本文關(guān)鍵詞：BML-111下調(diào)OPN抑制Hela細(xì)胞（宮頸癌）增殖和遷移

  更多相關(guān)文章： 宮頸癌 增殖 遷移 脂氧素類似物 脂多糖 骨橋蛋白 P53 Boc-2

【摘要】：目的:人乳頭狀瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)持續(xù)感染引起的宮頸慢性炎癥是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的最主要原因。脂氧素(lipoxins,LXs)是炎癥反應(yīng)的“剎車信號(hào)”[1,2]。故推測(cè)脂氧素類似物(BML-111)可能通過抑制宮頸慢性炎癥來抑制宮頸癌的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)擬用脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)體外模擬炎癥微環(huán)境,觀察BML-111對(duì)LPS誘導(dǎo)的宮頸癌Hela細(xì)胞株的增殖和遷移的影響。并與沉默OPN基因的Hela細(xì)胞比較,再次觀察BML-111對(duì)細(xì)胞增殖和遷移的影響,并對(duì)其發(fā)生機(jī)制進(jìn)行研究,為宮頸癌的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:(1)通過MTT實(shí)驗(yàn),應(yīng)用LPS誘導(dǎo)Hela細(xì)胞的炎癥反應(yīng),并檢測(cè)BML-111對(duì)細(xì)胞存活率的影響;(2)通過Western blot(免疫印跡法)觀察BML-111對(duì)LPS誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞OPN、P53、MMP2及MMP9蛋白表達(dá)的影響;(3)通過轉(zhuǎn)染沉默OPN基因的質(zhì)粒,在人Hela細(xì)胞產(chǎn)生OPN表達(dá)的抑制,通過Western blot方法再次觀察BML-111對(duì)LPS誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞OPN、P53、MMP2及MMP9蛋白表達(dá)的影響;(4)通過劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn),用LPS誘導(dǎo)Hela細(xì)胞的出現(xiàn)炎癥反應(yīng)后,觀察BML-111對(duì)Hela細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果:(1)MTT顯示,用不同濃度的LPS刺激Hela細(xì)胞檢測(cè)24h細(xì)胞存活率,空白組、100,10,1,0.1μg/mL LPS刺激組OD值分別為0.8319±0.01894,1.1611±0.01548,1.1587±0.01805,1.1486±0.01209,1.1502±0.01653,LPS的四個(gè)濃度組均能促進(jìn)Hela細(xì)胞增殖(P0.05),且四組間無顯著差異(P0.05)。(2)MTT結(jié)果顯示,200μg/L BML-111對(duì)LPS誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞增殖結(jié)果如下,空白組、LPS組、LPS+BML-111組和LPS+BML-111+Boc-2組的OD值分別為0.8314±0.01462、1.1744±0.01667、0.8338±0.01867、1.0344±0.02506。BML-111能明顯抑制LPS誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞增殖(P0.05),給予Boc-2預(yù)處理后BML-111的抑制增殖作用消失(P0.05)。(3)通過Western blot方法檢測(cè),在未轉(zhuǎn)染組中,LPS刺激組OPN、P53、MMP2及MMP9表達(dá)均明顯增強(qiáng)(P=0.0000.05),BML-111明顯抑制LPS誘導(dǎo)的OPN、P53、MMP2及MMP9表達(dá)增強(qiáng)(P=0.0000.05)。而加入Boc-2預(yù)處理后,BML-111的抑制作用消失(OPN P=0.000,P53 P=0.000均0.05)。(4)通過Western blot方法檢測(cè),將Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)染沉默OPN基因的質(zhì)粒,在轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,空白組、LPS組、LPS+BML-111組和LPS+BML-111+Boc-2各組間的OPN、P53(突變型)、MMP2及MMP9蛋白的表達(dá)無明顯差異。(5)通過細(xì)胞劃痕和Transwell實(shí)驗(yàn),在未轉(zhuǎn)染組中,相對(duì)于空白組而言,LPS刺激組Hela細(xì)胞的遷移能力明顯增強(qiáng)(P0.05);相對(duì)于LPS刺激組,LPS+BML-111組Hela細(xì)胞遷移能力明顯減弱(P0.05);相對(duì)于LPS+BML-111組而言,LPS+BML-111+Boc-2組Hela細(xì)胞遷移能力明顯增強(qiáng)(P0.05)。在轉(zhuǎn)染組中,各組間蛋白表達(dá)無明顯差異。結(jié)論:1.BML-111能明顯抑制LPS誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞增殖及遷移。2.BML-111抑制LPS誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞增殖及遷移的作用是通過抑制OPN實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 增殖 遷移 脂氧素類似物 脂多糖 骨橋蛋白 P53 Boc-2
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮寫一覽表10-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料和方法14-23
• 2.1 材料14-16
• 2.1.1 主要試劑14-15
• 2.1.2 主要儀器15
• 2.1.3 溶液配制15-16
• 2.2 方法16-23
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-18
• 2.2.2 MTT實(shí)驗(yàn)18
• 2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染18-19
• 2.2.4 western-blot(蛋白免疫印跡法)19-21
• 2.2.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（傷口愈合實(shí)驗(yàn)，wound healing test）21-22
• 2.2.6 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)22
• 2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理22-23
• 第3章 結(jié)果23-34
• 3.1 不同濃度LPS對(duì)Hela細(xì)胞增殖的影響23-24
• 3.2 BML-111對(duì)LPS誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞增殖的影響24-25
• 3.3 BML-111 對(duì) LPS 誘導(dǎo)的 Hela 細(xì)胞 OPN、P53（突變型）、MMP2以及 MMP 9 蛋白表達(dá)的影響25-26
• 3.4 沉默 OPN 基因的 Sh RNA 轉(zhuǎn)染 Hela 細(xì)胞后，觀察 BML-111 對(duì)LPS 誘導(dǎo)的 Si-OPN-Hela 細(xì)胞 OPN、P53、MMP2 及 MMP9 蛋白表達(dá)的影響26-29
• 3.5 BML-111抑制LPS引起的Hela細(xì)胞遷移及穿膜能力增加29-32
• 3.6 BML-111對(duì)LPS引起的Si-OPN-Hela細(xì)胞遷移及穿膜能力無影響32-34
• 第4章 討論34-37
• 第5章 結(jié)論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果42-43
• 綜述43-49
• 參考文獻(xiàn)48-49

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：733282