本文關(guān)鍵詞：卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞通過自分泌CCL5促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分化和腫瘤血管形成

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【摘要】：一、研究背景腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells,CSCs)以其自我更新和高度致瘤能力而著稱。另外,近年來CSCs所具備的多向分化潛能也成為一個研究熱點,得到了學(xué)界的熱切關(guān)注。近期有研究表明,在惡性膠質(zhì)瘤和乳腺癌中,CSCs能夠分化為有功能的血管內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells,ECs)并參與腫瘤的血管形成。已經(jīng)有大量科學(xué)文獻(xiàn)證實豐富的血管形成是癌癥的一大特征,其能夠為腫瘤的進(jìn)展提供能量來源,為腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移提供有利的渠道,也是腫瘤組織不可或缺的生存支柱。因此,探討以往未曾研究透徹的、潛在的干細(xì)胞源性的血管生成機(jī)制有利于完善腫瘤的發(fā)生、發(fā)展理論。我們的前期研究成果已經(jīng)證明了卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞(cancer stem-like cells,CSLCs)能夠合成和分泌大量的趨化因子CCL5,并在細(xì)胞表面高表達(dá)CCL5的特異性活化受體。已有文獻(xiàn)報道,CCL5作為一個重要的促惡性因素,其與腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移和進(jìn)展都密切相關(guān),尤其,CCL5對腫瘤的血管生成具有重要的意義。二、研究目的血管生成對卵巢癌進(jìn)展、侵襲、轉(zhuǎn)移過程有非常重要的作用。然而,傳統(tǒng)的抗血管生成治療對腫瘤的控制卻作用有限,且伴隨著一系列毒副作用。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)了卵巢癌CSLCs能夠分化成為具備內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和功能的內(nèi)皮細(xì)胞,并探討了趨化因子CCL5在這個內(nèi)皮分化過程中的作用及機(jī)制。我們期望這些結(jié)果能夠幫助完善腫瘤的血管生成理論,并為臨床卵巢癌治療提供一個新的抗血管生成策略。三、研究方法1.在前期對卵巢癌CSLCs研究的基礎(chǔ)上,通過體外基質(zhì)膠血管形成實驗和免疫標(biāo)記技術(shù)明確卵巢癌CSLCs是否具有內(nèi)皮分化和血管形成能力。根據(jù)對裸鼠體內(nèi)移植瘤組織進(jìn)行血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物的免疫熒光檢測,明確移植瘤組織的內(nèi)皮細(xì)胞來源,從而再次求證卵巢癌CSLCs是否具有內(nèi)皮分化和血管形成能力。2.通過單克隆抗體阻斷CCL5功能、病毒轉(zhuǎn)染下調(diào)CCL5表達(dá)、加入重組人CCL5因子、阻斷CCL5特異性受體等體外實驗證明CCL5有調(diào)節(jié)卵巢癌CSLCs分化為ECs的能力。再利用裸鼠移植瘤模型體內(nèi)實驗,證明CCL5對于促進(jìn)干細(xì)胞來源的血管生成有重要作用。3.利用Western blot、免疫熒光檢測卵巢癌CSLCs中CCL5可能激活的通路。再通過化合物阻斷等方式明確CCL5是通過活化何種信號通路調(diào)節(jié)來卵巢癌CSLCs向ECs分化的過程,最后提出CCL5調(diào)節(jié)CSLCs向ECs分化過程中的可能存在的機(jī)制。四、研究結(jié)果1.體外基質(zhì)膠血管形成模型證實了卵巢癌CSLCs能夠形成微管網(wǎng)絡(luò),其形態(tài)與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞所形成的微血管網(wǎng)類似,但卵巢癌非干細(xì)胞在同樣條件下卻沒有形成類似的微管網(wǎng)絡(luò)。免疫熒光標(biāo)記技術(shù)顯示CSLCs分化所形成的微管網(wǎng)絡(luò)細(xì)胞表達(dá)血管ECs特異性標(biāo)記物CD31、VE-cadherin和vWF。在裸鼠移植瘤實驗中,CSLCs移植瘤內(nèi)可見較豐富的血管,而非干細(xì)胞移植瘤血管較少。免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)CSLCs移植瘤內(nèi)既有人源性的CD31表達(dá)也有鼠源性的CD31表達(dá),而非干細(xì)胞移植瘤內(nèi)只有鼠源性的CD31表達(dá),無人源性CD31表達(dá)。2.首先,單克隆抗體阻斷CCL5功能實驗顯示阻斷CSLCs內(nèi)的CCL5功能后其形成微管網(wǎng)絡(luò)的能力下降,且這種下降具有濃度依耐性。第二,病毒轉(zhuǎn)染CSLCs下調(diào)CCL5表達(dá),CSLCs所形成的微管網(wǎng),其管腔數(shù)和分支長度都明顯少于對照組。第三,CSLCs與重組人CCL5因子共培養(yǎng),所形成小管網(wǎng)絡(luò)的管腔數(shù)和分支長度比對照組增加。第四,分別阻斷CCL5的特異性活化受體CCR1、CCR3、CCR5之后,CSLCs所形成的的微管網(wǎng)內(nèi)的微管管腔數(shù)和分支長度均較對照組減少。裸鼠移植瘤實驗和免疫組織化學(xué)檢測顯示下調(diào)CSLCs的CCL5表達(dá)后,CCL5下調(diào)組與對照組的腫瘤大小無明顯差異,且兩組移植瘤組織內(nèi)鼠源性CD31陽性細(xì)胞的數(shù)量無明顯差異。但就人源性CD31陽性細(xì)胞數(shù)而言,CCL5表達(dá)下調(diào)組移植瘤內(nèi)的人源性CD31陽性細(xì)胞數(shù)明顯少于對照組。3.Western blot和免疫熒光檢測結(jié)果顯示病毒轉(zhuǎn)染沉默CSLCs的CCL5基因,導(dǎo)致胞核內(nèi)的p65和STAT3表達(dá)減少,而胞漿內(nèi)的p65和STAT3表達(dá)較對照組增加,且整個細(xì)胞內(nèi)的磷酸化p65和磷酸化STAT3水平明顯低于對照組�；瘜W(xué)阻斷NF-κB或STAT3信號通路導(dǎo)致CSLCs的血管形成和維持能力受抑制。五、結(jié)論1.卵巢癌CSLCs能夠分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞。2.卵巢癌CSLCs通過自分泌趨化因子CCL5促進(jìn)自身分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞并參與腫瘤組織內(nèi)的血管形成。3.CCL5通過活化NF-κB和/或STAT3信號通路調(diào)控卵巢癌CSLCs向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 腫瘤干細(xì)胞 CCL5 血管生成 內(nèi)皮細(xì)胞分化
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 英文摘要7-10
• 中文摘要10-12
• 第一章 前言12-14
• 第二章 卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞能夠分化成為血管內(nèi)皮細(xì)胞并參與腫瘤的血管形成14-23
• 2.1 材料與方法14-18
• 2.2 結(jié)果18-21
• 2.3 討論21-23
• 第三章 CCL5調(diào)節(jié)卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞分化為內(nèi)皮細(xì)胞23-38
• 3.1 材料與方法23-32
• 3.2 結(jié)果32-37
• 3.3 討論37-38
• 第四章 CCL5通過與CCR1、CCR3、CCR5結(jié)合調(diào)節(jié)卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞分化為內(nèi)皮細(xì)胞38-42
• 4.1 材料與方法38-39
• 4.2 結(jié)果39-40
• 4.3 討論40-42
• 第五章 CCL5能夠活化卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞內(nèi)NF-κB、STAT3信號通路42-52
• 5.1 材料與方法42-47
• 5.2 結(jié)果47-51
• 5.3 討論51-52
• 第六章 CCL5通過活化NF-κB和/或STAT3信號通路調(diào)控卵巢癌干細(xì)胞樣細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化52-66
• 6.1 材料與方法52-55
• 6.2 結(jié)果55-64
• 6.3 討論64-66
• 全文結(jié)論66-67
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 文獻(xiàn)綜述 CCL5與腫瘤73-83
• 參考文獻(xiàn)79-83
• 科研成果83-84
• 致謝84

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本文編號：864519