本文關(guān)鍵詞：靶向SIRT1的小干擾RNA抑制宮頸癌C33A細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： SIRT1 宮頸癌 C33A細(xì)胞 Notch信號通路

【摘要】：目的:通過在細(xì)胞水平研究SIRT1對宮頸癌C33A細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡的影響及其SIRT1與Notch信號通路相關(guān)蛋白的關(guān)系,探討SIRTl在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:以化學(xué)合成的靶向SIRT1基因的小干擾RNA(si RNA)轉(zhuǎn)染C33A細(xì)胞,并分為四組:SIRT1-si RNA組、SIRT1陰性對照組、Lipofectamine?RNAi MAX組和空白細(xì)胞對照組。轉(zhuǎn)染細(xì)胞72h后,分別提取各組細(xì)胞總RNA和蛋白,RT-PCR檢測C33A細(xì)胞SIRT1 m RNA的表達(dá),免疫印跡法檢測C33A細(xì)胞中SIRT1、Notch1及Hes1等目的蛋白的表達(dá),CCK-8法檢測細(xì)胞增殖,分別應(yīng)用Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)及Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測C33A細(xì)胞的遷移及侵襲能力,流式Annexin V-PE雙染法及Hoechst33258細(xì)胞核熒光染色法檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果:RT-PCR結(jié)果表明:與空白細(xì)胞對照組及RNAi MAX組相比,SIRT1-si RNA組細(xì)胞SIRT1 m RNA表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)。Western blot結(jié)果顯示:與空白細(xì)胞對照組、SIRT1陰性對照組、RNAi MAX組相比,SIRT1-si RNA組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)量明顯下調(diào)(P0.05),Notch1和Hes1蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05)。CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:SIRT1-si RNA組細(xì)胞增殖抑制率為53.1%,SIRT1陰性對照組細(xì)胞增殖抑制率為35.4%,RNAi MAX組細(xì)胞增殖抑制率11.5%,SIRT1-si RNA組細(xì)胞增殖抑制率明顯高于其他組。細(xì)胞遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與SIRT1陰性對照組、RNAi MAX組和空白細(xì)胞對照組相比,SIRT1-si RNA組穿過人工基底膜細(xì)胞數(shù)明顯減少(P0.05)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明:與SIRT1陰性對照組、RNAi MAX組和空白細(xì)胞對照組相比,SIRT1-si RNA組C33A細(xì)胞早期凋亡率明顯增高(P0.05)。Hoechst33258染色顯示:SIRT1-si RNA組C33A細(xì)胞核有明顯改變,呈現(xiàn)亮藍(lán)色熒光,并可見凋亡小體,而空白細(xì)胞對照組、SIRT1陰性對照組、RNAi MAX組細(xì)胞核呈均勻淡藍(lán)色。結(jié)論:SIRT1 si RNA不僅能有效抑制C33A細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲等,而且可誘導(dǎo)C33A細(xì)胞凋亡,可能與Notch-Hes信號通路密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：SIRT1 宮頸癌 C33A細(xì)胞 Notch信號通路
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-7
• 引言7-8
• 第一章 材料與方法8-16
• 1.1 材料8
• 1.2 主要設(shè)備及儀器8
• 1.3 細(xì)胞培養(yǎng)8-9
• 1.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇8-9
• 1.3.2 細(xì)胞傳代9
• 1.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染9
• 1.5 Trizon法提取細(xì)胞RNA9-10
• 1.6 RT-PCR檢測mRNA10-11
• 1.6.1 RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA10
• 1.6.2 以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增10-11
• 1.7 C33A細(xì)胞蛋白的提取11-12
• 1.7.1 細(xì)胞蛋白的提取11
• 1.7.2 BCA法測蛋白濃度11-12
• 1.8 Western檢測目的蛋白12-13
• 1.8.1 SDS-PAGE電泳12
• 1.8.2 電轉(zhuǎn)移12
• 1.8.3 免疫檢測12-13
• 1.8.4 化學(xué)發(fā)光13
• 1.9 C33A細(xì)胞增殖檢測13
• 1.10 C33A細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)13-14
• 1.11 C33A細(xì)胞Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)14
• 1.12 Annexin V-PE法檢測細(xì)胞凋亡14
• 1.13 細(xì)胞核染色法檢測細(xì)胞凋亡14-15
• 1.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析15-16
• 第二章 結(jié)果16-24
• 2.1 RT-PCR半定量檢測C33A細(xì)胞中SIRT1 mRNA表達(dá)水平16-17
• 2.2 Western Blot檢測C33A細(xì)胞中SIRT1及其凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平17-18
• 2.3 細(xì)胞增殖檢測結(jié)果18
• 2.4 SIRT1 siRNA對C33A細(xì)胞遷移能力的影響18-20
• 2.5 SIRT1 siRNA對宮頸癌C33A細(xì)胞侵襲能力的影響20
• 2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡20-22
• 2.7 Hoechst33258核染色檢測細(xì)胞凋亡22-24
• 第三章 討論24-26
• 小結(jié)26-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 綜述29-39
• 綜述參考文獻(xiàn)36-39
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果39-40
• 致謝40-41

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 Pakhee Aggarwal;;Cervical cancer: Can it be prevented?[J];World Journal of Clinical Oncology;2014年04期

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本文編號：653210