發(fā)布時(shí)間：2017-06-30 10:05

  本文關(guān)鍵詞：B4GALT3受miR-27a上調(diào)并促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的惡性行為，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的宮頸癌(Cervical cancer)是世界范圍內(nèi)女性腫瘤診出率較高的疾病,死亡率居于第4位。盡管預(yù)防性的HPV疫苗和傳統(tǒng)的子宮頸涂片檢查能夠降低宮頸癌的發(fā)生率和死亡率,但由于晚期診斷和常規(guī)治療抵抗的發(fā)生,每年仍有大量女性死于該病。因此,確定能夠預(yù)測(cè)臨床結(jié)果并設(shè)計(jì)有力治療方案的分子標(biāo)志物至關(guān)重要。MicroRNAs(miRNAs)是一類非編碼小RNA,它能夠調(diào)節(jié)基因表達(dá),涉及到多種細(xì)胞通路的調(diào)節(jié),包括癌前病變進(jìn)展至侵襲和轉(zhuǎn)移的過程。研究表明,miRNA在正常代謝和細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要功能,因此,這些分子的功能失調(diào)與人類疾病密切相關(guān)。β-1,4-多聚乙酰氨基乳糖酶III(B4GALT3)屬于B4GALT家族,它能催化多聚N-乙酰氨基乳糖的生成并與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。然而,B4GALT3的上調(diào)機(jī)制以及它在宮頸癌中的作用尚不清楚。本研究旨在探究B4GALT3對(duì)宮頸癌細(xì)胞惡性行為的影響及其上下游調(diào)控的機(jī)制從而闡明B4GALT3在宮頸癌發(fā)生中的作用,為尋找治療宮頸癌的分子標(biāo)記物提供理論基礎(chǔ)。方法首先運(yùn)用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)了宮頸癌組織和鄰近癌旁組織中B4GALT3的表達(dá)量。其次,運(yùn)用劃痕實(shí)驗(yàn)、transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)、Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了B4GALT3對(duì)宮頸癌細(xì)胞遷移、侵襲能力以及EMT進(jìn)程的影響。接著我們運(yùn)用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)了能夠靶定B4GALT3的miRNA,并通過RT-qPCR實(shí)驗(yàn)、Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了miR-27a異常表達(dá)對(duì)B4GALT3 mRNA水平和蛋白水平的影響,同時(shí)用EGFP和luciferase熒光報(bào)告載體系統(tǒng)進(jìn)一步驗(yàn)證二者的直接靶定關(guān)系。隨后我們通過mRNA和蛋白降解實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了miR-27a上調(diào)B4GALT3的機(jī)制,同時(shí)我們檢測(cè)了miR-27a對(duì)宮頸癌細(xì)胞惡性表型的影響、敲降B4GALT3對(duì)miR-27a引起的惡性表型的挽救作用以及封閉miR-27a對(duì)B4GALT3致癌活性的影響。最后,我們運(yùn)用蛋白降解實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了B4GALT3對(duì)β1-integrin蛋白穩(wěn)定性的影響。結(jié)果與鄰近正常宮頸組織相比,B4GALT3在宮頸癌組織中高表達(dá)。B4GALT3高表達(dá)能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞系HeLa和C33A的遷移、侵襲和EMT進(jìn)程。為探索B4GALT3的失調(diào)機(jī)制,我們預(yù)測(cè)了其上游的miRNA。EGFP和p GL3-promoter報(bào)告系統(tǒng)表明:miR-27a結(jié)合B4GALT3的3’UTR區(qū)并促進(jìn)它的表達(dá)。RT-q PCR實(shí)驗(yàn)表明,miR-27a在宮頸癌組織當(dāng)中也高表達(dá)并與B4GALT3的表達(dá)量呈正相關(guān)。miR-27a并不影響B(tài)4GALT3 m RNA和蛋白的穩(wěn)定性。miR-27a高表達(dá)引起宮頸癌細(xì)胞系He La和C33A惡性行為的發(fā)生。而封閉miR-27a能夠抑制這些惡性行為的發(fā)生。而且,敲降B4GALT3能夠削弱miR-27a的致癌活性,封閉miR-27a能夠削弱B4GALT3的致癌活性。這表明,miR-27a通過上調(diào)B4GALT3進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的惡性行為。此外,我們還發(fā)現(xiàn)B4GALT3能夠明顯促進(jìn)β1整合素(β1-integrin)的穩(wěn)定性,并通過該通路影響B(tài)4GALT3對(duì)宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲作用。綜上所述,B4GALT3受miR-27a上調(diào)并通過β1-integrin通路促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的惡性行為,有可能成為宮頸癌治療的潛在標(biāo)志物。結(jié)論B4GALT3受miR-27a上調(diào)并通過增強(qiáng)β1-integrin的蛋白穩(wěn)定性促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲。
【關(guān)鍵詞】：B4GALT3 miR-27a EMT β1-integrin 宮頸癌細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)11-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、B4GALT3能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的惡性行為17-42
• 1.1 對(duì)象和方法17-32
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-31
• 1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理31-32
• 1.2 結(jié)果32-41
• 1.2.1 B4GALT3在宮頸癌組織中高表達(dá)32
• 1.2.2 過表達(dá)和敲降B4GALT3在RNA水平上是有效的32-34
• 1.2.3 過表達(dá)和敲降B4GALT3在蛋白水平上是有效的34-35
• 1.2.4 B4GALT3并不影響宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞活性35-36
• 1.2.5 B4GALT3并不影響宮頸癌細(xì)胞的增殖能力36-37
• 1.2.6 B4GALT3能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的相對(duì)遷移速率37
• 1.2.7 B4GALT3能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移能力37-38
• 1.2.8 B4GALT3能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的侵襲能力38-39
• 1.2.9 B4GALT3能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程39-41
• 1.3 小結(jié)41-42
• 二、B4GALT3受miR-27a上調(diào)42-58
• 2.1 對(duì)象和方法42-51
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料42
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法42-51
• 2.2 結(jié)果51-57
• 2.2.1 B4GALT33’UTR與miR-27a種子序列互補(bǔ)配對(duì)圖51
• 2.2.2 miR-27a在宮頸癌組織中高水平51-52
• 2.2.3 宮頸癌組織中miR-27a和B4GALT3表達(dá)水平呈正相關(guān)52
• 2.2.4 過表達(dá)和封閉miR-27a有效性的驗(yàn)證52-53
• 2.2.5 miR-27a能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞中B4GALT3 mRNA的表達(dá)53-54
• 2.2.6 miR-27a能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞中B4GALT3蛋白的表達(dá)54-55
• 2.2.7 pcDNA-EGFP熒光報(bào)告載體系統(tǒng)證實(shí)B4GALT3受miR-27a上調(diào)55-57
• 2.3 小結(jié)57-58
• 三、miR-27a通過促進(jìn)B4GALT3的轉(zhuǎn)錄過程提高其表達(dá)水平58-63
• 3.1 對(duì)象和方法58-59
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料58
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法58-59
• 3.2 結(jié)果59-62
• 3.2.1 miR-27a不影響B(tài)4GALT3 mRNA的穩(wěn)定性59-60
• 3.2.2 miR-27a不影響B(tài)4GALT3蛋白的穩(wěn)定性60-62
• 3.3 小結(jié)62-63
• 四、miR-27a能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的惡性行為63-69
• 4.1 對(duì)象和方法63-64
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料63
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法63-64
• 4.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理64
• 4.2 結(jié)果64-68
• 4.2.1 miR-27a能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移能力64-65
• 4.2.2 miR-27a能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的侵襲能力65
• 4.2.3 miR-27a能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的相對(duì)遷移率65-66
• 4.2.4 miR-27a能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程66-68
• 4.3 小結(jié)68-69
• 五、敲降B4GALT3挽救了miR-27a對(duì)宮頸癌細(xì)胞的致癌效應(yīng)69-79
• 5.1 對(duì)象和方法69-70
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料69
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法69-70
• 5.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理70
• 5.2 結(jié)果70-78
• 5.2.1 敲降B4GALT3能夠挽救miR-27a對(duì)宮頸癌細(xì)胞遷移率的促進(jìn)作用70-71
• 5.2.2 敲降B4GALT3能夠挽救miR-27a對(duì)宮頸癌細(xì)胞遷移能力的促進(jìn)作用71-72
• 5.2.3 敲降B4GALT3能夠挽救miR-27a對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的促進(jìn)作用72-73
• 5.2.4 敲降B4GALT3能夠挽救miR-27a對(duì)宮頸癌細(xì)胞EMT進(jìn)程的促進(jìn)作用73-75
• 5.2.5 封閉miR-27a能夠削弱B4GALT3誘導(dǎo)的致癌效應(yīng)75-78
• 5.3 小結(jié)78-79
• 六、B4GALT3 抑制β1-integrin 蛋白的降解79-83
• 6.1 對(duì)象和方法79-80
• 6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料79
• 6.1.2 實(shí)驗(yàn)方法79-80
• 6.2 結(jié)果80-82
• 6.2.1 B4GALT3能夠促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞中β1-integrin的表達(dá)80-81
• 6.2.2 B4GALT3抑制宮頸癌細(xì)胞中β1-integrin的降解81-82
• 6.3 小結(jié)82-83
• 討論83-85
• 結(jié)論85-86
• 參考文獻(xiàn)86-92
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明92-93
• 綜述93-102
• 綜述參考文獻(xiàn)99-102
• 致謝102-103
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷103

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本文編號(hào)：501488