本文關(guān)鍵詞：TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol對(duì)宮頸癌化療增敏的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：阿霉素等傳統(tǒng)化療藥物作為有效的抗癌藥物而廣泛地應(yīng)用于臨床,但最近研究發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細(xì)胞易對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性,這就導(dǎo)致了在治療癌細(xì)胞的過(guò)程中化療藥物的量要不斷增加,這也會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生極大的毒副作用,因此尋求一種高效安全的抗腫瘤藥物是目前藥物研究的主要方向。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道一些化療藥物可激活核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB),NF-κB的激活抑制了化療劑的細(xì)胞毒性的潛力,導(dǎo)致癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶(TGF-activated kinase 1,TAK1)是絲裂原活化蛋白激酶的激酶的激酶(MAPKKK)家族中的一員,通過(guò)激活JNK/p38、MAPK和NF-κB信號(hào)通路參與促炎細(xì)胞信號(hào)通路。最近研究表明,TAK1還激活I(lǐng)κB激酶(IKKs),最終導(dǎo)致NF-κB的活化。前期研究發(fā)現(xiàn)一個(gè)真菌源的天然二羥基內(nèi)酯5Z-7-oxozeaenol(簡(jiǎn)稱(chēng),5Z-7),是一個(gè)TAK1高效的抑制劑,而其對(duì)MAPKKK家族的其他成員如MEKK1和ASK 1的激酶活性沒(méi)有顯著的效果,其對(duì)TAK1的抑制具有專(zhuān)一性。在宮頸癌細(xì)胞中,關(guān)于TAK1是否參與NF-κB活性的調(diào)節(jié),以及TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol(簡(jiǎn)稱(chēng),5Z-7)是否對(duì)宮頸癌細(xì)胞凋亡及NF-κB活性產(chǎn)生影響尚鮮有報(bào)道。本研究以宮頸癌細(xì)胞為細(xì)胞模型,研究了TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol與化療藥物聯(lián)用抑制人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)陽(yáng)性和陰性宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用,初步闡明5Z-7-oxozeaenol抗宮頸癌的作用機(jī)制,可為化合物5Z-7-oxozeaenol治療宮頸癌提供新途徑和理論依據(jù)。本研究結(jié)果主要包括以下內(nèi)容:1.TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol可增強(qiáng)阿霉素對(duì)宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用本研究以4種HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞He La,Si Ha,Ca Ski,ME-180為實(shí)驗(yàn)材料,通過(guò)CCK-8法發(fā)現(xiàn)5Z-7對(duì)HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞有較強(qiáng)的體外抗細(xì)胞生長(zhǎng)活性。當(dāng)5μM 5Z-7與0.5μM阿霉素(Dox)共同處理細(xì)胞48 h時(shí),對(duì)He La,Ca Ski,ME-180三種細(xì)胞的抑制率分別為60%,70%和85%,都與0.5μM阿霉素(Dox)單藥處理組相比差異顯著((P0.05)。當(dāng)2μM 5Z-7與0.5μM阿霉素(Dox)共同處理細(xì)胞48 h時(shí),對(duì)Si Ha細(xì)胞的抑制率為40%,與0.5μM阿霉素(Dox)單藥處理組相比差異顯著(P0.01),結(jié)果表明5Z-7與阿霉素(Dox)聯(lián)用顯著抑制了HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。軟瓊脂(Soft Agar Assay)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,0.5μM 5Z-7與0.05μM阿霉素(Dox)共同處理He La細(xì)胞14 d時(shí)與0.05μM阿霉素(Dox)單獨(dú)用藥組相比有明顯差異(P0.01),說(shuō)明二者聯(lián)用對(duì)宮頸癌細(xì)胞非錨定生長(zhǎng)有明顯抑制作用。用同樣的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)HPV陰性宮頸癌細(xì)胞C-33-A進(jìn)行了檢測(cè),也發(fā)現(xiàn)5Z-7可協(xié)同阿霉素(Dox)對(duì)C-33-A有較強(qiáng)的體外抗細(xì)胞生長(zhǎng)活性。2.TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol可協(xié)同阿霉素促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明5Z-7可協(xié)同阿霉素(Dox)促進(jìn)He La細(xì)胞凋亡。Western blotting結(jié)果顯示二者聯(lián)用促進(jìn)了HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞He La,Si Ha,Ca Ski,ME-180的凋亡蛋白PARP裂解為小片段,表明5Z-7增強(qiáng)了阿霉素(Dox)對(duì)宮頸癌的誘導(dǎo)凋亡作用。采用Western blotting方法對(duì)HPV陰性宮頸癌細(xì)胞C-33-A進(jìn)行了檢測(cè),也發(fā)現(xiàn)5Z-7可協(xié)同阿霉素(Dox)對(duì)促使C-33-A的凋亡蛋白PARP裂解為小片段,對(duì)C-33-A具有誘導(dǎo)凋亡的作用。3.TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol通過(guò)阻斷NF-κB信號(hào)通路增強(qiáng)阿霉素對(duì)He La細(xì)胞的化療作用。本研究通過(guò)Western blotting比較Dox單獨(dú)作用于細(xì)胞以及Dox與TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol聯(lián)合作用于HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞He La,結(jié)果顯示,5Z-7與阿霉素(Dox)聯(lián)用后與阿霉素(Dox)單藥組相比磷酸化JNK和p38表達(dá)下調(diào),但使得相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)IκBα表達(dá)上調(diào),說(shuō)明在HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞中5Z-7可阻斷由阿霉素(Dox)引發(fā)的TAK1參與的NF-κB的激活。用同樣的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)HPV陰性宮頸癌細(xì)胞C-33-A進(jìn)行了檢測(cè),也發(fā)現(xiàn)5Z-7可在C-33-A中阻斷由阿霉素(Dox)引發(fā)的TAK1參與的NF-κB的激活。綜上所述,我們可以得出結(jié)論:1)TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol可增強(qiáng)阿霉素對(duì)宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。2)TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol可增強(qiáng)阿霉素對(duì)宮頸癌細(xì)胞的促凋亡作用。3)TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol通過(guò)阻斷NF-κB信號(hào)通路增強(qiáng)阿霉素對(duì)宮頸癌細(xì)胞的化療作用。以上結(jié)論預(yù)示5Z-7-oxozeaenol是一種具有良好開(kāi)發(fā)前景的潛在的抗腫瘤藥物,本研究可為化合物5Z-7-oxozeaenol抗腫瘤藥物研制與開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供基礎(chǔ)資料。
【關(guān)鍵詞】：TAK1抑制劑 5Z-7-oxozeaenol 化療 HPV 宮頸癌
【學(xué)位授予單位】：新疆大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文縮略語(yǔ)11-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-22
• 1 宮頸癌的研究進(jìn)展12-13
• 2 TAK1及其抑制劑 5Z7oxozeaenol的研究進(jìn)展13-14
• 3 NF- κB通路的作用機(jī)制14-17
• 4 本研究的目的及意義17
• 參考文獻(xiàn)17-22
• 第二章 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌細(xì)胞的化療增敏作用及其相關(guān)機(jī)理的初步探究22-59
• 摘要22-23
• 英文摘要23-24
• 引言24-25
• 1 材料25-26
• 1.1 主要試劑及儀器25-26
• 1.1.1 抗體和試劑25-26
• 1.1.2 儀器26
• 1.2 細(xì)胞系26
• 1.3 小分子TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol溶解體系的配制26
• 2 方法26-30
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)26-27
• 2.2 Western Blotting印跡檢測(cè)27-28
• 2.3 CCK-8 細(xì)胞活力檢測(cè)28-29
• 2.4 軟瓊脂試驗(yàn)29
• 2.5 碘化丙啶(PI)染色測(cè)定29-30
• 2.6 統(tǒng)計(jì)分析30
• 3 結(jié)果與分析30-52
• 3.1 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用的影響30-40
• 3.1.1 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)的影響30-32
• 3.1.2 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)HPV陰性宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)的影響32-33
• 3.1.3 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌細(xì)胞系IC50值的影響33-34
• 3.1.4 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞形態(tài)的影響34-36
• 3.1.5 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)HPV陰性宮頸癌細(xì)胞形態(tài)的影響36
• 3.1.6 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞He La集落形成的作用36-38
• 3.1.7 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)HPV陰性宮頸癌細(xì)胞C33A集落形成的作用38-40
• 3.2 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響40-44
• 3.2.1 流式細(xì)胞儀法檢測(cè)藥物作用對(duì)細(xì)胞凋亡的影響40-42
• 3.2.2 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的影響42-43
• 3.2.3 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol聯(lián)用阿霉素對(duì)HPV陰性宮頸癌細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的影響43-44
• 3.3 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路的影響44-52
• 3.3.1 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌細(xì)胞中的IκBα 表達(dá)水平的影響44-47
• 3.3.1.1 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)HPV陽(yáng)性He La細(xì)胞中的IκBα 表達(dá)水平的影響44-45
• 3.3.1.2 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)HPV陰性C33A細(xì)胞中的IκBα 表達(dá)水平的影響45-47
• 3.3.2 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌細(xì)胞中P38磷酸化和非磷酸化水平的影響47-49
• 3.3.2.1 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌HPV陽(yáng)性He La細(xì)胞中P38磷酸化和非磷酸化水平的影響47-48
• 3.3.2.2 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌HPV陰性C33A細(xì)胞中P38磷酸化和非磷酸化水平的影響48-49
• 3.3.3 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌細(xì)胞中JNK磷酸化和非磷酸化水平的影響49-52
• 3.3.3.1 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)HPV陽(yáng)性He La細(xì)胞中JNK磷酸化和非磷酸化水平的影響49-51
• 3.3.3.2 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)HPV陰性C33A細(xì)胞中JNK磷酸化和非磷酸化水平的影響51-52
• 4 討論52-56
• 4.1 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol可增強(qiáng)阿霉素對(duì)宮頸癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用52-53
• 4.2 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol可增強(qiáng)阿霉素對(duì)宮頸癌細(xì)胞的促凋亡作用53-54
• 4.3 TAK1抑制劑 5Z7oxozeaenol對(duì)宮頸癌細(xì)胞中NF-κB信號(hào)通路具有阻斷作用54-56
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 結(jié)論與展望59-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷60-61
• 致謝61-63

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳柏年;杜冠華;;壞死性凋亡:一種新的細(xì)胞死亡方式[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2010年02期

  本文關(guān)鍵詞：TAK1抑制劑5Z-7-oxozeaenol對(duì)宮頸癌化療增敏的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：449579