本文關(guān)鍵詞：新合成氮雜查爾酮類(lèi)衍生物對(duì)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制及化療增敏作用

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【摘要】：背景及目的宮頸癌仍是目前導(dǎo)致婦女死亡的主要原因之一,高危型HPV的持續(xù)感染是其主要發(fā)病因素,盡管隨著早期的篩查及先進(jìn)的醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展,宮頸癌的發(fā)生率及死亡率有所下降,但仍存在晚期及轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者的預(yù)后較差的情況,主要在于細(xì)胞毒藥物對(duì)宮頸癌治療效果不顯著。目前,順鉑聯(lián)合紫杉醇的化療方案是治療晚期宮頸癌的主要手段,可延長(zhǎng)患者總生存期3個(gè)月,一旦治療失敗,缺乏二線(xiàn)或三線(xiàn)藥物;并且,多種類(lèi)型的化療藥物相結(jié)合使用后耐藥等副作用現(xiàn)象仍不能有效的避免。因此,很有必要開(kāi)發(fā)新的能夠增加宮頸癌化療敏感性的生物活性制劑。天然的黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)廣泛存在于自然界的多酚類(lèi)次生代謝產(chǎn)物,具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu),在大多數(shù)的自然植物中含量豐富,分子結(jié)構(gòu)多樣復(fù)雜,可分為:黃酮、黃酮醇、黃烷酮、黃烷酮醇、查爾酮、異黃酮、異黃酮醇、橙酮及黃烷、黃烷醇等多種類(lèi)型,具有抗氧化、抗衰老、抗病毒、抗心血管疾病、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)腫瘤耐藥性以及增強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)功能的多重藥理學(xué)活性。黃酮類(lèi)化合物對(duì)許多惡性腫瘤的體內(nèi)外生長(zhǎng)都有明顯抑制作用,對(duì)其治療機(jī)制的研究也越來(lái)越受到關(guān)注,天然的黃酮類(lèi)物質(zhì)種類(lèi)多樣,多以結(jié)合體的形式存在,提取過(guò)程較復(fù)雜,近年也不斷有合成的黃酮類(lèi)物質(zhì)問(wèn)世。本研究使用新合成的氮雜查爾酮衍生物單獨(dú)或聯(lián)合奈達(dá)鉑,體外觀(guān)察其抑制宮頸癌Hela及Siha細(xì)胞的生長(zhǎng)作用及其對(duì)奈達(dá)鉑的增敏效應(yīng),本研究證實(shí)了新合成的黃酮類(lèi)化合物具有明顯的抗宮頸癌細(xì)胞增殖以及增敏效應(yīng)。材料及方法我們合成了七個(gè)具有長(zhǎng)鏈共軛結(jié)構(gòu)新型氮雜查爾酮衍生物,并對(duì)其進(jìn)行了活性測(cè)定及結(jié)構(gòu)表征;MTT法檢測(cè)7種化合物分別對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制效果,根據(jù)其抑制率(IC50值)進(jìn)行初篩,選擇IC50值最低的1個(gè)化合物作為下一步的實(shí)驗(yàn)藥物,進(jìn)一步觀(guān)察其對(duì)He La、Siha及Ha Ca T細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用及對(duì)奈達(dá)鉑的增敏效應(yīng)。劃痕實(shí)驗(yàn)觀(guān)察所選化合物對(duì)癌細(xì)胞的遷徙抑制效應(yīng),倒置相差顯微鏡下觀(guān)察并拍照記錄不同濃度化合處理細(xì)胞24小時(shí)后形態(tài)的改變,流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞周期、凋亡的影響,蛋白免疫印跡法(Westernblot)檢測(cè)化合物對(duì)宮頸癌細(xì)胞中p53蛋白水平的影響。結(jié)果1.新合成的化合物對(duì)Hela細(xì)胞的抑制效果:7種化合物均不同程度的抑制Hela細(xì)胞的生長(zhǎng),呈濃度依賴(lài)性(IC50值為14.133μM-173.236μM),抑制強(qiáng)度依次為10g號(hào)、10f號(hào)、10b號(hào)、10a號(hào)、10d號(hào)、10e號(hào)、10c號(hào)。2.10g號(hào)化合物對(duì)Hela、Siha和Ha Ca T細(xì)胞的抑制效應(yīng):10g號(hào)化合物對(duì)He La及Siha具有明顯的生長(zhǎng)抑制效應(yīng),且呈濃度依賴(lài)性,對(duì)Hela(IC50=14.133μM)細(xì)胞的抑制效應(yīng)較Siha(IC50=18.281μM)明顯,而對(duì)Ha Ca T(IC50=243.751μM)細(xì)胞只在較高的濃度時(shí)才表現(xiàn)出溫和的細(xì)胞毒性,(P0.05)。3.10g號(hào)化合物對(duì)奈達(dá)鉑的增敏效果:用含2μM的10g號(hào)化合物的不同濃度的奈達(dá)鉑處理Hela與Siha細(xì)胞48小時(shí),在低濃度時(shí)其抑制率明顯高于單獨(dú)使用奈達(dá)鉑時(shí),對(duì)Hela(IC50 NDP:2.878ng/L;NDP+10g:0.937 ng/L)的增敏效果強(qiáng)于Siha(IC50 NDP:11.204 ng/L;NDP+10g:5.927 ng/L)。4.10g號(hào)化合物對(duì)細(xì)胞遷徙的影響:用15μM的10g號(hào)化合物處理Hela、Siha及Ha Ca T細(xì)胞株24小時(shí)后,化合物對(duì)細(xì)胞的遷徙抑制作用為:HelaSihaHa Ca T。5.10g號(hào)化合物對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響:分別用不同濃度的10g號(hào)化合物處理Hela、Siha及Ha Ca T細(xì)胞株24小時(shí)后,倒置相差顯微鏡下發(fā)現(xiàn)隨著化合物濃度的增加宮頸癌細(xì)胞形態(tài)逐漸趨于漂浮、死亡,Ha Ca T細(xì)胞無(wú)明顯變化。6.10g號(hào)化合物對(duì)細(xì)胞周期及凋亡的影響:15μM的10g號(hào)化合物對(duì)Hela、Siha及Ha Ca T細(xì)胞株24小時(shí)后,流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Hela及Siha細(xì)胞周期明顯阻滯在G0/G1期,24小時(shí)后的He La、Siha及Ha Ca T的凋亡率((12.483±0.49)%、(1.819±0.78)%、(0.785±0.32)%)顯著高于對(duì)照組((0.882±0.81)%、(0.820±0.21)%、(0.084±0.41)%),P值均小于0.05。7.10g號(hào)化合物對(duì)宮頸癌細(xì)胞P53蛋白表達(dá)水平的影響:15μM 10g號(hào)化合物的細(xì)胞培養(yǎng)液處理宮頸癌Hela及Si Ha細(xì)胞24小時(shí)后,He La及Siha細(xì)胞中P53蛋白的相對(duì)表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組(0.71±0.095、1.02±1.134)較對(duì)照組(0.53±0.071、0.69±0.109)明顯增高,p0.01。結(jié)論1.新合成的7個(gè)氮雜查爾酮衍生物均對(duì)He La細(xì)胞的增殖具有抑制作用。2.10g號(hào)化合物對(duì)HPV18陽(yáng)性的Hela細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于對(duì)HPV16陽(yáng)性的Siha細(xì)胞,對(duì)人正常的HPV陰性的永生化表皮細(xì)胞Ha Ca T有溫和的細(xì)胞毒性。3.10g號(hào)化合物可以明顯增加宮頸癌細(xì)胞株對(duì)奈達(dá)鉑低濃度時(shí)的化療增敏作用。4.新合成的氮雜查爾酮衍生物可能是通過(guò)上調(diào)野生型P53蛋白的表達(dá)來(lái)促進(jìn)宮頸癌凋亡、抑制細(xì)胞惡性增殖的。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌細(xì)胞 HPV 黃酮類(lèi)化合物 增敏 氮雜查爾酮
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-25
• 結(jié)果25-27
• 討論27-32
• 結(jié)論32-33
• 展望33-34
• 附圖34-38
• 參考文獻(xiàn)38-43
• 綜述 黃酮類(lèi)化合物抗癌作用的研究進(jìn)展43-62
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果62-63
• 致謝63

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