本文關(guān)鍵詞：細(xì)菌性陰道病干化學(xué)酶法聯(lián)合試劑盒的研制與性能評(píng)估

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【摘要】：細(xì)菌性陰道病(bacterial vaginosis,簡(jiǎn)稱BV)是婦產(chǎn)科常見疾病,對(duì)婦女危害較大,在婦科、產(chǎn)科及施行外科流產(chǎn)術(shù)前對(duì)BV進(jìn)行快速有效的診斷具有十分重要的意義。檢測(cè)BV使用的樣本為陰道分泌物,其成分比較復(fù)雜,再加上BV本身不是單一細(xì)菌而是厭氧菌群感染,這就給BV檢測(cè)帶來(lái)很大困難,目前國(guó)內(nèi)臨床上尚缺乏快速有效的產(chǎn)品診斷BV。國(guó)外開發(fā)的BVblue產(chǎn)品,用酶法檢測(cè)BV使此難題得以突破,但其成本高,漏檢、操作復(fù)雜等因素影響其在國(guó)內(nèi)的推廣應(yīng)用。為了滿足國(guó)內(nèi)對(duì)BV快速檢測(cè)的需求,本論文主要用干化學(xué)酶法研制了細(xì)菌性陰道病聯(lián)合試劑盒,以期獲得靈敏度好、特異度高、方便、快速、經(jīng)濟(jì)的產(chǎn)品,應(yīng)用于女性陰道疾病BV的診斷。研究方法和結(jié)果:1.主要原材料研究:設(shè)計(jì)了專用反應(yīng)板、比色卡、對(duì)載體、底物、質(zhì)控品進(jìn)行篩選,并制定了相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2.主要工藝研究:篩選出4-氨基安替吡啉、唾液酸底物B、L-脯氨酸對(duì)硝基苯胺、溴甲酚綠作為過(guò)氧化氫、唾液酸苷酶、脯氨酸氨肽酶和pH值指標(biāo)的底物,通過(guò)系列正交實(shí)驗(yàn)和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)獲得每個(gè)指標(biāo)的最佳配方。最終形成了產(chǎn)品的工藝流程圖。3.體系研究:樣本為陰道分泌物,加樣量為30μl,反應(yīng)時(shí)間為37℃15分鐘,結(jié)果讀取時(shí)間為溫育結(jié)束后5分鐘內(nèi)。4.分析性能研究:對(duì)三批試劑盒分別進(jìn)行檢測(cè)限、特異性、準(zhǔn)確性、重復(fù)性及批間差的考核,均滿足要求。5.穩(wěn)定性研究:試劑盒37℃加速破壞9天性能符合要求;模擬運(yùn)輸37℃震蕩7天性能符合要求;實(shí)時(shí)穩(wěn)定性12個(gè)月性能符合要求;反應(yīng)板拆封后可穩(wěn)定4小時(shí);陰道分泌物樣本采集后應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)使用。6.陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)的確定:檢測(cè)100份正常樣本和各50份過(guò)氧化氫、脯氨酸氨基肽酶、唾液酸苷酶陽(yáng)性樣本,使用ROC曲線法確定這3個(gè)指標(biāo)的陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)。7.臨床研究:檢測(cè)681例臨床樣本,BVblue試劑盒和Amsel法金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比結(jié)果有顯著性差異,靈敏度為85.58%;本試劑盒唾液酸酶孔結(jié)果與BVblue試劑盒結(jié)果無(wú)明顯差異;本試劑盒4個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果與Amsel法金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比,靈敏度為98.08%,特異性為99.48%,陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為97.14%,陰性預(yù)測(cè)值為99.65%,總符合率為99.27%。因此本試劑盒比BVblue試劑盒檢出率高性能更好。結(jié)論:自行研制的細(xì)菌性陰道病聯(lián)合試劑盒,方便快捷、性能穩(wěn)定、靈敏度高、特異性好,能較好的應(yīng)用于臨床BV的診斷。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)菌性陰道病 快速檢測(cè) 試劑盒開發(fā) 工藝研究 性能評(píng)估 臨床研究
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R711.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 主要原材料研究15-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備15-16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料15
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備15-16
• 2.2 反應(yīng)板的設(shè)計(jì)、制作及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)16-17
• 2.2.1 反應(yīng)板的設(shè)計(jì)制作16
• 2.2.2 反應(yīng)板的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)16-17
• 2.3 比色卡的設(shè)計(jì)制作及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的確定17-18
• 2.3.1 比色卡的設(shè)計(jì)制作17
• 2.3.2 比色卡的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)17-18
• 2.4 反應(yīng)板的載體紙片的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的確定18-19
• 2.4.1 載體紙片的選擇18
• 2.4.2 載體紙片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)18-19
• 2.5 底物的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的確定19
• 2.5.1 底物的選擇19
• 2.5.2 底物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)19
• 2.6 質(zhì)控品的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的確定19-22
• 2.6.1 質(zhì)控品的選擇19
• 2.6.2 檢測(cè)限質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品19-20
• 2.6.3 特異性質(zhì)控品20
• 2.6.4 陰性質(zhì)控品20-22
• 第三章 試劑盒組份制備工藝研究22-31
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備22-23
• 3.1.1 新出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)材料22
• 3.1.2 新出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)設(shè)備22-23
• 3.2 樣品稀釋液的制備工藝研究23-24
• 3.2.1 成分的研究23
• 3.2.2 分裝量的選擇23-24
• 3.3 反應(yīng)板的制備工藝研究24-31
• 3.3.1 過(guò)氧化氫試劑墊成分研究24-25
• 3.3.2 唾液酸苷酶試劑墊成分研究25-28
• 3.3.3 脯氨酸氨基肽酶試劑墊成分研究28
• 3.3.4 pH值試劑墊成分研究28-29
• 3.3.5 試劑墊包被液加樣量的選擇29
• 3.3.6 試劑墊干燥方法的確定29
• 3.3.7 試劑墊干燥條件確定29-30
• 3.3.8 反應(yīng)板制備形成工藝流程圖：30-31
• 第四章 試劑盒反應(yīng)體系研究31-37
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備31
• 4.1.1 新出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)材料31
• 4.1.2 新出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)設(shè)備31
• 4.2 樣本要求31-33
• 4.2.1 樣本的類型、采集及處理31-32
• 4.2.2 樣本中干擾物質(zhì)32-33
• 4.3 反應(yīng)模式的確定33-37
• 4.3.1 反應(yīng)步驟的確定33-34
• 4.3.2 樣本用量對(duì)比34
• 4.3.3 反應(yīng)時(shí)間的確定34-35
• 4.3.4 顏色判定時(shí)間的確定35-37
• 第五章 試劑盒分析性能研究37-42
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備37
• 5.1.1 新出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)材料37
• 5.1.2 新出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)設(shè)備37
• 5.2 檢測(cè)限37-38
• 5.3 特異性38
• 5.4 準(zhǔn)確度38-39
• 5.4.1 陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果38-39
• 5.4.2 陰性質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果39
• 5.5 重復(fù)性39-41
• 5.6 批間差41-42
• 第六章 試劑盒穩(wěn)定性研究42-57
• 6.1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備42-43
• 6.1.1 新出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)材料42-43
• 6.1.2 新出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)設(shè)備43
• 6.2 反應(yīng)板的穩(wěn)定性研究43
• 6.3 檢測(cè)限質(zhì)控品和陽(yáng)性質(zhì)控品的穩(wěn)定性研究43-44
• 6.4 試劑盒的加速穩(wěn)定性研究44-47
• 6.5 成品試劑盒的模擬運(yùn)輸穩(wěn)定性研究47-48
• 6.6 試劑盒的拆封穩(wěn)定性研究48-49
• 6.7 成品試劑盒的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究49-57
• 第七章 試劑盒陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)研究57-64
• 7.1 建立陽(yáng)性判斷值的方法57
• 7.2 陽(yáng)性判斷值建立的過(guò)程與結(jié)果57-64
• 7.2.1 過(guò)氧化氫指標(biāo)57-59
• 7.2.2 唾液酸酶指標(biāo)59-61
• 7.2.3 脯氨酸氨基肽酶指標(biāo)61-64
• 第八章 試劑盒的臨床研究64-69
• 8.1 實(shí)驗(yàn)材料及研究方法64-65
• 8.1.1 實(shí)驗(yàn)材料64
• 8.1.2 主要儀器設(shè)備64
• 8.1.3 樣本量64
• 8.1.4 樣本的采集及試驗(yàn)設(shè)計(jì)64-65
• 8.1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法65
• 8.2 臨床研究結(jié)果及分析65-67
• 8.2.1 過(guò)氧化氫孔臨床結(jié)果65-66
• 8.2.2 唾液酸孔臨床結(jié)果66
• 8.2.3 BVblue試劑盒臨床結(jié)果66-67
• 8.2.4 考核試劑評(píng)估結(jié)果67
• 8.3 結(jié)論與討論67-69
• 結(jié)論與討論69-72
• 參考文獻(xiàn)72-75
• 縮略詞表75-76
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文及研究成果76-77
• 致謝77

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本文編號(hào)：544480