本文關鍵詞：PADI4基因對不同p53狀態(tài)的卵巢癌細胞系生長及轉移的影響

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【摘要】：目的探討在卵巢癌細胞系A2780和SKOV3中PADI4的表達以及對卵巢癌細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響,并篩選出與PADI4作用機制有關的基因。方法本研究選用p53基因表達陽性的卵巢癌細胞A2780和p53基因表達陰性的卵巢癌細胞SKOV3,分別在體外試驗中轉染PADI4-siRNA,并設置陰性對照組(NC組)及空白對照組(BC組),采用實時定量PCR和Western blot檢測兩種卵巢癌細胞中PADI4 mRNA水平和蛋白水平的表達,從而確定PADI4-siRNA的沉默效率。采用CCK-8試劑盒、Annexin V-PE/7-AAD雙染和transwell小室的方法分別檢測轉染PADI4-siRNA后卵巢癌細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲的情況。PCRArray篩選p53信號通路、凋亡和轉移相關基因中與PADI4作用機制相關的基因,并用實時定量PCR驗證PCR Array的實驗結果。結果1.實時定量PCR和Western blot檢測到轉染PADI4 siRNA可有效抑制兩種卵巢癌細胞中PADI4mRNA水平和蛋白水平的表達。2.與NC組相比,PADI4-siRNA組中的卵巢癌細胞A2780和SKOV3的增殖均明顯被抑制(PA27800.05; PsKOV30.001);在PADI4-siRNA組中A2780細胞的凋亡細胞比例明顯增加(P0.001),遷移和侵襲能力明顯減弱(P0.001),而SKOV3細胞的凋亡、遷移和侵襲情況與陰性對照siRNA組相比無統(tǒng)計學意義。3.在卵巢癌細胞A2780中,抑制PADI4的表達后,通過基因芯片驗證與p53信號通路、凋亡和轉移相關的227個基因中有13個基因表達量較NC組上調或者下調,在p53信號通路中有2個基因顯著上調,分別是雌激素受體1(ESR1)和腫瘤壞死因子(TNF),另外還有4個顯著下調的基因,分別是Sestrin 2 (SESN2)、腫瘤蛋白p63(TP63)、糖基化磷酯酰肌醇錨定蛋白(GML)和白介素6(IL6)。在與凋亡相關的基因中有2個顯著上調的基因,分別是腫瘤壞死因子受體超級家族9(TNFRSF9)和細胞凋亡誘導DFFA影響因子a (CIDEA),另有4個顯著下調的基因,分別是BCL2-like2 (BCL2L2),BCL2-拮抗因子1(BAK1)、腫瘤壞死因子受體超家族11b (TNFRSF11B)和TNF超家族6(FASLG)O在與轉移相關的基因中有3個顯著上調的基因,分別為基質金屬蛋白酶14 (MMP14)、WAS/WASL相互作用蛋白家族1(WIPF1)和胰島素樣生長因子1(IGF1),另有1個顯著下調的基因,為整連蛋白(33 (ITGB3)結論靶向PADI4的siRNA在體外能有效沉默卵巢癌細胞A2780和SKO3中PADI4基因的表達；PADI4的沉默可抑制兩種卵巢癌細胞A2780(野生型p53)和SKOV3 (p53缺失型)增殖,但抑制PADI4表達僅能在有p53基因表達時誘導卵巢癌細胞凋亡,在p53基因缺失時則不能誘導其凋亡。同時PADI4僅能在有p53基因表達時抑制卵巢癌細胞遷移和侵襲,而在p53基因缺失時不能抑制卵巢癌細胞遷移和侵襲能力。提示PADI4參與卵巢癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的調節(jié)機制,且可能與p53等相關基因有關,但p53信號通路并不是PADI4調節(jié)細胞增殖的唯一通路,提示PADI4在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用,這對以PADI4基因為靶點的抗腫瘤治療具有重要的意義。
【關鍵詞】：卵巢癌 肽基精氨酸脫亞胺酶4 p53信號通路 遷移 侵襲
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號說明11-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-23
• 結果23-31
• 討論31-36
• 結論36-37
• 綜述37-41
• 參考文獻41-45
• 致謝45-46
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文46-47
• 學位論文評閥及答辯情況表47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;PADI4在肝癌細胞中表達的檢測(英文)[J];Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2009年08期

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本文編號：847279