本文關(guān)鍵詞：MAP4調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞遷移在子癇前期發(fā)病中作用的研究

  更多相關(guān)文章： 低氧 滋養(yǎng)細(xì)胞 MAP4 微管 黏著斑 遷移 子癇前期

【摘要】：背景和目的:子癇前期(pre-eclampsia,PE)是一個(gè)病因未明的復(fù)雜疾病,以母體高血壓、蛋白尿等為特征,約占妊娠婦女的5%-8%[1]。病情嚴(yán)重時(shí),將導(dǎo)致母親子癇抽搐的發(fā)生以及胎兒宮內(nèi)死亡。唯一確切的治療方式就是胎兒及其附屬物娩出,但卻增加了新生兒早產(chǎn)的發(fā)生率[2]。子癇前期治療效果不佳的癥結(jié)主要是其病因不明,目前的病因?qū)W研究主要集中在滋養(yǎng)細(xì)胞功能異常及早期胎盤(pán)形成不良。胎盤(pán)形成和胚胎植入是早期妊娠必經(jīng)的過(guò)程,是妊娠延續(xù)中最重要的決定因素之一。滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲為胎盤(pán)形成奠定基礎(chǔ),其侵襲程度決定了胎盤(pán)的穩(wěn)定性和胎盤(pán)與蛻膜結(jié)合的深度。同時(shí),滋養(yǎng)細(xì)胞錨定子宮螺旋動(dòng)脈確保了胎兒有足夠的氧和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng),當(dāng)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲不足、局部功能障礙,將導(dǎo)致許多嚴(yán)重的產(chǎn)科并發(fā)癥發(fā)生,如流產(chǎn)、子癇前期、胎盤(pán)早剝、死胎等。而滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲過(guò)度將導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞疾病的發(fā)生,如侵襲性葡萄胎、絨毛膜癌等,對(duì)母體的生命造成傷害。因此,只有胚胎侵襲入母體與母體在這一過(guò)程中的自救相互平衡,胚胎才能得以順利孕育。早期胚胎中染色體核型異常時(shí),大多數(shù)(90%)都被自然淘汰而流產(chǎn)了,而染色體核型正常的早期胚胎,大多數(shù)(93%)都繼續(xù)妊娠,顯著地體現(xiàn)了胚胎與母體之間的這一平衡[3]。因此,流產(chǎn)是滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲失敗的結(jié)局,是自然質(zhì)量控制的結(jié)果。所有影響滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲和錨定在子宮螺旋動(dòng)脈的因素,勢(shì)必決定著胚胎孕育的成敗。滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲受到胞內(nèi)和胞外許多信號(hào)通路的精細(xì)調(diào)節(jié),涉及識(shí)別并消化細(xì)胞外基質(zhì)、定向遷移等多個(gè)過(guò)程,其中,滋養(yǎng)細(xì)胞的定向遷移是侵襲行為的關(guān)鍵步驟。與絕大多數(shù)細(xì)胞遷移模式相同,滋養(yǎng)細(xì)胞的定向遷移包括細(xì)胞極化、偽足形成、基質(zhì)粘連、尾部釋放、胞體收縮等多個(gè)環(huán)節(jié),而細(xì)胞骨架和粘連結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)重組是一個(gè)基礎(chǔ)環(huán)節(jié),也是各種因素調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞遷移的重要靶點(diǎn)[4,5]。細(xì)胞骨架主要由微管和微絲組成,我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn),表皮生長(zhǎng)因子(EGF)通過(guò)微絲結(jié)構(gòu)重組刺激人滋養(yǎng)細(xì)胞遷移,而關(guān)于微管與滋養(yǎng)細(xì)胞遷移之間關(guān)系的研究較少。微管是具有極性的中空管狀結(jié)構(gòu),在細(xì)胞內(nèi)的分布呈束網(wǎng)狀,并構(gòu)成一個(gè)軌道運(yùn)輸系統(tǒng),多種細(xì)胞物質(zhì)如囊泡、細(xì)胞器等均順著其極性方向移動(dòng),并且,微管還參與中心粒等的裝配、細(xì)胞形態(tài)維持、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和分裂等過(guò)程[6,7]。微管骨架穩(wěn)定聚合的調(diào)節(jié)依賴(lài)于一系列結(jié)合于微管內(nèi)、外側(cè)的微管結(jié)合蛋白(microtubule-associatedprotein,map),其中map4在人滋養(yǎng)細(xì)胞有表達(dá),是促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞微管穩(wěn)定延長(zhǎng)的正性調(diào)節(jié)因素。微管在胞內(nèi)的穩(wěn)定聚合、延長(zhǎng)方向可以精確地指向細(xì)胞與胞外基質(zhì)粘連的粘著斑部位,微管向粘著斑移動(dòng)與細(xì)胞周?chē)恼持呷芙庥嘘P(guān)。對(duì)于遷移的細(xì)胞,依賴(lài)微管的粘著斑溶解對(duì)于分解細(xì)胞后方粘著斑十分重要[8]。jeg-3細(xì)胞來(lái)源于人絨毛膜癌組織,其形態(tài)、生化標(biāo)志、功能等細(xì)胞特征與絨毛組織原代培養(yǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞最為相似。因此,本實(shí)驗(yàn)用jeg-3細(xì)胞研究人滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移和可能機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法:第一部分:缺氧通過(guò)map4對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞遷移的調(diào)控及機(jī)制的研究1.常氧和低氧培養(yǎng)滋養(yǎng)細(xì)胞,根據(jù)缺氧時(shí)間將細(xì)胞分為五組0h、6h、12h、18h、24h組;2.transwell法分析滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲性遷移能力;3.免疫熒光染色分析滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)微管、黏著斑結(jié)構(gòu)變化;4.western-blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)的變化;5.使用excel及spss軟件整理數(shù)據(jù)。第二部分:map4、細(xì)胞骨架蛋白在子癇前期患者胎盤(pán)組織中的表達(dá)1.搜集選取第三軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院(大坪醫(yī)院)產(chǎn)科2013年01月—2014年03月收治的重度子癇前期患者(pe組)20例和正常晚孕患者(control組)20例行擇期剖宮產(chǎn)后的胎盤(pán)組織;2.通過(guò)組織he染色研究實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組胎盤(pán)組織中絨毛和血管的差異;3.通過(guò)組織免疫組化研究胎盤(pán)絨毛組織中相關(guān)分子的定位及表達(dá);4.提取胎盤(pán)絨毛相關(guān)蛋白,行western-blot分析其表達(dá)量。結(jié)果:1.低氧抑制滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲,6h組與0h組比較,侵襲能力明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng),滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力進(jìn)一步降低,12h組與0h組、6h組比較,18h組與12h組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);2.隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng),map4、微管蛋白表達(dá)逐漸降低,微管逐漸解聚、黏著斑逐漸聚合,黏著斑蛋白表達(dá)逐漸增多;3.與正常對(duì)照組相比,pe組胎盤(pán)組織血管痙攣、閉塞、血流量減少;4.與正常對(duì)照組相比,PE組胎盤(pán)組織中微管蛋白和MAP4蛋白表達(dá)較少、黏著斑蛋白表達(dá)較多,與滋養(yǎng)細(xì)胞低氧環(huán)境中表達(dá)一致。結(jié)論:1.低氧環(huán)境中,MAP4的變化可能通過(guò)影響細(xì)胞骨架中微管的聚合和黏著斑的形態(tài)調(diào)控滋養(yǎng)細(xì)胞遷移;2.PE患者胎盤(pán)組織血管痙攣、閉塞、血流量減少,絨毛發(fā)育不良,可能與局部血管病變有關(guān),為臨床胎盤(pán)缺血缺氧提供了直接證據(jù)。同時(shí),PE患者胎盤(pán)組織中MAP4、α-tubulin、vinculin蛋白表達(dá)異常,可能為胎盤(pán)局部缺血奠定基礎(chǔ),為子癇前期的病因?qū)W研究提供佐證。
【關(guān)鍵詞】：低氧 滋養(yǎng)細(xì)胞 MAP4 微管 黏著斑 遷移 子癇前期
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R714.244
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 英文摘要6-10
• 中文摘要10-13
• 第一章 前言13-17
• 第二章 缺氧通過(guò)MAP4對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞遷移的調(diào)控及機(jī)制的研究17-34
• 2.1 材料與方法17-26
• 2.2 結(jié)果26-31
• 2.3 討論31-33
• 2.4 小結(jié)33-34
• 第三章 MAP4、細(xì)胞骨架蛋白在子癇前期患者胎盤(pán)組織中的表達(dá)34-46
• 3.1 材料和方法34-39
• 3.2 結(jié)果39-44
• 3.3 討論44-45
• 3.4 小結(jié)45-46
• 全文結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 文獻(xiàn)綜述 子癇前期發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展50-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 研究生期間發(fā)表的文章59-60
• 致謝60

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