本文關(guān)鍵詞：SARI和PC4在宮頸癌細胞生長中的作用與機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的宮頸癌作為高發(fā)的惡性腫瘤嚴(yán)重危害著女性的生殖健康,目前宮頸癌的發(fā)病率在全球女性惡性腫瘤中位居第四,在發(fā)展中國家宮頸癌的死亡率居女性惡性腫瘤死亡率的首位。根據(jù)2015年NCCN發(fā)布的宮頸癌臨床指南中顯示宮頸癌的治療仍然以患者的手術(shù)切除為主,以放療、化療為輔助治療手段,對于不同病程的患者采取的主要治療策略也有所不同,所以在臨床治療中宮頸癌的早期診斷、治療策略的效果評估和預(yù)后的追蹤檢測顯得尤為重要。與其他腫瘤相比,宮頸癌存在一段較長時間的癌前病變過程,且在此期間無明顯的臨床癥狀,現(xiàn)階段病理診斷及腫瘤分子標(biāo)志物的應(yīng)用對患者進行預(yù)后評估的準(zhǔn)確性相對較差,因此明確宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)基礎(chǔ)對探索有效的腫瘤標(biāo)記物有重要價值。SARI(suppressor of AP-1 and regulated by IFN)又稱BATF2(basic leucine zipper transcription factor,ATF-like 2)。正常表達于人體多種組織中,在腫瘤發(fā)生過程中可以作為抑癌基因發(fā)揮抑制腫瘤生長的功能。SARI在乳腺、前列腺上皮細胞等正常組織中表達明顯高于其腫瘤組織,其表達水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有明顯的相關(guān)性,也有研究發(fā)現(xiàn)SARI低表達可以促進腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲過程。以上研究均表明在細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化、增殖的過程中SARI表達水平下調(diào),提示SARI可能抑制腫瘤細胞的發(fā)生和發(fā)展。PC4(positive coactivator4)是存在于細胞核內(nèi)的一種輔助轉(zhuǎn)錄因子,可以參與細胞內(nèi)DNA轉(zhuǎn)錄、修復(fù)等多種表達調(diào)控過程。有研究發(fā)現(xiàn)PC4在多種腫瘤組織中(如食管癌、乳腺癌及肺癌等)表達顯著升高,并發(fā)現(xiàn)PC4的高表達與腫瘤的轉(zhuǎn)移、放療抵抗等密切相關(guān)。以上研究均表明在細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化、增殖過程中PC4表達水平上調(diào),提示PC4可能促進了腫瘤細胞的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。無論是抑癌基因SARI或是促癌基因PC4,在多種正常組織與腫瘤組織中的表達量均存在顯著差異,并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。然而在宮頸癌中SARI或PC4的生物學(xué)功能及相關(guān)分子機制尚未見報道。故本研究以宮頸癌細胞為研究對象,以探究SARI和PC4對宮頸癌細胞生長的影響為主要目的,并通過闡明其表達調(diào)控的部分機制,為進一步探究宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)基礎(chǔ)提供理論依據(jù)。研究方法:第一部分SARI在宮頸癌細胞生長中的作用與機制的研究首先通過Real-time PCR檢測SARI在宮頸癌臨床樣本中的表達特點;然后在HeLa和CaSki細胞轉(zhuǎn)染SARI的表達質(zhì)粒上調(diào)SARI的表達水平;使用Real-time PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染SARI的表達質(zhì)粒后SARI表達水平的變化;CCK-8法檢測宮頸癌細胞SARI表達上調(diào)后對細胞生長的影響;流式細胞術(shù)分析上調(diào)SARI后細胞的周期和凋亡;報告基因檢測轉(zhuǎn)錄因子AP-1的轉(zhuǎn)錄活性;Western blot檢測抗凋亡分子Mcl-1和Bcl-2的表達。第二部分PC4在宮頸癌細胞生長中的作用與機制的研究首先通過Real-time PCR檢測PC4在宮頸癌臨床樣本和宮頸癌細胞系中的表達特點;然后采用RNA干擾技術(shù)下調(diào)HeLa和CaSki細胞中PC4表達;使用Real-time PCR和Western blot檢測上述宮頸癌細胞中沉默PC4后PC4表達水平的變化;CCK-8法檢測宮頸癌細胞PC4表達水平的改變對細胞生長的影響;流式細胞技術(shù)分析沉默PC4后的細胞周期;Western blot檢測在沉默PC4后宮頸癌細胞中PARP及抗凋亡相關(guān)分子的表達水平的變化;通過Real-time PCR、Western blot等實驗探索相關(guān)分子信號通路對PC4表達的調(diào)控。研究結(jié)果:1.SARI在宮頸癌組織中低表達。SARI表達水平上調(diào)后,細胞生長活性受到抑制,凋亡細胞增加但對細胞周期沒有明顯影響。上調(diào)SARI的表達對AP-1的轉(zhuǎn)錄活性產(chǎn)生抑制,下調(diào)了抗凋亡分子Mcl-1的表達水平,但對Bcl-2的表達水平?jīng)]有產(chǎn)生顯著的影響。2.PC4在宮頸癌組織中高表達。PC4表達水平下調(diào)后,宮頸癌細胞的生長受到抑制,細胞周期發(fā)生阻滯且細胞發(fā)生凋亡,檢測相關(guān)分子發(fā)現(xiàn)PARP發(fā)生剪切,抗凋亡分子Mcl-1和Bcl-2表達均下調(diào)。PC4在宮頸癌細胞中的表達水平與E6癌蛋白的表達相關(guān);E6原癌蛋白可以下調(diào)p53的表達并上調(diào)PC4的表達;抑癌因子p53可以抑制PC4的表達。結(jié)論:1.上調(diào)SARI使宮頸癌細胞的生長活性受到抑制,細胞發(fā)生凋亡。且在宮頸癌中SARI的這種抑制腫瘤細胞生長的功能可能是由于對AP-1的轉(zhuǎn)錄活性產(chǎn)生抑制進而通過抗凋亡分子Mcl-1表達的下調(diào)來實現(xiàn)的;2.在宮頸癌細胞中沉默PC4可以抑制腫瘤細胞的生長,使腫瘤細胞的周期阻滯在G1期,且可能通過下調(diào)抗凋亡分子Mcl-1、Bcl-2的表達來誘導(dǎo)宮頸癌細胞發(fā)生凋亡;E6原癌蛋白可以下調(diào)p53并釋放p53對PC4的抑制作用使PC4表達上調(diào)進而促進腫瘤細胞的生長。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 PC4 SARI 細胞生長 細胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 SARI在宮頸癌細胞生長中的作用與機制的研究13-31
• 2.1 材料13-16
• 2.2 方法16-24
• 2.3 結(jié)果24-28
• 2.4 討論28-30
• 2.5 小結(jié)30-31
• 第三章 PC4在宮頸癌細胞生長中的作用與機制的研究31-54
• 3.1 材料31-34
• 3.2 方法34-42
• 3.3 結(jié)果42-51
• 3.4 討論51-53
• 3.5 小結(jié)53-54
• 全文總結(jié)54-55
• 參考文獻55-61
• 文獻綜述 宮頸癌中腫瘤分子標(biāo)志物和研究進展61-70
• 參考文獻66-70
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況70-71
• 致謝71

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1 盧美松;鄧鎖;王澤華;;體外模擬二氧化碳人工氣腹對宮頸癌細胞生長的影響[J];中國實用婦科與產(chǎn)科雜志;2007年01期

2 周晨慧;;干擾素-γ對宮頸癌細胞免疫分子表達的影響[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2007年01期

3 潘惠艷;趙群;詹陽;趙麗紅;張衛(wèi)華;吳玉梅;;電壓門控鈉離子通道表達對宮頸癌細胞增殖侵襲轉(zhuǎn)移作用的研究[J];中國腫瘤臨床;2012年04期

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本文編號：481052