本文關(guān)鍵詞：GPR30-EGFR信號通路在雙酚A促子宮肌瘤細(xì)胞增殖中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的：通過檢測雙酚A (Bishpenol A, BPA)作用下子宮肌瘤細(xì)胞中GRP30-EGFR信號通路的變化,探討該信號通路在子宮平滑肌瘤細(xì)胞增殖中的分子機(jī)制,為降低人群中子宮肌瘤發(fā)病率的綜合防治措施提供理論依據(jù)。研究方法：1、Real-Time PCR法及Western blot法研究15例平滑肌瘤組織及相鄰的正常平滑肌組織中GPR30及EGFR的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。2、原代培養(yǎng)子宮平滑肌瘤細(xì)胞,免疫細(xì)胞組化法鑒定平滑肌相關(guān)標(biāo)志蛋白(a-Smooth Muscle Actin, a-SMA)的表達(dá),應(yīng)用CCK8法鑒定在BPA組(10μmol/L),G1組(GPR30特異性激動(dòng)劑)(1μmol/L), G15組(GPR30特異性抑制劑)(1μmol/L),ICI182780組(雌激素受體拮抗劑)(1μmol/L), AG1478組(EGFR特異性抑制劑)(10μmol/L), PD98059組(非競爭性的MEK的抑制劑)(10μmol/L), G15+BPA組(1μmol/L+10μmol/L), ICI182780+BPA組(1μmol/L+10μmol/L), AG1478+BPA組(10μmol/L+10μmol/L), PD98059+BPA組(10μmol/L+10μmol/L)及DMSO對照組分別觀察子宮肌瘤細(xì)胞的增殖情況。3、用Real-Time PCR法及Western bolt法研究各組細(xì)胞中GPR30及EGFR的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。4、通過Western bolt法測定的p-ERK1/2、c-fos的表達(dá),研究EGFR的下游通路的MAPK/ERK信號通路的影響。研究結(jié)果：1、GPR30及EGFR mRNA和蛋白在子宮肌瘤組織中的表達(dá)高于瘤旁正常的平滑肌組織,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、成功建立子宮肌瘤細(xì)胞5-6代有限增殖細(xì)胞系,并且用免疫細(xì)胞組化法鑒定培養(yǎng)的細(xì)胞為子宮肌瘤細(xì)胞。3、CCK8法研究發(fā)現(xiàn)在10μmol/L BPA能夠促進(jìn)子宮肌瘤細(xì)胞增殖,而用GPR30-EGFR信號通路的抑制劑G15、AG1478、PD98059均能夠抑制BPA對子宮肌瘤細(xì)胞的增殖作用。4、Real-Time PCR法及Western bolt法研究發(fā)現(xiàn)：BPA組、G1組均能使GPR30、EGFR的mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào),與對照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；而采用GPR30-EGFR信號通路中的GPR30抑制劑G15、EGFR抑制劑AG1478、MEK抑制劑PD98059能夠使GPR30、EGFR的mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào),和對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；G15組、AG組、PD組和BPA協(xié)同作用后,GPR30、EGFR的mRNA和蛋白的表達(dá)相對于BPA單獨(dú)作用組有所下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5、Western bolt法測定EFGR的下游通路中c-fos、p-ERK1/2的研究發(fā)現(xiàn)BPA、G1組與對照組相比,均能使c-fos、p-ERK1/2表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),G15組、AG組、PD組與對照組相比,能夠使c-fos、p-ERK1/2蛋白的表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；G15組、AG組、PD組和BPA協(xié)同作用后,與單獨(dú)BPA組相比,c-fos、p-ERK1/2蛋白的表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。研究結(jié)論：1、子宮平滑肌瘤組織中GPR30和EGFR的表達(dá)水平升高。2、BPA可促進(jìn)子宮平滑肌瘤細(xì)胞的增殖。其機(jī)制可能與GPR30-EGFR及其下游MAPK/ERK/c-fos信號通路的激活有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：子宮肌瘤 BPA GPR30-EGFR信號通路
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 縮略詞注釋表11-13
• 前言13-17
• 第一章 文獻(xiàn)綜述 子宮肌瘤的信號通路的研究進(jìn)展17-25
• 1.1 激素相關(guān)信號通路17-19
• 1.1.1 雌激素17-18
• 1.1.2 孕激素18-19
• 1.1.3 環(huán)境雌激素19
• 1.2 生長因子相關(guān)信號通路19-21
• 1.2.1 IGFs20
• 1.2.2 EGF20
• 1.2.3 VEGF和FGF20
• 1.2.4 TGF20-21
• 1.3 其它相關(guān)信號通路21-24
• 1.3.1 Wnt/β-Catenin21-22
• 1.3.2 維甲酸(Retinoic acid,RA)22
• 1.3.3 維生素D(Vitamin D)22-23
• 1.3.4 細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)23
• 1.3.5 腎上腺素受體(Adreno receptor,AR)23
• 1.3.6 過氧化物酶增生物激活受體γ(Peroxisome proliferator-activated receptorgamma,PPAR-γ)23-24
• 1.4 總結(jié)24-25
• 第二章 GPR30-EGFR信號通路在雙酚A促子宮肌瘤細(xì)胞增殖中的作用研究25-52
• 2.1 材料與方法25-36
• 2.1.1 標(biāo)本采集25
• 2.1.2 試劑與儀器25-28
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法和步驟28-36
• 2.2 結(jié)果36-46
• 2.2.1 子宮肌瘤組織中GPR30和EGFR的測定36-37
• 2.2.2 原代細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定37-38
• 2.2.3 CCK-8法觀察BPA干預(yù)前后子宮肌瘤細(xì)胞的增殖情況38-40
• 2.2.4 Real-time PCR法分析各組GPR30 mRNA、EGFR mRNA、ERα mRNA的表達(dá)40-43
• 2.2.5 Western Blot法分析各組GPR30蛋白、EGFR蛋白及其下游基因的表達(dá)43-46
• 2.3 討論46-52
• 2.3.1 子宮肌瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù)46-48
• 2.3.2 BPA對子宮肌瘤細(xì)胞增殖的影響及可能作用機(jī)制48-52
• 結(jié)論52-53
• 問題和展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-63
• 致謝63-64
• 作者簡介64

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 盧清;GPR30-EGFR信號通路在雙酚A促子宮肌瘤細(xì)胞增殖中的作用[D];東南大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：GPR30-EGFR信號通路在雙酚A促子宮肌瘤細(xì)胞增殖中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：453641