本文關(guān)鍵詞：Twist基因誘導(dǎo)絨癌細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:絨毛膜癌(choriocarcinoma)簡稱絨癌(CC),在妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病中(gestational trophoblastic disease,GTD)惡性程度居于首位。其可繼發(fā)于包括足月分娩、異位妊娠、自然流產(chǎn)以及葡萄胎在內(nèi)的各種類型的妊娠。絨癌在女性生殖系統(tǒng)腫瘤中發(fā)病率雖不及宮頸癌、卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌,但其發(fā)展迅速,早期即可轉(zhuǎn)移至肺、腦等重要臟器,惡性程度極高,嚴(yán)重危害著廣大女性的生命健康。因其對化療藥物極其敏感,絨癌成為首個能夠通過化療治愈的婦科實體腫瘤。但由于化療藥物種類及化療方案的選擇不當(dāng),常導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥的情形產(chǎn)生,使之成為化療失敗的最主要原因。滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的發(fā)病與多方面因素有關(guān),發(fā)病機制尚未明確,因此關(guān)于其發(fā)生、發(fā)展及耐藥方面的研究一直是人們廣泛關(guān)注的話題。現(xiàn)已證實上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)與多種上皮性惡性腫瘤的局部浸潤以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Twist基因是堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basic Helix-Loop-Helix,b HLH)轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一,1983年被Thisse等在研究果蠅胚胎發(fā)育時初次發(fā)現(xiàn),在轉(zhuǎn)移性腫瘤中Twist基因的過度表達(dá)非常常見。在對多種腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn),Twist基因是腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),并獲得遷徙、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的主要誘導(dǎo)因子之一。本研究探討Twist基因在人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞中的過表達(dá)對絨癌細(xì)胞增殖能力及對上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物N-cadherin的影響,說明Twist基因在絨癌發(fā)生發(fā)展中的作用,從另一方面闡明絨癌的發(fā)病機制,為絨癌的早期診斷和治療提供更可靠的理論依據(jù),以期制定個性化治療方案。方法:1細(xì)胞培養(yǎng):人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞株于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng),使其保持良好的細(xì)胞生長狀態(tài);2分組:(1)實驗組—轉(zhuǎn)染p EGFP-N1-Twist特異性質(zhì)粒;(2)陰性對照組—轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒;(3)脂質(zhì)體對照組—轉(zhuǎn)染LipofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑;(4)空白對照組—常規(guī)培養(yǎng)不予轉(zhuǎn)染;3倒置相差顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的形態(tài)變化;4 CCK-8法檢測0小時、24小時、48小時、72小時及96小時實驗組和各對照組JEG-3細(xì)胞的增殖速度;5 Realtime-q PCR法檢測各組人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時后Twist-m RNA的表達(dá)水平;6 Western blot方法檢測轉(zhuǎn)染48小時后各組人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物N-cadherin的表達(dá)量;7統(tǒng)計方法:應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,各組數(shù)據(jù)以??±s表示,多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間差異選用SNK/LSD法,以P0.05表示差異具有顯著性,所有實驗結(jié)果均重復(fù)3次。結(jié)果:1細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:JEG-3細(xì)胞呈圓形或多邊形生長,細(xì)胞輪廓清晰,轉(zhuǎn)染48小時后細(xì)胞形態(tài)呈多角形或不規(guī)則形,大片狀生長,邊界不清。2 CCK-8法檢測各組細(xì)胞的增殖能力:0小時:實驗組0.143±0.003,陰性對照組0.138±0.003,脂質(zhì)體對照組0.143±0.003,空白對照組0.139±0.002,各組之間相比P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,即各組細(xì)胞增殖能力相近;24小時:實驗組0.248±0.002與陰性對照組0.244±0.007相比P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,增殖能力相似;實驗組0.248±0.002與脂質(zhì)體對照組0.193±0.004及空白對照組0.221±0.010相比,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,即實驗組增殖能力較快;48小時:陰性對照組0.417±0.003,脂質(zhì)體對照組0.407±0.011,空白對照組0.418±0.009相比P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,增殖能力相近;而實驗組0.515±0.002增殖能力明顯高于其余3個對照組,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;72小時:細(xì)胞增殖能力實驗組0.988±0.021空白對照組0.781±0.016陰性對照組0.617±0.003脂質(zhì)體對照組0.515±0.013,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;96小時:各組細(xì)胞增殖趨勢與72小時相似,實驗組1.411±0.005空白對照組1.293±0.003陰性對照組1.163±0.006脂質(zhì)體對照組0.801±0.005,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3 Realtime-q PCR實驗檢測各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染48小時后Twist-m RNA的表達(dá)水平:實驗組2.074±0.025;陰性對照組1.093±0.011;脂質(zhì)體對照組1.055±0.025;空白對照組1.002±0.021;實驗組分別與陰性對照組、脂質(zhì)體對照組和空白對照組比較,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,即實驗組Twist-m RNA表達(dá)量明顯升高。陰性對照組與脂質(zhì)體對照組Twist-m RNA的表達(dá)量對比P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。4 Western-blot方法檢測各組細(xì)胞中E-cadherin、N-cadherin的表達(dá)情況:轉(zhuǎn)染48小時后,各組細(xì)胞中E-cadherin的表達(dá)為:實驗組0.273±0.045,陰性對照組0.645±0.020,脂質(zhì)體對照組0.594±0.031,空白對照組0.390±0.034;實驗組與各對照組相比,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,實驗組較其他對照組組明顯降低;各組細(xì)胞N-cadherin的表達(dá)為:實驗組0.679±0.032,陰性對照組0.578±0.030,脂質(zhì)體對照組0.576±0.013,空白對照組0.581±0.020;實驗組與各對照組相比,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,即實驗組較陰性對照組、脂質(zhì)體對照組和空白對照組N-cadherin表達(dá)顯著升高。而3個對照組之間兩兩比較,P0.05,E-cadherin蛋白、N-cadherin蛋白表達(dá)量均無顯著性差異。結(jié)論:1Twist基因過表達(dá)可使人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞發(fā)生形態(tài)學(xué)改變,由圓形變?yōu)槎嘟切魏筒灰?guī)則形,輪廓不清楚,呈現(xiàn)出間質(zhì)細(xì)胞的表型特征,使絨癌細(xì)胞更具有惡性侵襲力。2Twist基因過表達(dá)可增加人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞的增殖能力。3Twist基因在人絨毛膜癌JEG-3細(xì)胞中的過表達(dá)可導(dǎo)致N-cadherin的表達(dá)增高,E-cadherin的表達(dá)降低,說明Twist基因通過細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化機制參與了絨癌的發(fā)生發(fā)展過程。
【關(guān)鍵詞】：Twist基因 絨毛膜癌 JEG-3細(xì)胞 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 E-cadherin N-cadherin
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-26
• 結(jié)果26-28
• 附圖28-31
• 附表31-33
• 討論33-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 綜述Twist基因與婦科惡性腫瘤上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展41-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 致謝48-49
• 個人簡歷49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：Twist基因誘導(dǎo)絨癌細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：496046