本文關鍵詞：先天性心臟病胎兒分子遺傳學診斷研究

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【摘要】：先天性心臟病(Congenital heart disease, CHD)是最常見的出生缺陷�；加邢忍煨孕呐K病的新生兒如果未進行及時的干預和治療,其中大約有1/3會在出生后1個月內(nèi)因嚴重的病情和畸形而夭折,危害極其嚴重。流行病學研究表明環(huán)境因素和遺傳因素共同作用導致了先天性心臟病的發(fā)生,其中遺傳因素起重要作用。對先心胎兒進行遺傳學檢測既可明確遺傳背景、為遺傳咨詢提供重要的信息,對再次生育夫婦進行風險評估；也對先天性心臟病胎兒預后判斷以及外科手術的效果具有指導價值。大量研究證實引起人類先心病的遺傳變異有染色體疾病、基因組疾病、基因突變等多種變異形式。本研究采用包含G顯帶、多重連接探針擴增(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)、單核苷酸多態(tài)性-微陣列比較基因組雜交(Single Nucleotide Polymorphisms array-based comparative genomic hybridization, SNP-array)和外顯子捕獲-高通量測序(Exon-capture high-throughput sequencing, EC-HTS)綜合技術系統(tǒng)貫序進行先天性心臟病的遺傳學診斷,尋找致病原因,評估再發(fā)風險,并幫助判斷胎兒預后,并評估該體系應用于先天性心臟病胎兒遺傳學檢測的效果。第一部分先天性心臟病胎兒的拷貝數(shù)變異檢測目的探討MLPA技術和SNP-array技術在檢測先天性心臟病胎兒拷貝數(shù)變異(copy number variations, CNV)·中的價值。方法選擇超聲心動圖診斷為先天性心臟病且其羊水細胞培養(yǎng)的G顯帶結果均正常的236例胎兒作為研究對象；運用MLPA技術檢測胎兒的基因組22q11.2的微缺失和微重復：陰性結果樣本(226例)進一步采用SNP-array技術進行全基因組拷貝數(shù)變異檢測,得到胎兒CNV結果,進行數(shù)據(jù)分析,明確導致先心的遺傳學病因,進行遺傳咨詢。結果236例胎兒中共檢測出10例22q11.2區(qū)域拷貝數(shù)變異,陽性檢出率為4.2%(10/236),包括9例微缺失和1例微重復,對其父母溯源發(fā)現(xiàn)8例微缺失為新發(fā),1例微缺失及1例微重復均遺傳于父親。SNP-array全基因組拷貝數(shù)檢測結果發(fā)現(xiàn),226例胎兒中共發(fā)現(xiàn)71例CNV,經(jīng)過數(shù)據(jù)庫比對,其中23例CNV為致病性,致病性CNV檢出率為10.1%(23/226)；40例CNV為良性病變,8例CNV臨床意義不明。MLPA結合SNP-array用于先天性心臟病胎兒遺傳學檢測陽性檢出率較常規(guī)核型分析提高14.0%(33/236)。結論基因組拷貝數(shù)變異是先心病胎兒的重要致病原因之一,MLPA技術和SNP-array技術可顯著提高先天性心臟病胎兒的CNV檢出率,有助于產(chǎn)前咨詢。第二部分先天性心臟病胎兒基因突變的檢測——外顯子捕獲一高通量測序技術目的運用外顯子捕獲-高通量測序技術尋找先天性心臟病(Congenital heart disease, CHD)胎兒可能存在的遺傳學致病突變,并探討外顯子捕獲結合高通量測序技術在產(chǎn)前診斷中的價值。方法超聲心動圖診斷為先天性心臟病且G顯帶、MLPA和SNP-array檢測結果均正常的44例胎兒作為研究對象；將與人類先天性心臟病相關的63個已知致病基因作為檢測靶點并制成捕獲芯片。各個樣本DNA進行外顯子捕獲后并用高通量測序技術進行測序；原始數(shù)據(jù)經(jīng)過過濾、數(shù)據(jù)庫比對、生物學軟件分析后得到最終病理性突變位點；Sanger測序進一步驗證病理性突變位點；并進行遺傳咨詢。結果在44例先天性心臟病胎兒中共檢測到3560個基因突變位點,數(shù)據(jù)庫比對、生物信息學分析后得到16個可疑的致病性病理突變,其中5個突變點為已報道的致病性突變,其余11個突變位點尚未見文獻報道,明確致病性突變陽性檢出率為11.4%；根據(jù)突變類型分類,其中2個為移碼突變,14個為錯義突變,涉及10個基因包括：CITED2、CHD7、NOTCH2、JAG1、MYH7、ZFPM2、HAND2、 MLL2、MYH6和MID1,其中HAND2、MYH6和MID1基因遺傳方式未明,其余7個基因的遺傳方式為常染色體顯性遺傳。16個突變位點的Sanger測序驗證結果與高通量測序結果均一致。父母溯源分析發(fā)現(xiàn)檢測得到的致病性突變點均為新發(fā)突變。結論本研究采用定制的外顯子捕獲芯片結合高通量測序技術在44例先天性心臟病胎兒中檢測出5例患者存在已知致病性突變是胎兒致病原因,11例存在可疑病理性致病突變。提示基因突變是先心病胎兒的重要原因之一,該技術用于先天性心臟病胎兒遺傳學檢測可顯著提高病因檢出率,對遺傳咨詢及預后判斷具有臨床應用價值。
【關鍵詞】：先天性心臟病 MLPA技術 22q11.2微缺失和微重復 SNP-array技術 拷貝數(shù)變異 先天性心臟病 外顯子捕獲 高通量測序 基因突變
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R714.5
【目錄】：

• 摘要5-9
• Abstract9-14
• 前言14-18
• 第一部分 先天性心臟病胎兒的拷貝數(shù)變異檢測18-40
• 一、研究對象與方法18-30
• 二、結果30-37
• 三、討論37-40
• 第二部分 外顯子捕獲測序技術用于先天性心臟病胎兒基因突變的檢測40-63
• 一、研究對象和方法41-54
• 二、結果54-57
• 三、討論57-63
• 全文小結63-64
• 參考文獻64-68
• 文獻綜述68-78
• 參考文獻74-78
• 附錄78-80
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況80-81
• 致謝81

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉翠云;王艷;孫瑞紅;羅春玉;張菁菁;成建;梁棟;馬定遠;胡平;許爭峰;;外顯子捕獲-高通量測序技術用于法洛四聯(lián)癥胎兒遺傳學檢測[J];臨床檢驗雜志;2015年06期

2 郭奕斌;;基因診斷中測序技術的應用及優(yōu)缺點[J];遺傳;2014年11期

3 楊月華;胡婭莉;朱湘玉;莫緒明;王東進;姚金翠;盛敏;朱海燕;李潔;茹彤;王志群;;多重連接探針擴增技術在先天性心臟病22q11微缺失/微重復綜合征診斷中的應用[J];中國當代兒科雜志;2009年11期

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本文編號：608332