本文關(guān)鍵詞：AKT2通過PKM2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞增殖作用的研究

  更多相關(guān)文章： 卵巢癌細(xì)胞 蛋白激酶B 慢病毒表達(dá)載體 慢病毒包裝 免疫組化Western-Bolt MTT

【摘要】：卵巢癌是最致命的婦科惡性腫瘤在美國(guó),在2013年約有22240新病例被確診,其中有14030名女性死于該疾病。卵巢癌是經(jīng)常被稱為“沉默的殺手”,因?yàn)榇蠖鄶?shù)情況下,被確診時(shí)已是臨床晚期,已經(jīng)成為威脅婦女生命和健康的主要惡性腫瘤。在查閱大量相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,本課題主要應(yīng)用免疫組化技術(shù),基因克隆、慢病毒包裝和轉(zhuǎn)導(dǎo),免疫印跡、si RNA敲減、MTT等技術(shù),探討蛋白激酶B(AKT2)通過PKM2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞增殖的作用,為發(fā)現(xiàn)有效的藥物治療作用的靶點(diǎn)奠定重要基礎(chǔ)。本課題第一部分首先應(yīng)用免疫組化技術(shù)初步驗(yàn)證人類卵巢癌組織中AKT2與PKM2表達(dá)異常是否存在相關(guān)性,收集卵巢癌組織病例116例和卵巢良性腫瘤周邊正常組織50例,測(cè)定癌組織及卵巢良性腫瘤周邊的正常組織中AKT2和PKM2的表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析及判斷AKT2在癌及正常組織中的表達(dá)是否存在差異,并通過對(duì)比PKM2的表達(dá),總結(jié)出AKT2和PKM2與卵巢癌發(fā)展及惡變的相應(yīng)關(guān)系,在組織樣本中驗(yàn)證AKT2在卵巢癌中的表達(dá)是否與PKM2的表達(dá)存在著關(guān)聯(lián)。結(jié)果表明:AKT2在100(100/116)例卵巢癌組織中過表達(dá),過表達(dá)率為86.2%,AKT2僅在4例(8%)卵巢良性腫瘤周邊正常組織中表達(dá),Fisher’s精確檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果表明:AKT2在卵巢癌和卵巢良性腫瘤周邊正常組織中表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),AKT2和PKM2在卵巢癌組織中的表達(dá)具有相關(guān)性(R=0.505)(P0.001)。以第一部分的結(jié)果為依據(jù),本課題的第二、三部分重點(diǎn)探討AKT2通過PKM2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。本課題第二部分應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室原有的模板擴(kuò)增AKT2基因c DNA,以Xho I和Xba I酶切位點(diǎn)克隆入慢病毒表達(dá)載體(p LVX-Neo-IRES-Zs Green)中,測(cè)序鑒定正確后同慢病毒包裝輔助質(zhì)�；旌衔锕厕D(zhuǎn)染293T細(xì)胞,慢病毒包裝成功后再用AKT2重組的慢病毒液轉(zhuǎn)導(dǎo)卵巢癌SKOV3細(xì)胞,Western-Bolt鑒定并篩選出AKT2過表達(dá)的細(xì)胞株,結(jié)果表明成功地獲得了能高效表達(dá)AKT2的慢病毒載體并成功的獲得了AKT2過表達(dá)的卵巢癌SKOV3細(xì)胞株,為后續(xù)試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。本課題第三部分主要探究AKT2過表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖作用的影響以及si RNA干擾法降低AKT2過表達(dá)細(xì)胞中PKM2的表達(dá),觀察AKT2過表達(dá)前后以及敲減PKM2前后卵巢癌細(xì)胞增殖能力的變化,探究敲減PKM2后AKT2是否還能影響卵巢癌細(xì)胞增殖。結(jié)果表明:AKT2過表達(dá)的SKOV3細(xì)胞較感染空載體組及未感染組細(xì)胞增殖增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),而感染空載體組和未感染組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);用PKM2-si RNA敲減AKT2過表達(dá)SKOV3細(xì)胞中的PKM2較陰性對(duì)照Scramble-si RNA轉(zhuǎn)染的AKT2過表達(dá)的SKOV3細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染si RNA的AKT2過表達(dá)的SKOV3細(xì)胞的增殖活性差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),而用陰性對(duì)照Scramble-si RNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染si RNA的AKT2過表達(dá)的SKOV3細(xì)胞的增殖活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),結(jié)果初步提示AKT2過表達(dá)能使SKOV3卵巢癌細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),AKT2過表達(dá)細(xì)胞中敲減PKM2后細(xì)胞增殖能力下降。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌細(xì)胞 蛋白激酶B 慢病毒表達(dá)載體 慢病毒包裝 免疫組化Western-Bolt MTT
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 英文縮略詞表4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-14
• 第一部分 免疫組化檢測(cè)卵巢癌及卵巢良性腫瘤周邊正常組織中 AKT2和PKM2的表達(dá)14-22
• 引言14-15
• 材料和方法15-17
• 結(jié)果17-20
• 討論20-21
• 小結(jié)21-22
• 第二部分 AKT2慢病毒載體的構(gòu)建及慢病毒包裝和轉(zhuǎn)導(dǎo)目的細(xì)胞22-47
• 材料和方法23-34
• 結(jié)果34-45
• 討論45-46
• 小結(jié)46-47
• 第三部分 AKT2通過PKM2調(diào)控卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的初步研究47-55
• 引言47
• 材料和方法47-50
• 結(jié)果50-53
• 討論53-54
• 小結(jié)54-55
• 總結(jié)論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 致謝60-61
• 綜述61-69
• 參考文獻(xiàn)66-69

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 解智慧;孫秀華;柯丹;張洪開;于愛鳴;;肺癌中PI3K/AKT信號(hào)通路對(duì)Skp2調(diào)控機(jī)制的研究[J];山東醫(yī)藥;2010年08期

2 劉海艷;顧玉超;宓文義;于文功;;Akt1基因沉默降低小鼠乳腺癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移能力[J];中國(guó)生物工程雜志;2009年03期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 韓俊永;AKT3在乳腺癌組織中的表達(dá)及對(duì)乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：722625