本文關鍵詞：Tspan-5在正常妊娠維持和妊娠滋養(yǎng)細胞疾病診治中的作用

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【摘要】：目的:研究Tspan-5對滋養(yǎng)細胞增殖和遷移能力的影響,檢測Tspan-5在母胎界面的表達情況,檢測靶向Tspan-5基因沉默后滋養(yǎng)細胞分泌hCG的情況以及對化療藥物氨甲蝶呤(MTX)治療效果的變化情況,探討Tspan-5對正常妊娠維持的作用,及其作為診斷妊娠滋養(yǎng)細胞疾病有效標記物的可能性,尋求治療妊娠滋養(yǎng)細胞疾病的新靶點。方法:第一章:(1)通過RNAi技術沉默人絨毛膜癌細胞株JEG-3中Tspan-5的表達,用Western Blotting技術檢測干擾后JEG-3細胞中Tspan-5的表達情況,計算干擾效率;(2)用平板克隆形成實驗、CCK-8實驗檢測干擾前后JEG-3細胞的增殖能力;(3)用劃痕實驗檢測干擾前后JEG-3細胞的遷移能力。第二章:收集正常早孕、自然流產(chǎn)及輸卵管妊娠的絨毛和蛻膜組織,以及輸卵管妊娠的輸卵管粘膜組織,以WesternBlotting技術檢測其中Tspan-5的表達水平。第三章:(1)用CCK-8實驗檢測在不同組JEG-3細胞中加入氨甲蝶呤后的增殖情況;(2)用羅氏電化學發(fā)光全自動免疫分析系統(tǒng)檢測各組JEG-3細胞培養(yǎng)液中h CG的水平。結果:第一章:(1)不同si RNA干擾JEG-3細胞后Western Blotting結果顯示:Tspan5/NC條帶灰度值最高,Tspan5/1005最低,干擾后Tspan-5的相對表達量從低到高依次為:Tspan5/1005Tspan5/796Tspan5/464Tspan5/NC,因此選擇Tspan5/1005作為干擾組完成后續(xù)實驗;(2)平板克隆形成實驗結果:干擾組(Tspan5/1005)JEG-3細胞形成的克隆個數(shù)較對照組(Tspan5/NC)明顯減少(148±23 vs 276±31,P0.01),未干擾組與對照組之間的JEG-3細胞克隆個數(shù)無明顯差異(328±39 vs 276±31,P0.1);(3)CCK-8實驗結果:未干擾組JEG-3細胞增殖活力最高,對照組(Tspan5/NC)JEG-3細胞增殖活力稍低于未干擾組,但兩者無明顯差異(1.200±0.103 vs 1.185±0.022,P0.05);與對照組(Tspan5/NC)相比,干擾組(Tspan5/1005)JEG-3細胞增殖活力明顯下降(1.185±0.022 vs 1.076±0.028,P0.01);(4)劃痕實驗結果:干擾組(Tspan5/1005)劃痕后24小時的劃痕寬度減去劃痕時的劃痕寬度的絕對值明顯小于對照組(Tspan5/NC)(1.27±0.03cm vs 1.97±0.38cm,P0.05)。第二章:(1)自然流產(chǎn)組絨毛中Tspan-5表達量小于正常早孕組絨毛中的表達量,但自然流產(chǎn)組蛻膜中Tspan-5表達量與正常早孕組蛻膜中表達量無明顯差異。(2)輸卵管妊娠組絨毛及蛻膜中Tspan-5表達量與正常早孕組均無明顯差異;(3)輸卵管妊娠時輸卵管粘膜中Tspan-5表達量與蛻膜中的表達量無明顯差異;(4)輸卵管妊娠組輸卵管粘膜中Tspan-5的表達量明顯高于正常早孕組蛻膜中的表達量(1.62±0.47 vs 0.82±0.15,P0.01)。第三章:(1)總體來看,各組JEG-3細胞培養(yǎng)液中的HCG濃度隨著培養(yǎng)時間的延長而逐漸升高,在培養(yǎng)72h后干擾組(Tspan5/1005)JEG-3細胞培養(yǎng)液中HCG濃度較對照組(Tspan5/NC)明顯升高(699.3±85.2 IU/L vs 507.0±130.2 IU/L,P0.05),但此時未干擾組h CG濃度與對照組(Tspan5/NC)相比無明顯差異;干擾組與對照組在培養(yǎng)0h、24h及48h相比其h CG濃度均無明顯差異;(2)未添加MTX的干擾組(Tspan5/1005)的JEG-3細胞數(shù)稍降低后又再次升高;添加MTX后各組JEG-3細胞數(shù)均隨著MTX作用時間延長而逐漸減少,在加入MTX 24h后干擾組(Tspan5/1005)JEG-3細胞數(shù)較對照組(Tspan5/NC)明顯減少(0.817±0.039 vs 1.021±0.042,P0.01),添加MTX的干擾組(Tspan5/1005)的JEG-3細胞數(shù)與未添加MTX的干擾組(Tspan5/1005)相比明顯減少(0.817±0.039vs 1.066±0.023,P0.01),但未干擾組JEG-3細胞數(shù)與對照組(Tspan5/NC)相比無明顯差異;在加入MTX 0h、48h及72h,干擾組與對照組的JEG-3細胞數(shù)均無明顯差異。結論:(1)本研究發(fā)現(xiàn)降調(diào)JEG-3細胞中Tspan-5的表達后,滋養(yǎng)細胞的增殖和遷移能力也隨之減弱。(2)綜合本實驗與我們前期實驗結果,Tspan-5主要表達于具有侵襲力的絨毛外滋養(yǎng)細胞和細胞滋養(yǎng)細胞,且Tspan-5表達量的多少與絨癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力呈正相關,因此Tspan-5有希望作為診斷和監(jiān)測妊娠滋養(yǎng)細胞疾病的標記物。(3)Tspan-5在母胎界面中表達,在自然流產(chǎn)絨毛中的表達水平低于正常早孕絨毛,提示自然流產(chǎn)絨毛的增殖、侵襲力下降。(4)輸卵管妊娠的輸卵管粘膜中也有Tspan-5的表達,且輸卵管妊娠時輸卵管粘膜Tspan-5的表達量高于正常早孕中蛻膜的表達量,是否提示輸卵管妊娠時輸卵管粘膜比正常蛻膜細胞有更強的增殖/粘附能力?仍需進一步深入研究。(5)沉默Tspan-5基因后,化療藥物MTX能更迅速地抑制絨癌細胞增殖,因此Tspan-5有望成為臨床治療妊娠滋養(yǎng)細胞疾病的新靶點。
【關鍵詞】：四分子交聯(lián)體Tspan-5 妊娠維持 妊娠滋養(yǎng)細胞疾病 診治 標記物
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-15
• 前言15-16
• 實驗儀器、試劑與耗材16-19
• 第一章 沉默Tspan-5 的表達對絨毛膜癌細胞JEG-3 增殖和遷移的影響19-31
• 引言19
• 實驗方法19-25
• 實驗結果25-28
• 討論28-31
• 第二章 Tspan-5 在母胎界面的表達水平及其對正常妊娠維持的作用31-40
• 引言31
• 實驗方法31-33
• 實驗結果33-37
• 討論37-40
• 第三章 Tspan-5 在妊娠滋養(yǎng)細胞疾病診治中的作用40-48
• 引言40
• 實驗方法40-42
• 實驗結果42-44
• 討論44-48
• 全文結論48
• 展望48-49
• 參考文獻49-54
• 附錄:綜述54-64
• 參考文獻61-64
• 中英文縮寫詞對照表64-65
• 攻讀碩士期間科研成果65-66
• 致謝66

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1 湯海瑜;Tspan-5在正常妊娠維持和妊娠滋養(yǎng)細胞疾病診治中的作用[D];南華大學;2016年

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本文編號：525430