本文關鍵詞：BML-111下調OPN抑制Hela細胞（宮頸癌）增殖和遷移

  更多相關文章： 宮頸癌 增殖 遷移 脂氧素類似物 脂多糖 骨橋蛋白 P53 Boc-2

【摘要】：目的:人乳頭狀瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)持續(xù)感染引起的宮頸慢性炎癥是導致宮頸癌發(fā)生的最主要原因。脂氧素(lipoxins,LXs)是炎癥反應的“剎車信號”[1,2]。故推測脂氧素類似物(BML-111)可能通過抑制宮頸慢性炎癥來抑制宮頸癌的發(fā)生。本實驗擬用脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)體外模擬炎癥微環(huán)境,觀察BML-111對LPS誘導的宮頸癌Hela細胞株的增殖和遷移的影響。并與沉默OPN基因的Hela細胞比較,再次觀察BML-111對細胞增殖和遷移的影響,并對其發(fā)生機制進行研究,為宮頸癌的臨床治療提供實驗依據。方法:(1)通過MTT實驗,應用LPS誘導Hela細胞的炎癥反應,并檢測BML-111對細胞存活率的影響;(2)通過Western blot(免疫印跡法)觀察BML-111對LPS誘導的Hela細胞OPN、P53、MMP2及MMP9蛋白表達的影響;(3)通過轉染沉默OPN基因的質粒,在人Hela細胞產生OPN表達的抑制,通過Western blot方法再次觀察BML-111對LPS誘導的Hela細胞OPN、P53、MMP2及MMP9蛋白表達的影響;(4)通過劃痕實驗和Transwell實驗,用LPS誘導Hela細胞的出現炎癥反應后,觀察BML-111對Hela細胞遷移的影響。結果:(1)MTT顯示,用不同濃度的LPS刺激Hela細胞檢測24h細胞存活率,空白組、100,10,1,0.1μg/mL LPS刺激組OD值分別為0.8319±0.01894,1.1611±0.01548,1.1587±0.01805,1.1486±0.01209,1.1502±0.01653,LPS的四個濃度組均能促進Hela細胞增殖(P0.05),且四組間無顯著差異(P0.05)。(2)MTT結果顯示,200μg/L BML-111對LPS誘導的Hela細胞增殖結果如下,空白組、LPS組、LPS+BML-111組和LPS+BML-111+Boc-2組的OD值分別為0.8314±0.01462、1.1744±0.01667、0.8338±0.01867、1.0344±0.02506。BML-111能明顯抑制LPS誘導的Hela細胞增殖(P0.05),給予Boc-2預處理后BML-111的抑制增殖作用消失(P0.05)。(3)通過Western blot方法檢測,在未轉染組中,LPS刺激組OPN、P53、MMP2及MMP9表達均明顯增強(P=0.0000.05),BML-111明顯抑制LPS誘導的OPN、P53、MMP2及MMP9表達增強(P=0.0000.05)。而加入Boc-2預處理后,BML-111的抑制作用消失(OPN P=0.000,P53 P=0.000均0.05)。(4)通過Western blot方法檢測,將Hela細胞轉染沉默OPN基因的質粒,在轉染48小時后,空白組、LPS組、LPS+BML-111組和LPS+BML-111+Boc-2各組間的OPN、P53(突變型)、MMP2及MMP9蛋白的表達無明顯差異。(5)通過細胞劃痕和Transwell實驗,在未轉染組中,相對于空白組而言,LPS刺激組Hela細胞的遷移能力明顯增強(P0.05);相對于LPS刺激組,LPS+BML-111組Hela細胞遷移能力明顯減弱(P0.05);相對于LPS+BML-111組而言,LPS+BML-111+Boc-2組Hela細胞遷移能力明顯增強(P0.05)。在轉染組中,各組間蛋白表達無明顯差異。結論:1.BML-111能明顯抑制LPS誘導的Hela細胞增殖及遷移。2.BML-111抑制LPS誘導的Hela細胞增殖及遷移的作用是通過抑制OPN實現。
【關鍵詞】：宮頸癌 增殖 遷移 脂氧素類似物 脂多糖 骨橋蛋白 P53 Boc-2
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮寫一覽表10-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料和方法14-23
• 2.1 材料14-16
• 2.1.1 主要試劑14-15
• 2.1.2 主要儀器15
• 2.1.3 溶液配制15-16
• 2.2 方法16-23
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)16-18
• 2.2.2 MTT實驗18
• 2.2.3 細胞轉染18-19
• 2.2.4 western-blot(蛋白免疫印跡法)19-21
• 2.2.5 細胞劃痕實驗（傷口愈合實驗，wound healing test）21-22
• 2.2.6 細胞遷移實驗22
• 2.2.7 統(tǒng)計學處理22-23
• 第3章 結果23-34
• 3.1 不同濃度LPS對Hela細胞增殖的影響23-24
• 3.2 BML-111對LPS誘導的Hela細胞增殖的影響24-25
• 3.3 BML-111 對 LPS 誘導的 Hela 細胞 OPN、P53（突變型）、MMP2以及 MMP 9 蛋白表達的影響25-26
• 3.4 沉默 OPN 基因的 Sh RNA 轉染 Hela 細胞后，觀察 BML-111 對LPS 誘導的 Si-OPN-Hela 細胞 OPN、P53、MMP2 及 MMP9 蛋白表達的影響26-29
• 3.5 BML-111抑制LPS引起的Hela細胞遷移及穿膜能力增加29-32
• 3.6 BML-111對LPS引起的Si-OPN-Hela細胞遷移及穿膜能力無影響32-34
• 第4章 討論34-37
• 第5章 結論37-38
• 致謝38-39
• 參考文獻39-42
• 攻讀學位期間的研究成果42-43
• 綜述43-49
• 參考文獻48-49

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前9條

1 劉田雨;姚書忠;;宮頸癌腫瘤微環(huán)境研究進展[J];國際婦產科學雜志;2015年02期

2 郝華;徐芬;鄔黎青;張昕昕;戴華;;脂氧素類似物BML-111抑制Hela細胞增殖及機制初探[J];實用醫(yī)學雜志;2014年13期

3 曾艷;周蓉;;骨橋蛋白在子宮頸癌組織中表達及其與宮頸癌侵襲轉移關系的研究[J];中外醫(yī)療;2014年11期

4 方芳;惠寧;;下調骨橋蛋白對宮頸癌Hela細胞生長和侵襲的影響[J];現代婦產科進展;2013年01期

5 Hui-Juan Yang;;Aberrant DNA methylation in cervical carcinogenesis[J];Chinese Journal of Cancer;2013年01期

6 黃波;;腫瘤微環(huán)境中免疫與炎癥的調節(jié)[J];中國腫瘤生物治療雜志;2012年02期

7 靳亞妮;王海琳;侯大喬;;STAT3信號轉導通路調控人宮頸癌Hela細胞增殖、凋亡的機制[J];中國婦幼保健;2011年29期

8 吉登波;崔景榮;;腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及治療與炎癥的關系[J];中國新藥雜志;2010年17期

9 王培樺,沈洪兵,陳峰,趙金扣;叉生分析在基因-環(huán)境交互作用研究中的應用與意義[J];中華流行病學雜志;2005年01期

中國博士學位論文全文數據庫 前1條

1 熊晶;宮頸癌Hela細胞中HIF-2α基因的表達及相關研究[D];中南大學;2010年

中國碩士學位論文全文數據庫 前1條

1 吳婷婷;NF-κB及相關因子在宮頸癌細胞株中的表達及意義[D];山西醫(yī)科大學;2013年

，

本文編號：733282