本文關(guān)鍵詞：超排卵周期和自然周期中未成熟卵母細胞的體外成熟及玻璃化冷凍的研究

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【摘要】：第一章超排卵周期和自然周期中未成熟卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)目的：在傳統(tǒng)輔助生殖(assisted reproductive technique, ART)治療過程中,患者經(jīng)控制性超排卵周期往往可獲得大量卵母細胞,但在這些卵母細胞中有15%由于未成熟而無法受精,最終這些未成熟卵母細胞多將被拋棄。本研究對ART治療中控制性超排卵周期和自然周期中所得到的未成熟卵母細胞進行未成熟卵母細胞體外成熟(in vitro maturation, IVM),并對培養(yǎng)成熟后的卵母細胞進行卵胞漿內(nèi)單精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI),然后觀察其受精、胚胎發(fā)育及臨床妊娠情況,目的在于評估這些未成熟卵母細胞的臨床應(yīng)用價值,提高卵母細胞利用率。材料和方法：1.材料來源：本研究資料篩選了2010年1月至2014年12月廣州南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院婦產(chǎn)科生殖醫(yī)學(xué)中心實施未成熟卵母細胞體外培養(yǎng)的患者。共計109個周期。其中64例為長方案促排卵ICSI周期,共獲得248個不成熟卵母細胞,45例來自于自然周期,共獲得45個未成熟卵母細胞。根據(jù)未成熟卵母細胞來源分為超排卵組和自然周期組。2.方法：患者于前一月經(jīng)周期黃體中期開始使用促性腺素釋放激素(gonadotropin-releasing hormone agonists, GnRHa)予以降調(diào)節(jié),于降調(diào)后14-15天來院抽血查E2、P、LH的水平及行B超檢查,確定是否達到降調(diào)效果,如達到則加用促性腺激素(gonadotropin, Gn),根據(jù)B超監(jiān)測及血清激素的水平調(diào)整Gn用量,當(dāng)≥18mm卵泡有2個以上時,當(dāng)晚給予人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin hormone, HCG)10000IU,注射后36小時在B超引導(dǎo)下穿刺取卵。將收集的卵母細胞在37℃、6%CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)4-6小時,然后在80IU/ml的透明質(zhì)酸酶作用下去除顆粒細胞,將有第一極體的成熟卵母細胞進行常規(guī)卵胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI),剩余未成熟卵母細胞(MI期和GV期)在常規(guī)G-IVF plus培養(yǎng)液中37"C、6%C02及飽和濕度條件下培養(yǎng)24-30小時。將培養(yǎng)成熟的卵母細胞(MII期)進行常規(guī)ICSI授精并放于G1-plus培養(yǎng)液中37℃、6%C02及飽和濕度條件下培養(yǎng)16-18小時后觀察受精情況,將有明顯2PN的正常受精胚胎繼續(xù)胚胎培養(yǎng),并于受精后24小時和48小時對胚胎進行胚胎質(zhì)量評估。選取質(zhì)量最優(yōu)胚胎進行第三天常規(guī)胚胎移植,剩余胚胎進行常規(guī)冷凍。移植后12天檢測血β-HCG,若妊娠,在胚胎移植后4周行超聲檢查,若出現(xiàn)妊娠囊,則確定為臨床妊娠。對成熟率、受精率、優(yōu)良胚胎率和臨床妊娠情況進行統(tǒng)計比較。結(jié)果：超排卵組患者平均年齡34.48±5.7,自然周期組患者平均年齡36.29±7.2,組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。超排卵組共有248個未成熟卵母細胞進行了IVM,最終成熟163個；自然周期組共有45個未成熟卵母細胞進行了IVM,最終成熟43個。兩組成熟率分別為超排卵組65.73%、自然周期組95.56%,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在對兩組成熟卵母細胞ICSI授精后,超排卵組共有105個卵母細胞受精,受精率為64.42%、自然周期組共有33個卵母細胞受精,受精率為76.74%;正常受精胚胎培養(yǎng)24小時后超排卵組有80個胚胎卵裂,卵裂率為89.89%、自然周期組共有27個胚胎卵裂,卵裂率為100%；培養(yǎng)至第三天超排卵組共形成14個優(yōu)良胚胎,優(yōu)良胚胎率17.50%、自然周期組形成9個優(yōu)良胚胎,優(yōu)良胚胎率為33.33%。兩組在受精率、卵裂率及優(yōu)良胚胎率方面的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。超排卵組共進行了25例移植,沒有獲得妊娠；自然周期組共進行了19例移植,妊娠5例,兩組間妊娠率分別為超排卵組0%、自然周期組26.32%,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1.自然周期所獲得的未成熟卵母細胞在通過IVM培養(yǎng)、ICSI授精后可以得到形態(tài)學(xué)上優(yōu)質(zhì)的胚胎,通過移植后能實現(xiàn)患者妊娠,有較好的臨床應(yīng)用價值。2.超排卵周期中的未成熟卵母細胞在通過IVM培養(yǎng)、ICSI授精后可以得到形態(tài)學(xué)上優(yōu)質(zhì)的胚胎。第二章超排卵周期中體外成熟卵母細胞的玻璃化冷凍目的：在傳統(tǒng)輔助生殖(ART)治療過程中,患者經(jīng)控制性超排卵周期往往可獲得大量卵母細胞,但在這些卵母細胞中大約有15%由于未成熟而無法受精,最終這些未成熟卵母細胞多將被拋棄。本研究對ART治療中控制性超排卵周期中剩余的未成熟卵母細胞進行體外成熟培養(yǎng)(IVM),然后對培養(yǎng)成熟的卵母細胞進行玻璃化冷凍復(fù)蘇并行ICSI授精,將其受精及胚胎發(fā)育情況與未經(jīng)玻璃化冷凍復(fù)蘇的體外成熟卵母細胞比較,目的在于研究體外成熟卵母細胞的玻璃化冷凍保存和復(fù)蘇,以及受精、胚胎發(fā)育情況,并進一步探討未成熟卵母細胞再利用的可行性。材料和方法：1.材料來源：IVM冷凍組材料收集自2014年1月到2014年12月在廣州南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心進行長方案促排卵ICSI周期的不孕患者所剩余的廢棄未成熟卵母細胞,共收集92個未成熟卵母細胞,其中包括GV期卵母細胞51個,MI期卵母細胞41個。IVM組資料篩選了2010年1月至2014年12月廣州南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院婦產(chǎn)科生殖醫(yī)學(xué)中心實施未成熟卵母細胞體外培養(yǎng)的患者。共64個長方案促排卵ICSI周期,獲得248個未成熟卵母細胞。2.方法：將收集的未成熟卵母細胞(MI期和GV期)在G2-plus囊胚培養(yǎng)液中37-C、6%C02及飽和濕度條件下培養(yǎng)24-30小時,收集有極體排出的成熟卵母細胞(MII期)。1)玻璃化冷凍：將成熟卵母細胞1-2個(不超過3個)用煅燒拉細的巴氏吸管移入ES液中5-15分鐘,觀察其體積變化情況,當(dāng)卵母細胞皺縮后又恢復(fù)到原體積時將其移入VS液中。在VS液中不同的位置吹吸卵母細胞3次以上,然后將卵母細胞和盡量少的VS液放到Cryotop載體尖端,并迅速投入液氮,把載體放入冷凍支架,投入液氮罐提桶中保存。2)玻璃化復(fù)蘇：把要解凍的載體從液氮罐中取出,將載體尖端迅速放入TS液中,在解剖顯微鏡下找到載體尖端上的卵母細胞,并輕微抖動,使卵母細胞滑入TS液內(nèi)。卵母細胞在TS液中停留1分鐘。用煅燒拉細的巴氏吸管將卵母細胞轉(zhuǎn)移到DS液中停留3分鐘,然后移入WS1和WS2液中各停留5分鐘,最后將卵母細胞放入裝有G-IVF plus的小皿中,顯微鏡下觀察卵母細胞存活情況,在37℃、6%CO2及飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。3)授精及胚胎培養(yǎng)：解凍復(fù)蘇后的卵母細胞在G-IVF plus培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)2小時并進行ICSI授精,授精后將其放于G1-plus培養(yǎng)液中37℃、6%CO2及飽和濕度條件下培養(yǎng)16-18小時后觀察受精情況,將有明顯2PN的正常受精胚胎繼續(xù)胚胎培養(yǎng),并于受精后24小時和48小時對胚胎進行胚胎質(zhì)量評估。結(jié)果：IVM組患者平均年齡34.48±5.7,IVM冷凍組患者平均年齡32.00±4.2,組間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。IVM組共有248個未成熟卵母細胞進行了IVM,最終成熟163個,成熟率為65.73%;IVM冷凍組共有92個未成熟卵母細胞行IVM培養(yǎng),成熟78個,成熟率為84.78%。兩組間成熟率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。IVM冷凍組共有92個未成熟卵母細胞,其中GV期卵母細胞51個,IVM成熟38個,成熟率74.51%；MI期卵母細胞41個,IVM成熟40個,成熟率97.56%,GV組和MI組成熟率組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。IVM冷凍組共冷凍78個成熟卵母細胞,復(fù)蘇存活63個,復(fù)蘇率80.77%；其中來源于GV期的成熟卵母細胞35個,復(fù)蘇存活30個,復(fù)蘇率85.71%；來源于MI期的成熟卵母細胞43個,復(fù)蘇存活33個,復(fù)蘇率76.74%。GV組與MI組復(fù)蘇率差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。IVM組和IVM冷凍組培養(yǎng)成熟后的卵母細胞經(jīng)ICSI授精后其受精率、卵裂率、優(yōu)良胚胎率分別為IVM組64.42%(105/163)、89.89%(80/89)、17.50%(14/80)；IVM冷凍組77.78%(49/63)、91.11%(41/45)、21.95%(9/41),IVM組和IVM冷凍組受精率、卵裂率、優(yōu)良胚胎率組間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。IVM冷凍組復(fù)蘇的卵母細胞中來源于GV期的成熟卵母細胞共30個,其受精率、卵裂率、優(yōu)良胚胎率分別為73.33%(22/30)、90.90%(20/22)、15.00%(3/20)；來源于MI期的成熟卵母細胞共33個,其受精率、卵裂率、優(yōu)良胚胎率分別為81.82%(27/33)、91.30%(21/23)、28.57%(6/21),GV組和MI組受精率、卵裂率、優(yōu)良胚胎率組間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1.未成熟卵母細胞能在G2-plus囊胚培養(yǎng)液中發(fā)育成熟。2.在超排卵周期中剩余的未成熟卵母細胞在體外培養(yǎng)成熟經(jīng)玻璃化冷凍復(fù)蘇后,能進一步受精并發(fā)育成形態(tài)上優(yōu)質(zhì)的胚胎。
【關(guān)鍵詞】：人未成熟卵母細胞 體外成熟 玻璃化冷凍 發(fā)育潛能
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R714.8
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-15
• 前言15-20
• 參考文獻17-20
• 第一章 超排卵周期和自然周期中未成熟卵母細胞的體外成熟培養(yǎng)20-37
• 引言20
• 1. 材料和方法20-27
• 2. 結(jié)果27-29
• 3. 討論29-33
• 4. 結(jié)論33
• 參考文獻33-37
• 第二章 超排卵周期中體外成熟卵母細胞的玻璃化冷凍37-53
• 引言37
• 1 材料和方法37-42
• 2 結(jié)果42-44
• 3 討論44-49
• 4.結(jié)論49
• 參考文獻49-53
• 全文小結(jié)53-55
• 附錄55-57
• 成果57-58
• 縮略詞表58-60
• 致謝60-61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：785796