發(fā)布時(shí)間：2017-06-29 15:16

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)篩選宮頸癌患者尿液中的腫瘤標(biāo)志物，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：宮頸癌是女性腫瘤中常見(jiàn)腫瘤之一,其發(fā)病率僅次于乳腺癌。晚期宮頸癌患者五年內(nèi)的生存率為9%到64%,早期患者的生存率為66%到95%,所以早期診斷能顯著提高患者的生存率。傳統(tǒng)的診斷宮頸癌的方法如細(xì)胞法、觀察法、陰道鏡等具有敏感性差、特異性低等缺點(diǎn),亟需一種新的診斷方法能夠準(zhǔn)確地早診宮頸癌。用腫瘤標(biāo)志物早期診斷癌癥是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型的診斷方法,并且有些腫瘤標(biāo)志物已在臨床應(yīng)用。尿液是血液經(jīng)腎濾過(guò)的透析液,具有無(wú)創(chuàng)、取樣簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),是篩選標(biāo)志物的理想標(biāo)本。本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法,分析宮頸癌患者尿液中與正常人尿液的蛋白質(zhì)組,篩選差異蛋白,尋找與宮頸癌早期診斷有關(guān)的腫瘤標(biāo)志物。我們收集了43例宮頸癌患者和47例健康女性的尿液樣本,其中13例宮頸癌患者尿樣和7例健康女性尿樣作為實(shí)驗(yàn)組;30例宮頸癌患者尿樣和40例健康女性尿樣作為驗(yàn)證組。少量的樣本作為實(shí)驗(yàn)組用來(lái)研究尿蛋白質(zhì)組和尋找標(biāo)志物,驗(yàn)證組則擴(kuò)大樣本量用于驗(yàn)證標(biāo)志物。所有的尿液樣本使用超速離心的方法沉淀尿蛋白,再對(duì)蛋白進(jìn)行還原,加入洗液,再次超速離心得到最終的蛋白樣本,對(duì)蛋白定量,SDS-PAGE預(yù)分離,膠內(nèi)酶解,萃取出肽段,質(zhì)譜鑒定。對(duì)宮頸癌患者和健康女性各自特異的蛋白做GO分析,可得出這些蛋白參與的生物過(guò)程。對(duì)宮頸癌患者和健康女性共有的蛋白,利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法篩選差異表達(dá)蛋白,再對(duì)這些蛋白做聚類(lèi)和GO分析。通過(guò)生物信息學(xué)分析,從宮頸癌患者差異尿蛋白中篩選出有診斷價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物。在實(shí)驗(yàn)組的宮頸癌患者尿液(CC_urine)中我們鑒定到4135個(gè)蛋白(FDR0.01),其中unique peptides1的蛋白有2158個(gè)。在健康女性的尿液(HW_urine)中鑒定到4347個(gè)蛋白(FDR0.01),其中unique peptides1的蛋白有2689個(gè)。宮頸癌患者特異尿蛋白的GO結(jié)果顯示這些蛋白富集程度最高的生物過(guò)程是免疫反應(yīng),而在健康女性特異尿蛋白的GO結(jié)果顯示這些蛋白富集程度最高的生物過(guò)程是生物粘連。利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法從宮頸癌患者和健康女性共有的尿蛋白中篩選到84個(gè)上調(diào)蛋白和82個(gè)下調(diào)蛋白,對(duì)這些蛋白做聚類(lèi)和GO分析后發(fā)現(xiàn),只有上調(diào)蛋白能把宮頸癌患者和健康女性完全分開(kāi),并且上調(diào)蛋白富集程度最高的也是免疫反應(yīng)。通過(guò)生物信息學(xué)分析,我們從宮頸癌特異蛋白中篩選到S100A7和CEACAM8這兩個(gè)蛋白,在共有蛋白中篩選到DPP4這個(gè)蛋白。在驗(yàn)證組中,雙盲法測(cè)試S100A7,CEACAM8以及兩者聯(lián)合診斷宮頸癌的敏感性能達(dá)到73%、87%、93%;ROC分析得出DPP4診斷宮頸癌的敏感性和特異性為67%和76%。結(jié)果提示,宮頸癌患者的尿蛋白質(zhì)組與健康女性的尿蛋白質(zhì)組不同,并且S100A7和CEACAM8可以作為宮頸癌潛在的腫瘤標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 尿液 蛋白質(zhì)組 腫瘤標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 第1章 前言11-14
• 第2章 蛋白質(zhì)組學(xué)在篩選生物標(biāo)志物上的應(yīng)用14-17
• 2.1 蛋白質(zhì)組學(xué)14
• 2.2 蛋白質(zhì)組學(xué)篩選腫瘤標(biāo)志物14-16
• 2.2.1 膀胱癌的腫瘤標(biāo)志物14-15
• 2.2.2 肺癌的腫瘤標(biāo)志物15
• 2.2.3 卵巢癌的腫瘤標(biāo)志物15
• 2.2.4 乳腺癌的腫瘤標(biāo)志物15-16
• 2.3 宮頸癌的腫瘤標(biāo)志物16-17
• 第3章 應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)篩選宮頸癌患者尿液中的腫瘤標(biāo)志物17-33
• 3.1 引言17
• 3.2 材料與試劑17-21
• 3.2.1 研究對(duì)象17-18
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑18
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)溶液配制18-21
• 3.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器21
• 3.2.5 分析軟件21
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法21-24
• 3.3.1 尿液的收集及貯存21
• 3.3.2 蛋白樣品的制備21-22
• 3.3.3 蛋白定量及預(yù)分離22
• 3.3.4 考馬斯亮藍(lán)染色及脫色22
• 3.3.5 膠內(nèi)酶解22-23
• 3.3.6 基于Q Exactive-Plus的質(zhì)譜分析23
• 3.3.7 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索23-24
• 3.3.8 生物信息學(xué)分析24
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-29
• 3.4.1 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性以及尿蛋白質(zhì)組24-25
• 3.4.2 差異蛋白分析25-27
• 3.4.3 質(zhì)譜法驗(yàn)證標(biāo)志物27-29
• 3.5 討論29-32
• 3.6 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-42
• 致謝42-43
• 攻讀學(xué)位期間取得的科研成果43

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2 馮s，

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