本文關(guān)鍵詞：大黃素抑制上皮性卵巢癌細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及其機制研究

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【摘要】：研究背景：卵巢癌是婦科惡性腫瘤中死亡率最高的疾病。其中90%被歸類為上皮性卵巢癌(EOC)。大多數(shù)的EOC患者在初診時就為晚期,5年總生存率約為40%。侵襲和轉(zhuǎn)移過程仍然是導(dǎo)致EOC患者復(fù)發(fā)和死亡的主要原因,但是其分子機制并不完全清楚。大量研究表明,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。越來越多的證據(jù)表明,EMT在上皮性卵巢癌細胞獲得侵襲及轉(zhuǎn)移能力方面有著非常關(guān)鍵的作用。由此可見,抑制EMT的靶向治療將使EOC患者獲益。大黃素,化學(xué)名為1,3,8-三羥基-6-甲基葸醌,它是一種從虎杖、大黃等的根莖中提取出來的一種蒽醌類衍生物。大黃素對多種癌癥具有抗腫瘤效應(yīng),其中包括EOC。一項研究闡明,大黃素對A2780(紫杉醇敏感株)和A2780/taxol(紫杉醇耐藥株)均具有抑制細胞增殖和誘導(dǎo)凋亡的效應(yīng),這種作用是通過減少抗凋亡分子的表達,例如survivin、X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)。此外,大黃素可以通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達從而抑制HO-8910PM細胞侵襲和轉(zhuǎn)移。一項體外實驗研究同樣說明,大黃素對SKOV3和H08910細胞的侵襲具有抑制效應(yīng)。但是,大黃素抑制侵襲和轉(zhuǎn)移的分子機制并不清楚。其它癌癥的相關(guān)研究表明,大黃素具有抑制結(jié)直腸癌、宮頸癌和頭頸鱗癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的效應(yīng),這種作用與抑制EMT和WNT/β-catenin信號通路的失調(diào)節(jié)有關(guān)。因此,我們假設(shè)大黃素可能通過調(diào)節(jié)WNT/β-catenin信號通路來抑制上皮性卵巢癌細胞發(fā)生EMT,從而減弱其侵襲和轉(zhuǎn)移能力。目的：探討大黃素對上皮性卵巢癌細胞侵襲、轉(zhuǎn)移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用及其機制。方法：1.倒置顯微鏡觀察A2780、OVCAR-3和SK-OV-3細胞的形態(tài)。2.CCK-8法檢測大黃素對A2780和SK-OV-3細胞增殖能力的影響。3. Transwell小室檢測A2780、OVCAR-3和SK-OV-3細胞的相對侵襲能力和大黃素對A2780和SK-OV-3細胞侵襲能力的影響。4. Western blot檢測大黃素(0,10,20,40 μM)作用后以及糖原合成激酶-3β(GSK-3β)酶抑制劑10 μM　SB216763預(yù)處理后,A2780和SK-OV-3細胞中上皮表型E-cadherin、keratin,間質(zhì)表型vimentin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9以及相關(guān)通路指標GSK-3β, p-GSK-3βSer9, β-catenin和轉(zhuǎn)錄因子ZEB1的表達變化。5. ZEB1 siRNA作用于A2780和SK-OV-3細胞后,檢測大黃素對細胞的侵襲能力和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。結(jié)果：1.A2780、OVCAR-3和SK-OV-3細胞的形態(tài)和相對侵襲能力的檢測：低侵襲能力的OVCAR-3細胞和高侵襲能力的A2780、SK-OV-3細胞分別顯示出上皮性與間質(zhì)性的形態(tài)及分子表達。2.大黃素對A2780和SK-OV-3細胞增殖、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響：大黃素(20 μM)對A2780和SK-OV-3細胞增殖無明顯的抑制作用(P0.05)。大黃素(20 μM)作用后細胞的侵襲能力明顯減弱(P0.01)。大黃素(0,10,20,40 μM)作用48小時后,上皮表型E-cadherin和keratin表達明顯增加,間質(zhì)表型vimenti、N-cadherin、MMP-2和MMP-9表達明顯減少,且表型表達變化呈藥物濃度依賴性。3.大黃素抑制A2780和SK-OV-3細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機制研究：大黃素(0,10,20,40 μM)作用48小時后,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)通路指標p-GSK-3βSer9,β-catenin表達明顯減少,呈藥物濃度依賴性,GSK-3p表達無明顯改變；轉(zhuǎn)錄因子ZEB1表達明顯減少,呈藥物濃度依賴性。應(yīng)用10 μMGSK-3β酶抑制劑SB216763預(yù)處理6小時后,大黃素(20 μM)繼續(xù)處理48小時,大黃素的以上作用明顯減弱。4.大黃素抑制A2780和SK-OV-3細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機制的驗證：大黃素單獨作用組與應(yīng)用ZEB1 siRNA預(yù)先轉(zhuǎn)染的細胞加入大黃素作用組相比,GSK-3p酶活性和β-catenin沒有明顯變化。應(yīng)用ZEB1 siRNA預(yù)先轉(zhuǎn)染的細胞再加入大黃素作用組與單獨應(yīng)用ZEB1 siRNA轉(zhuǎn)染組或大黃素單獨作用組相比,A2780和SK-OV-3細胞的侵襲能力更低,vimentin表達更低,·keratin表達更高,相應(yīng)地,ZEB1的表達水平也是最低的(P0.01)。結(jié)論：1.大黃素能夠明顯抑制上皮性卵巢癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移能力和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。2.大黃素抑制上皮性卵巢癌細胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化是通過調(diào)節(jié)GSK-3β/β-catenin/ZEB1信號通路的機制完成的。
【關(guān)鍵詞】：大黃素 卵巢癌 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 Wnt/β-catenin信號通路 ZEB1
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-33
• 結(jié)果33-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 附圖39-47
• 參考文獻47-52
• 致謝52-53
• 攻讀學(xué)位論文期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄53-54
• 附表54

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本文編號：822019