本文關(guān)鍵詞：5-氮雜-2’脫氧胞苷對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系增殖及IGFBP7表達(dá)的影響

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【摘要】：背景與目的子宮內(nèi)膜癌(Endometrial cancer,EC)是全球范圍內(nèi)女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率僅次于子宮頸癌居于第二位,且呈逐年上升趨勢(shì)。在中國,僅2012年就有62000個(gè)新發(fā)病例,居于女性惡性腫瘤的第九位。但其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(Insulin-like growth factor binging protein 7,IGFBP7)是分子量為30-k Da的一種分泌蛋白,研究發(fā)現(xiàn),其在前列腺癌、惡性黑色素瘤、結(jié)直腸癌、甲狀腺癌等多種實(shí)體腫瘤中表達(dá)下降或缺失,其異常表達(dá)與Cp G島高甲基化導(dǎo)致基因沉默相關(guān),應(yīng)用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮雜-2’脫氧胞苷(5-aza-2 deoxycytidine,5-Aza-d C,decitabine)處理后其表達(dá)上調(diào),并發(fā)揮抑癌功能。課題組前期研究結(jié)果顯示,IGFBP7在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中表達(dá)下降或缺失,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法,使子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中IGFBP7的表達(dá)上調(diào),結(jié)果發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖速率降低,凋亡率增加;另外,向子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞培養(yǎng)基中加入人重組IGFBP7,發(fā)現(xiàn)其能通過調(diào)控MEK/ERK信號(hào)通路,抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用5-氮雜-2’脫氧胞苷處理子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞,觀察其對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖及對(duì)IGFBP7表達(dá)的影響,探討其治療子宮內(nèi)膜癌的可能性。方法(1)四種不同濃度5-Aza-d C(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)分別刺激子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞24、48、72h。應(yīng)用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測(cè)不同濃度5-Aza-d C在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)子宮內(nèi)膜HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞增殖活性的影響,并計(jì)算其對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的抑制率。(2)應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(q RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)5μmol/L 5-Aza-d C處理72小時(shí)前后HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞中IGFBP7 m RNA的表達(dá)變化。(3)應(yīng)用免疫蛋白印跡(Western blot)法檢測(cè)5μmol/L 5-Aza-d C處理72小時(shí)前后HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞中IGFBP7蛋白的表達(dá)變化。(4)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,定量資料以sx±表示,符合正態(tài)分布的兩組獨(dú)立數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗(yàn),符合正態(tài)分布的多組定量資料采用單因素方差分析,多個(gè)樣本均數(shù)間的兩兩比較采用LSD-t法,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)結(jié)果1 CCK-8法檢測(cè)不同濃度5-Aza-d C對(duì)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞增殖活性的影響結(jié)果顯示,四種不同濃度5-Aza-d C(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)作用24、48、72h均能抑制HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞的增殖。相同的藥物濃度,隨著作用時(shí)間的延長,細(xì)胞增殖率明顯降低,抑制率增加,呈時(shí)間依賴性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);相同的作用時(shí)間,隨著藥物濃度的升高,細(xì)胞增殖率明顯降低,抑制率增加,呈劑量依賴性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2 5-Aza-d C對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A及Ishikawa中IGFBP7 m RNA表達(dá)的影響結(jié)果顯示,應(yīng)用5μmol/L 5-Aza-d C處理HEC-1A細(xì)胞72小時(shí)后,IGFBP7m RNA的相對(duì)表達(dá)量為19.81±0.80,與處理前相比較,m RNA的表達(dá)量明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5μmol/L 5-Aza-d C處理Ishikawa細(xì)胞72h后,其IGFBP7m RNA的表達(dá)量為9.39±0.94,與處理前相比較,表達(dá)明顯上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3 5-Aza-d C對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A及Ishikawa中IGFBP7蛋白表達(dá)的影響結(jié)果顯示,經(jīng)5μmol/L 5-Aza-d C處理72小時(shí)后,HEC-1A細(xì)胞中IGFBP7蛋白的相對(duì)表達(dá)量為1.64±0.02,與處理前0.74±0.13相比,其表達(dá)水平明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。相同條件處理Ishikawa細(xì)胞后,IGFBP7蛋白的相對(duì)表達(dá)量為0.92±0.15,與處理前0.57±0.01相比,其表達(dá)水平明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.5-Aza-d C對(duì)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞具有增殖抑制作用;2.IGFBP7在子宮內(nèi)膜癌HEC-1A及Ishikawa細(xì)胞中低表達(dá),5-Aza-d C可誘導(dǎo)體外子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系IGFBP7表達(dá),甲基化機(jī)制參與了IGFBP7的表達(dá)調(diào)控。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7 5-氮雜-2’脫氧胞苷
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 縮略詞表11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-33
• 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述 表遺傳學(xué)改變?cè)谧訉m內(nèi)膜癌中的研究進(jìn)展38-56
• 參考文獻(xiàn)48-56
• 個(gè)人簡歷及發(fā)表的論文情況56-57
• 致謝57

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1 段情;5-氮雜-2’脫氧胞苷對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系增殖及IGFBP7表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：725549