本文關(guān)鍵詞：尿液膽汁酸代謝輪廓分析在妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥診斷與分度中的應(yīng)用

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【摘要】：目的1.建立一種同時(shí)檢測(cè)尿液非硫酸化和硫酸化膽汁酸代謝輪廓的超高液相色譜-三重四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Triple-TOF/MS)方法。2.采用UPLC-Triple-TOF/MS對(duì)正常妊娠組、輕度和重度妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥(Intrahepatic cholestasis of pregnancy, ICP)患者尿液膽汁酸代謝輪廓進(jìn)行分析,并運(yùn)用經(jīng)典判別分析以期獲得最優(yōu)的ICP診斷模式,尋找潛在的生物標(biāo)志物,為臨床ICP的診斷、鑒別診斷及分度提供依據(jù)。方法1.色譜條件：色譜柱Kinetex XB-C18 (50x 2.1 mm,1.7 μm),柱溫：30℃,流速：0.2 ml/min。流動(dòng)相A:15mmol/L醋酸銨,B：乙腈,梯度洗脫。質(zhì)譜條件：電離子噴霧源(ESI),采用負(fù)離子模式掃描,以各膽汁酸母離子質(zhì)量數(shù)±0.05 Da為目標(biāo)離子進(jìn)行子離子掃描,并以母離子作為定量離子。內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量,進(jìn)樣量5μl,檢測(cè)時(shí)間20min。2.用Bond lut 18固相萃取小柱進(jìn)行尿液樣品預(yù)處理。3.采用Peakview數(shù)據(jù)處理軟件利用MS和MS/MS的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)、特征碎片離子及同位素等信息,并與已知的膽汁酸比對(duì),初步確定膽汁酸的種類。4.采用UPLC-Triple-TOF/MS法對(duì)26例正常孕婦,14例輕度ICP患者,14例重度ICP患者進(jìn)行尿液膽汁酸代謝輪廓分析,并運(yùn)用經(jīng)典判別分析方法獲得最優(yōu)的ICP診斷與分度模式,篩選出ICP靈敏、特異的生物標(biāo)志物。結(jié)果1.有標(biāo)準(zhǔn)品的28種非硫酸化和1種硫酸化膽汁酸基本實(shí)現(xiàn)基線分離,通過鑒定初步認(rèn)識(shí)到尿液中40種可能硫酸化膽汁酸和17種與已知非硫酸化膽汁酸存在同分異構(gòu)的代謝物。2.尿液膽汁酸的線性范圍為：0.020-20μmol/L,r為0.9925-1.0000,具有良好的相關(guān)性,最低檢測(cè)限0.001 μmol/L。該方法的日內(nèi)變異系數(shù)均小于17.8%,日間變異系數(shù)均不超過25.9%,各物質(zhì)在不同濃度下均獲得相對(duì)滿意的回收率。3.與正常妊娠組相比,輕度和重度ICP組患者尿液非硫酸化與硫酸化膽汁酸均有不同程度的增高,而硫酸化膽汁酸的增加更為顯著；尿液結(jié)合型膽汁酸中,�；墙Y(jié)合型膽汁酸較甘氨結(jié)合型膽汁酸增加更為顯著。4.對(duì)于有標(biāo)準(zhǔn)品的膽汁酸,與正常妊娠組相比,輕度ICP組GDCA、ω-TMCA和TCA顯著增高,GCDCA和GCA極顯著增高,重度ICP組α-TMC A、THC A、GHC A、GC A和TLCA-S顯著增高,TUDCA和ω-TMCA極顯著增高；與輕度ICP組相比,重度ICP組TUDCA、 co-TMCA、THCA和TLCA-S顯著增高。5.三組人群尿液中共檢測(cè)到27種可能的硫酸化膽汁酸與15種已知非硫酸化膽汁酸的同分異構(gòu)體代謝物,組間存在差異的主要有TBA-S、GBA-S、TCA-S、GCA-S、GLCA-S及TBA、GBA、TCA同分異構(gòu)代謝物。6.經(jīng)典判別分析表明以本方法所檢測(cè)的三組人群中有差異的40種膽汁酸為預(yù)測(cè)變量,正常妊娠組、輕度ICP組和重度ICP組的預(yù)測(cè)成功率分別為96.2%,92.9%,92.9%,判別函數(shù)對(duì)初始分組案例94.4%進(jìn)行了正確分類。7.聯(lián)合VIP值、p(corr)值和組間存在差異的膽汁酸指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)分析篩選出TBA3、TBA-S2、TUDCA、TCA5、TCA4和ω-TMCA對(duì)ICP的診斷和分度有重要價(jià)值,可能是臨床ICP診斷和分度潛在的生物標(biāo)志物。結(jié)論1.本研究建立了UPLC-Triple-TOF/MS分析尿液膽汁酸代謝輪廓的方法,實(shí)現(xiàn)了尿液中非硫酸化和硫酸化膽汁酸代謝輪廓的同時(shí)測(cè)定。2.通過對(duì)正常妊娠組、輕度ICP組和重度ICP組患者尿液膽汁酸代謝輪廓分析,運(yùn)用經(jīng)典判別分析能夠?qū)θM人群進(jìn)行正確分類,并發(fā)現(xiàn)臨床ICP診斷及分度潛在的膽汁酸代謝物。
【關(guān)鍵詞】：妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥 膽汁酸 代謝輪廓分析
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R714.255;R446.1
【目錄】：

• 符號(hào)說明5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-18
• 第一部分 液相色譜-三重四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)定尿液膽汁酸代謝輪廓的分析方法研究18-47
• 1 儀器與試劑18-19
• 2 實(shí)驗(yàn)部分19-22
• 3 結(jié)果與結(jié)論22-40
• 4 討論40-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 第二部分 尿液膽汁酸代謝輪廓分析在妊娠肝內(nèi)膽汁淤積癥診斷與分度中的應(yīng)用47-63
• 1 方法與實(shí)驗(yàn)47-48
• 2 結(jié)果與結(jié)論48-58
• 3 討論58-61
• 參考文獻(xiàn)61-63
• 全文總結(jié)63-64
• 文獻(xiàn)綜述64-71
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 致謝71-72
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文72

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