本文關鍵詞：LIN28A和PLK4在卵巢上皮性癌中的表達及其意義

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【摘要】：目的:本研究通過檢測LIN28A和PLK4在不同卵巢細胞系和組織中的表達情況,探討LIN28A、PLK4與卵巢上皮性癌之間的關系以及二者的關系,為進一步研究LIN28A、PLK4在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機制,以及分子靶向治療卵巢癌奠定實驗研究基礎。方法:(1)熒光定量PCR技術(real time quantitative PCR,q-PCR)以及免疫印跡技術(western bolt,WB)檢測不同卵巢上皮性癌細胞系及卵巢上皮細胞系中LIN28A和PLK4 m RNA及蛋白的表達水平。(2)分別將LIN28A質粒、PLK4質粒單獨以及共轉染進293T細胞,顯微鏡觀察各組細胞生長情況;q-PCR和WB檢測不同轉染處理后的細胞系中LIN28A和PLK4的m RNA和蛋白水平。(3)q-PCR檢測臨床術后收集的不同性質卵巢組織中LIN28A和PLK4的m RNA表達水平。收集2009年至2014年間江蘇大學附屬醫(yī)院以及江蘇大學附屬人民醫(yī)院術后存檔的79個卵巢組織病理蠟塊,根據(jù)組織性質分成良性組以及卵巢癌組,并收集各個患者的臨床資料,進行術后隨訪。每組進行病理切片,行免疫組化染色,檢測不同組織中LIN28A以及PLK4蛋白的表達水平。統(tǒng)計分析LIN28A以及PLK4的蛋白水平與卵巢癌臨床指標、患者預后的關系以及二者的相關性。結果:(1)LIN28A在A2780和HO8910中的表達水平明顯高于Hosepic,PLK4在A2780和SKOV3、HO8910中的表達水平明顯高于Hosepic。(2)分別將LIN28A質粒、PLK4質粒單獨以及共轉染進293T細胞后,LIN28A的表達水平高于質粒對照組;而將PLK4質粒單獨以及與LIN28A質粒共轉染進293T細胞后,PLK4的表達水平明顯較質粒對照組高。將PLK4質粒單獨以及與LIN28A質粒共轉染進293T細胞后,細胞的增殖較質粒對照組快,而單獨轉染LIN28A質粒無明顯促細胞增殖作用。(3)與卵巢良性腫瘤組相比,卵巢上皮性癌組中LIN28A和PLK4的m RNA表達水平均較高。免疫組織化學染色檢測發(fā)現(xiàn):在良性卵巢腫瘤組未檢測到LIN28A和PLK4表達,在卵巢上皮性癌組檢測到LIN28A和PLK4的陽性表達,兩者具有統(tǒng)計學差異(P0.05);LIN28A和PLK4在病理分期越高的卵巢上皮性癌組織中的異常高表達情況越明顯(P0.05);PLK4和LIN28A在卵巢上皮性癌組織中的表達呈正相關(r=0.555,P=0.039);影響卵巢上皮性癌患者預后的危險因素有LIN28A、PLK4和病理分期;LIN28A和PLK4同時表達陽性的患者比其他患者的生存時間都短(P0.05)。結論:LIN28A和PLK4與患者預后相關,可以作為卵巢上皮性的標志并可能成為藥物治療的靶點。
【關鍵詞】：卵巢上皮性癌 LIN28A PLK4 預后
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-14
• 第一章 緒論14-26
• 1.1 卵巢上皮性癌（epithelial ovarian cancer, EOC）14-16
• 1.1.1 卵巢癌現(xiàn)狀14
• 1.1.2 卵巢癌的病因及治療14-16
• 1.2 LIN28A（Lin-28 Homologue A）16-19
• 1.2.1 LIN28A簡介16
• 1.2.2 LIN28A在細胞生長發(fā)育中的作用16-17
• 1.2.3 LIN28A與腫瘤及其干細胞17-19
• 1.3 PLK4（Polo-like kinase 4，Polo樣蛋白激酶 4）19-20
• 1.3.1 PLKs簡介19
• 1.3.2 PLK4的結構19
• 1.3.3 PLK4的功能19-20
• 1.4 CDC25磷酸酶（Cell division cycle 25 phosphatases，細胞分裂周期蛋白 25）20-22
• 1.4.1 CDC25 與細胞周期的關系20-21
• 1.4.2 CDC25亞型及與腫瘤的關系21
• 1.4.3 CDC25不同亞型的功能及調節(jié)21-22
• 1.5 實驗的研究目的、方法、實驗設計和研究意義22-26
• 1.5.1 研究目的22
• 1.5.2 研究方法22-23
• 1.5.3 實驗設計23-24
• 1.5.4 研究意義24-26
• 第二章 LIN28A和PLK4在卵巢上皮性癌中的表達情況26-56
• 2.1 實驗材料26-31
• 2.1.1 主要試劑及標本26-27
• 2.1.2 主要溶液的配制27-30
• 2.1.3 主要儀器及耗材30-31
• 2.2 實驗方法31-42
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)31
• 2.2.2 質粒擴增31-32
• 2.2.3 制備感受態(tài)細胞（DH-5α）32
• 2.2.4 質粒轉化與質粒抽提32-33
• 2.2.5 轉染（ExFect TM Transfection Reagent）33-34
• 2.2.6 細胞系總RNA提取34-35
• 2.2.7 細胞系蛋白質提取35
• 2.2.8 q-PCR35-37
• 2.2.9 免疫印跡（Western Blot, WB）37-38
• 2.2.10 卵巢組織預處理38
• 2.2.11 組織總RNA的提取38-39
• 2.2.12 組織切片39
• 2.2.13 免疫組織化學染色（IHC）39-41
• 2.2.14 HE染色41-42
• 2.2.15 免疫組化結果評估42
• 2.2.16 統(tǒng)計分析方法42
• 2.3 實驗結果42-54
• 2.3.1 不同卵巢細胞系中LIN28A和PLK4的表達情況42-44
• 2.3.1.1 不同卵巢細胞系中LIN28A和PLK4 mRNA的表達情況42-43
• 2.3.1.2 不同卵巢細胞系中LIN28A蛋白和PLK蛋白的表達情況43-44
• 2.3.2 經不同轉染處理后的四組 293T細胞系中細胞的增殖能力44-46
• 2.3.3 轉染不同質粒的 293T細胞系中LIN28A和PLK4的表達情況46-48
• 2.3.3.1 轉染不同質粒的 293T細胞系中LIN28A和PLK4 mRNA的表達情況46-47
• 2.3.3.2 經不同轉染處理后的 293T細胞系中LIN28A蛋白和PLK4蛋白的表達情況47-48
• 2.3.4 不同性質卵巢組織中LIN28A和PLK4 mRNA的表達情況48-49
• 2.3.5 不同性質卵巢組織中LIN28A和PLK4蛋白水平的表達差異情況49-54
• 2.3.5.1 LIN28A和PLK4在卵巢組織中的表達50-51
• 2.3.5.2 LIN28A和PLK4在卵巢癌組織中的表達情況與不同臨床參數(shù)的關系51-52
• 2.3.5.3 LIN28A和PLK4在卵巢上皮性癌組織中的陽性表達的相關性52
• 2.3.5.4 單因素和多因素 Logistic 回歸分析52-53
• 2.3.5.5 Kaplan-Meier法生存分析53-54
• 2.4 討論54-56
• 第三章 主要結論和展望56-57
• 3.1 主要結論56
• 3.2 展望56-57
• 參考文獻57-64
• 綜述：PLK4的研究進展64-74
• 綜述參考文獻71-74
• 致謝74-75
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章及專利75

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