,將尿道及陰道前壁組織進行取材,采用HE染色評價細(xì)胞移植后尿道周圍組織病理變化。5.統(tǒng)計學(xué)方法:采用SPSS 13.0進行數(shù)據(jù)處理,計量資料采用x±s表示。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布和方差齊時,組間比較采用t檢驗,多組間比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD-t法;不滿足則采用秩和檢驗。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn)。結(jié)果:1.體外培養(yǎng)的ADSCs呈多角形或梭形的漩渦狀細(xì)胞集落,形態(tài)均一,細(xì)胞表達CD29、CD44,不表達CD45,陽性率分別為96.63%、78.53%和0.75%。體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞與ADSCs形態(tài)相似,經(jīng)免疫組化鑒定,波形蛋白表達陽性,定位于胞質(zhì),而角蛋白表達陰性。經(jīng)倒置相差顯微鏡觀察,大鼠ADSCs和成纖維細(xì)胞經(jīng)第三次傳代后,細(xì)胞形態(tài)無明顯變化,仍保持較強的分裂增殖活力。2.陰道持續(xù)擴張加雙側(cè)卵巢切除能夠成功建立SUI動物模型。實驗組與正常組的最大膀胱容量(ml)分別為1.83±0.54、3.08±0.28,腹壓漏尿點壓力(cm H2O)為76.02±2.56、24.91±2.94,實驗組較正常組明顯降低(P0.001)。3.將不同數(shù)量的ADSCs和成纖維細(xì)胞聯(lián)合移植1個月后,經(jīng)尿動力學(xué)檢測,正常組、SUI組、生理鹽水組、1×104組、1×105組、1×106組最大膀胱容量(ml)分別為3.08±0.28、1.89±0.36、1.93±0.60、2.10±0.55、2.23±0.66和2.54±0.38,組間比較示:正常組與其余各組均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001),1×106組與SUI組、生理鹽水組比較有差異,其余各組間比較均無差異(P0.05);各組腹壓漏尿點壓力(cm H2O)分別為76.02±2.56、26.26±3.01、29.17±4.09、32.96±4.99、36.82±4.22和41.16±3.57,組間比較示:正常組與其余各組均有差異(P0.001),但SUI組與生理鹽水組無差異(P0.05),1×104組與SUI組有差異,1×105組與SUI組、生理鹽水組有差異,1×106組與SUI組、生理鹽水組和1×104組均有差異(P0.001)。4.不同數(shù)量的ADSCs和成纖維細(xì)胞聯(lián)合移植后各組尿道及周圍組織的形態(tài)學(xué)變化:正常組尿道有完整的肌層結(jié)構(gòu),肌纖維呈束狀緊密排列。SUI組尿道肌層受損,排列紊亂并變薄,且肌纖維之間出現(xiàn)松散、斷裂及萎縮現(xiàn)象。而生理鹽水組無明顯變化,但尿道形成瘢痕及纖維化。細(xì)胞移植組,移植局部尿道肌層明顯增厚(P0.01),肌纖維排列仍相對松散和紊亂,周圍結(jié)締組織變緊密,但是細(xì)胞各數(shù)量級間未見明顯差異(P0.05)。正常組陰道前壁可見清晰的粘膜層、肌層和外膜層結(jié)構(gòu),平滑肌束粗大,呈編織狀,膠原含量豐富、致密。SUI組肌層較薄,面積變小,肌纖維之間失去正常的連接結(jié)構(gòu),肌束間隙增寬,膠原纖維散在分布且出現(xiàn)斷裂現(xiàn)象。生理鹽水組和細(xì)胞移植組均未見明顯變化(P0.05)。結(jié)論:1.通過差速貼壁法和膠原酶消化法可獲得純度較高、生物活性較好的脂肪源性干細(xì)胞;采用差速貼壁結(jié)合改良式兩步酶消化法,可獲得純度較高的成纖維細(xì)胞。2.脂肪源性干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞聯(lián)合移植以1×106/只可能是治療大鼠壓力性尿失禁較佳的濃度選擇。
【關(guān)鍵詞】：壓力性尿失禁 脂肪源性干細(xì)胞 成纖維細(xì)胞 動物模型 移植治療
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R711.59
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 常用縮寫詞中英文對照表13-14
• 前言14-16
• 第一部分16-27
• 1 材料與方法16-21
• 1.1 實驗動物16
• 1.2 實驗設(shè)備與試劑16-18
• 1.3 實驗方法18-21
• 2 結(jié)果21-24
• 2.1 原代培養(yǎng)過程中ADSCs的形態(tài)變化21
• 2.2 傳代后ADSCs細(xì)胞形態(tài)變化21-22
• 2.3 大鼠ADSCs表面標(biāo)記物鑒定22-23
• 2.4 原代成纖維細(xì)胞的生長情況23
• 2.5 成纖維細(xì)胞免疫組化染色結(jié)果23-24
• 3 討論24-27
• 第二部分27-42
• 1 材料與方法27-32
• 1.1 實驗動物27
• 1.2 實驗設(shè)備27
• 1.3 HE染色所需設(shè)備及試劑27-28
• 1.4 實驗方法28-31
• 1.5 統(tǒng)計學(xué)方法31-32
• 2 結(jié)果32-38
• 2.1 實驗動物體重比較32
• 2.2 各組尿動力學(xué)指標(biāo)比較32-33
• 2.3 細(xì)胞移植1月后各組尿動力學(xué)指標(biāo)比較33-34
• 2.4 各組大鼠尿道中段HE及Masson染色結(jié)果34-36
• 2.5 各組大鼠陰道前壁HE染色結(jié)果36-38
• 3 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-49
• 綜述49-58
• 參考文獻55-58
• 致謝58-59
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果59-60
• 個人簡歷60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 丁文娟;洪莎莎;閔潔;方桂;張小紅;胡鳴;楊青;趙楊;洪莉;;人子宮旁韌帶成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)的初步研究[J];武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年01期

2 秦義武;趙勁民;蘇偉;李曉峰;劉偉;;大鼠脂肪源性干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年23期

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本文編號：886225