本文關鍵詞：雄激素受體剪接變異體核轉功能障礙的機制研究

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【摘要】：1、HSP90在AR基因pre-mRNA剪接變異體核轉位障礙中的作用 研究目的：明確HSP90在雄激素受體剪接變異體核轉位障礙中的作用,闡述其與PCOS患者高雄狀態(tài)之間的關系。 研究方法：建立過表達細胞模型,使用免疫熒光技術,分析由不同AR剪接變體編碼的蛋白質核轉位能力的差異。并通過Co-IP和Western Blot技術分析AR剪接變異體與HSP90的結合親和力的改變。同時利用免疫熒光技術檢測AR剪接變異體與HSP90的亞細胞共定位變化。 研究結果：免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)過表達模型在雄激素暴露2小時后野生型AR絕大部分入核,而兩種剪接變異體(缺失型AR和插入型AR)大部分仍集中在胞漿中,入核明顯減少,出現(xiàn)核轉位障礙；免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)未受到雄激素刺激時兩種雄激素受體剪接變異體與野生型雄激素受體相比結合了更多的HSP90,在雄激素刺激后,兩種剪接變異體與HSP90的結合出現(xiàn)了明顯的下降。共定位實驗顯示雄激素暴露后兩種剪接變異體與HSP90的共定位主要出現(xiàn)在胞漿中,并且共定位明顯減少。 結論：雄激素受體剪接變異體與HSP90的結合出現(xiàn)異常,可能是其核轉位障礙的重要原因。 2、Importin a在AR基因pre-mRNA剪接變異體核轉位障礙中的作用 研究目的：明確importin a在雄激素受體剪接變異體核轉位障礙中的作用,闡述其與PCOS患者高雄狀態(tài)之間的關系。 研究方法：建立過表達細胞模型,使用免疫熒光技術,分析由不同AR剪接變體編碼的蛋白質核轉位能力的差異。并通過Co-IP技術分析造成這種核轉位差異的可能機制。將沉淀下來的蛋白質復合物進行Western Blot以檢測與核轉位過程關系密切的蛋白質importin a以分析雄激素受體的野生型和剪接變體與其結合解離能力的差異,從而闡明AR剪接變體與高雄的關系。 研究結果：免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)過表達模型在雄激素暴露2小時后野生型AR絕大部分入核,而兩種剪接變異體(缺失型雄激素受體和插入型雄激素受體)大部分仍集中在胞漿中,入核明顯減少,出現(xiàn)核轉位障礙；免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)未受到雄激素刺激時兩種雄激素受體剪接變異體與野生型雄激素受體相比結合了更多的importin a,在雄激素刺激后,兩種剪接變異體與importin a的結合出現(xiàn)了明顯的下降。共定位實驗顯示雄激素暴露后兩種剪接變異體與importin a的共定位主要出現(xiàn)在胞漿中,并且共定位明顯減少。 結論：雄激素受體剪接變異體與importin a的結合出現(xiàn)異常,可能是其核轉位障礙的重要原因。
【關鍵詞】：雄激素受體 剪接變異 高雄 多囊卵巢綜合征 分子伴侶 核轉位 雄激素受體 剪接變異 高雄 多囊卵巢 核輸入蛋白 核轉位
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R711.75
【目錄】：

• 致謝5-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-15
• 縮略詞表15-18
• 第1章 HSP90在AR基因pre-mRNA剪接變異體核轉位障礙中的作用18-47
• 1.0 背景18-22
• 1.1 材料與方法22-33
• 1.1.1 主要試劑與儀器22-24
• 1.1.2 研究對象24-25
• 1.1.3 研究方法25-33
• 1.2 結果33-43
• 1.2.1 三種AR過表達效率33-34
• 1.2.2 HSP90在三種過表達模型中的mRNA表達水平34
• 1.2.3 三種AR在KGN細胞中的核轉位能力34-36
• 1.2.4 三種AR與HSP90及HSP70的結合能力36-38
• 1.2.5 三種AR與HSP90的亞細胞共定位38-40
• 1.2.6 檢測過表達三種AR的293細胞胞漿中三種AR、HSP90及HSP70的蛋白表達水平40-43
• 1.3 討論43-46
• 1.4 結論46-47
• 第2章 Importin α在AR基因pre-mRNA剪接變體核轉位障礙中的作用47-63
• 2.1 背景47-49
• 2.2 材料與方法49-53
• 2.2.1 主要試劑與儀器49-51
• 2.2.2 研究對象51
• 2.2.3 研究方法51-53
• 2.3 結果53-60
• 2.3.1 Importin α在三種AR過表達模型中核轉位情況53
• 2.3.2 過表達三種AR的293細胞中importin α表達水平53-54
• 2.3.3 三種AR與importin α的結合能力54-55
• 2.3.4 三種AR與Importin α的亞細胞共定位55-57
• 2.3.5 檢測過表達三種AR的293細胞胞漿中三種AR、importinα的蛋白表達水平57-60
• 2.4 討論60-62
• 2.5 結論62-63
• 參考文獻63-71
• 綜述71-78
• 參考文獻76-78
• 研究生期間發(fā)表學術論文78-79
• 個人簡歷79-80

【共引文獻】

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中國重要會議論文全文數(shù)據庫 前1條

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本文編號：762536