本文關(guān)鍵詞：早產(chǎn)胎盤miRNA表達(dá)譜構(gòu)建及miR-182-5p在早產(chǎn)中作用的探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：早產(chǎn)(Preterm Birth,PTB)定義為孕期小于37周或從末次月經(jīng)第一天開始計算少于259天分娩。早產(chǎn)在我國的發(fā)生率約為8%,并且有逐年上升的趨勢,75%的圍產(chǎn)兒死亡和50%的異常與早產(chǎn)有關(guān),是圍產(chǎn)兒發(fā)病和死亡的首要原因。早產(chǎn)的發(fā)生機(jī)制尚不完全清楚,目前認(rèn)為,早產(chǎn)是多種因素相互作用所致的一種綜合征,與遺傳、感染、孕酮水平、多胎妊娠、宮頸長度、胎盤異常、年齡、營養(yǎng)狀況、凝血因素等有關(guān)。近年來,研究發(fā)現(xiàn)微小RNA(microRNA,mi RNA)水平及基因3’非翻譯區(qū)(3’-UTR)上mi RNA作用靶點序列多態(tài)與早產(chǎn)、先兆子癇、流產(chǎn)以及胎兒畸形等不良妊娠結(jié)局有關(guān)。本研究旨在構(gòu)建早產(chǎn)胎盤差異表達(dá)的mi RNA圖譜,篩選早產(chǎn)相關(guān)的mi RNA,并探討其在早產(chǎn)中的作用。方法:2013年2月-2013年10月期間分娩的早產(chǎn)兒16例為病例組,同期健康足月產(chǎn)兒18例為對照組,取胎盤組織。通過非標(biāo)記miRNA芯片技術(shù)構(gòu)建早產(chǎn)胎盤組織mi RNA表達(dá)譜,采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)進(jìn)行驗證。構(gòu)建鋅指E-box結(jié)合同源框2(Zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)和人凝血因子XIIIA1多肽(Factor XIII A,F13A1)的psiCHECK2野生型和突變型的載體,通過雙熒光素酶報告基因檢測、原位雜交等方法探討mi R-182-5p與ZEB2和F13A1基因的互作關(guān)系。結(jié)果:1.對照組胎盤和早產(chǎn)胎盤中有1138種miRNAs在胎盤中表達(dá),其中miR-4251、mi R-517c-3p和mi R-23b-3p等mi RNAs在胎盤中表達(dá)最高,miR-1292-3p、mi R-4632-5p和miR-5787等mi RNAs表達(dá)最低。mi RNA芯片結(jié)果顯示44種miRNAs在早產(chǎn)胎盤組織和對照組胎盤組織中差異表達(dá),其中上調(diào)表達(dá)的33個,下調(diào)表達(dá)的11個,mi R-493-3p是下調(diào)表達(dá)倍數(shù)最多的miRNA,下調(diào)倍數(shù)為2.77倍,mi R-1322為上調(diào)表達(dá)最多的mi RNA,上調(diào)倍數(shù)為9.81。RT-PCR驗證結(jié)果與芯片結(jié)果一致。2.實時熒光定量PCR結(jié)果顯示mi R-182-5p在早產(chǎn)胎盤組織中表達(dá)水平顯著增加,采用原位雜交結(jié)果顯示mi R-182-5p在胎盤組織細(xì)胞質(zhì)中廣泛表達(dá)。3.采用在線軟件預(yù)測mi R-182-5p的靶基因為ZEB2和F13A1。雙熒光素酶活性實驗結(jié)果顯示在HTR-8/SVneo細(xì)胞中miR-182-5p直接作用于ZEB2和F13A1基因,并且起抑制作用。采用實時熒光定量PCR方法檢測,與足月產(chǎn)胎盤相比,早產(chǎn)胎盤組織的ZEB2和F13A1的m RNA未見差異表達(dá)。結(jié)論:1.早產(chǎn)胎盤組織中存在差異表達(dá)的mi RNAs,這些差異表達(dá)的mi RNAs在早產(chǎn)中的功能還需要進(jìn)一步的研究。2.mi R-182-5p在早產(chǎn)胎盤組織中表達(dá)上調(diào),在離體細(xì)胞中mi R-182-5p對ZEB2和F13A1基因起抑制作用,但是在在體組織中,在mi R-182-5p增高的早產(chǎn)胎盤組織中,ZEB2和F13A1基因的m RNA水平未見顯著差異。因此,在胎盤組織中mi R-182-5p并非通過直接降調(diào)ZEB2和F13A1 mRNA的水平參與早產(chǎn)的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：早產(chǎn) mi RNA 芯片 雙熒光素酶報告基因 mi R-182-5p ZEB2 F13A1
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R714.21
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 第一部分 早產(chǎn)胎盤micro RNA表達(dá)譜構(gòu)建9-33
• 前言9-11
• 1.實驗材料和試劑11-14
• 2.實驗方法14-20
• 3.結(jié)果20-27
• 4.討論27-29
• 參考文獻(xiàn)29-33
• 第二部分 mi R-182-5p 在早產(chǎn)中作用的初步探討33-68
• 前言33-35
• 1.實驗材料和試劑35
• 2.實驗方法35-53
• 3.結(jié)果53-63
• 4.討論63-65
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 綜述68-82
• 參考文獻(xiàn)74-82
• 發(fā)表文章82-83
• 致謝83

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  本文關(guān)鍵詞：早產(chǎn)胎盤miRNA表達(dá)譜構(gòu)建及miR-182-5p在早產(chǎn)中作用的探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：464788