本文關鍵詞：Smac模擬物對卵巢上皮性癌的體外抗腫瘤及化療增敏作用研究

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【摘要】：目的本研究旨在以凋亡抑制蛋白IAPs為腫瘤治療新靶點,選擇人工合成的Smac模擬物BV-6為此靶點抑制劑,通過體外實驗觀察其有效劑量直接誘導卵巢上皮性癌SKOV3細胞凋亡發(fā)揮的抗腫瘤作用,以及無毒劑量降低腫瘤凋亡閾值產(chǎn)生的化療增敏作用,探討Smac模擬物成為新的抗腫瘤藥物和化療增敏藥物應用于卵巢癌治療的前景,為臨床上治療卵巢癌,提高化療效果、降低毒副反應開辟新的途徑。方法1、MTT法檢測BV-6不同濃度、不同時間對SKOV3細胞的生長抑制作用,篩選最佳有效劑量和無毒劑量,進行后續(xù)實驗。2、光學顯微鏡觀察應用最佳有效劑量BV-6不同時間后SKOV3細胞凋亡形態(tài)學變化。3、RT-PCR法、Western blot法檢測應用最佳有效劑量BV-6不同時間后SKOV3細胞內TNF-αm RNA、蛋白的表達。4、MTT法檢測應用無毒劑量BV-6與DDP不同濃度、不同時間對SKOV3細胞的生長抑制作用,通過計算IC50與單用DDP比較,觀察順鉑敏感性的變化,并選擇DDP適宜濃度與無毒劑量BV-6進行聯(lián)合實驗。5、RT-PCR法、Western blot法分別檢測BV-6組、DDP組與BV-6+DDP組SKOV3細胞內Caspase m RNA、蛋白的表達。結果1、MTT結果:BV-6能夠有效抑制體外SKOV3細胞生長,呈時間-劑量依賴性。根據(jù)細胞毒性檢測結果,BV-6為0.01umol/L時,24h、48h、72h細胞生長抑制率分別為(2.26±0.21)%、(4.50±0.38)%、(8.22±0.66)%,未見顯著細胞毒性作用。BV-6為0.4umol/L時,生長抑制率分別為(33.88±0.94)%、(48.67±0.87)%、(58.40±0.79)%,顯著抑制腫瘤細胞生長,同時光鏡下觀察SKOV3細胞出現(xiàn)凋亡性改變,隨時間延長而更加明顯。因此,最終確定最佳有效劑量0.4umol/L、無毒劑量0.01umol/L進行后續(xù)實驗。2、RT-PCR結果:有效劑量組24h、48h、72h TNF-αm RNA表達逐漸升高,存在時間依賴關系,較對照組分別升高了0.60倍、1.19倍、1.68倍。其中,TNF-αm RNA 24h與48h表達含量無顯著性差異,其他組間均具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。3、Western blot結果:有效劑量組24h、48h、72h TNF-α蛋白表達較對照組顯著升高,分別為0.23倍、0.78倍、1.89倍,隨作用時間延長而逐漸增加,各組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4、MTT結果顯示單用DDP 24h、48h、72h IC50分別為14.42±0.17ug/ml、6.73±0.04ug/ml、3.19±0.93ug/m,聯(lián)合無毒劑量BV-6后DDP IC50降為10.19±0.17ug/ml、3.53±0.04ug/ml、1.32±0.93ug/ml。其中,BV-6組、DDP組與BV-6+DDP組48h細胞生長抑制率分別為(4.50±0.38)%、(47.95±0.98)%、(60.78±0.66)%,BV-6顯著增強了DDP對SKOV3細胞的生長抑制作用(P0.05)。5、RT-PCR、Western blot結果顯示無毒劑量BV-6組與對照組Caspase m RNA、蛋白的表達無統(tǒng)計學差異,而BV-6+DDP組的表達含量比DDP組明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論1、高劑量BV-6通過直接誘導SKOV3細胞凋亡而發(fā)揮體外抗腫瘤作用,在有效劑量范圍內呈時間-濃度依賴關系。2、低劑量BV-6可以降低腫瘤細胞凋亡閾值,增加SKOV3細胞的順鉑敏感性,具有時間依賴性,其增敏劑量本身基本無細胞毒性作用。3、BV-6可能通過促進TNF-α表達、活化Caspase,激發(fā)腫瘤細胞內死亡受體凋亡途徑和線粒體凋亡途徑,從而誘導細胞凋亡、降低凋亡閾值發(fā)揮抗腫瘤作用以及化療增敏作用。
【關鍵詞】：卵巢上皮性癌 Smac模擬物 BV-6 TNF-α 抗腫瘤 化療增敏
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、BV-6 誘導SKOV3細胞凋亡14-36
• 1.1 對象和方法14-26
• 1.1.1 實驗對象14
• 1.1.2 實驗材料14-17
• 1.1.3 SKOV3細胞培養(yǎng)17-18
• 1.1.4 MTT法篩選BV-6最佳有效劑量和無毒劑量18-19
• 1.1.5 光鏡觀察BV-6 誘導SKOV3細胞凋亡形態(tài)學變化19-20
• 1.1.6 RT-PCR法檢測TNF-a mRNA的表達20-23
• 1.1.7 Western blot法檢測TNF-a蛋白的表達23-25
• 1.1.8 統(tǒng)計學方法25-26
• 1.2 結果26-31
• 1.2.1 確定BV-6 最佳有效劑量和無毒劑量26-28
• 1.2.2 BV-6 誘導SKOV3細胞凋亡形態(tài)學變化28-29
• 1.2.3 BV-6 對TNF-α mRNA表達的影響29-30
• 1.2.4 BV-6對TNF-α蛋白表達的影響30-31
• 1.3 討論31-35
• 1.4 小結35-36
• 二、BV-6 增加SKOV3細胞順鉑敏感性36-46
• 2.1 對象和方法36-37
• 2.1.1 實驗對象及材料36
• 2.1.2 MTT法檢測BV-6 對順鉑IC50的影響36
• 2.1.3 RT-PCR法、Western Blot法檢測Caspase的表達36
• 2.1.4 統(tǒng)計學方法36-37
• 2.2 結果37-41
• 2.2.1 BV-6 對SKOV3細胞順鉑順鉑敏感性的影響37-39
• 2.2.2 不同分組Caspase m RNA的表達39-40
• 2.2.3 不同分組Caspase蛋白的表達40-41
• 2.3 討論41-45
• 2.4 小結45-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-52
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明52-53
• 綜述 IAPs抑制劑--Smac模擬物的研究進展53-61
• 綜述參考文獻57-61
• 致謝61-62
• 個人簡歷62

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 強娟;張虹;;Smac和XIAP與卵巢癌細胞耐藥及凋亡關系的研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2014年22期

2 李敏;林俊;;細胞凋亡途徑及其機制[J];國際婦產(chǎn)科學雜志;2014年02期

3 ;Niclosamide,an old antihelminthic agent,demonstrates antitumor activity by blocking multiple signaling pathways of cancer stem cells[J];癌癥;2012年04期

4 徐欣然;張虹;;Smac/DIABLO在上皮性卵巢癌組織中的表達及臨床意義[J];國際婦產(chǎn)科學雜志;2010年02期

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本文編號：820772