本文關(guān)鍵詞：Bevacizumab靶向治療卵巢癌及其對(duì)SKOV3細(xì)胞VEGF自分泌通路的抑制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1.目的1)VEGF及其受體VEGFR1(Flt-1)、VEGFR2(KDR)在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)與臨床預(yù)后的關(guān)系;2)SKOV3細(xì)胞VEGF自分泌現(xiàn)象及Bevacizumab對(duì)其增殖的抑制作用研究。2.方法1)VEGF及其受體VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及與臨床預(yù)后研究:(1)正常卵巢、良性上皮性卵巢腫瘤及上皮性卵巢癌組織中VEGF、VEGFR1及VEGFR2的表達(dá)差異;(2)上皮性卵巢癌組織中VEGF及VEGFR1、VEGFR2的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系;(3)VEGF及VEGFR1、VEGFR2三者陽(yáng)性表達(dá)之間的相關(guān)性;(4)VEGF及VEGFR1、VEGFR2三者共高表達(dá)與非共高表達(dá)5年生存率比較。2)上皮性卵巢癌細(xì)胞中VEGF自分泌機(jī)制研究:(1)對(duì)比及篩選上皮性卵巢癌細(xì)胞系中VEGF、VEGFR1(Flt-1)、VEGFR2(KDR)的表達(dá)差異;(2)檢測(cè)不同培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)基血清中VEGF含量;(3)外源加入不同濃度rh VEGF檢測(cè)篩選后細(xì)胞系增殖情況;(4)驗(yàn)證細(xì)胞自分泌途徑主要結(jié)合VEGFR2(KDR)分泌機(jī)制。3)Bevacizumab(Bev)對(duì)上皮性卵巢癌細(xì)胞增殖影響及機(jī)制研究:(1)鏡下觀察各種Bev濃度梯度下作用SKOV3細(xì)胞24h后細(xì)胞輪廓改變情況;(2)MTT法檢測(cè)不同濃度Bev及對(duì)照組細(xì)胞的增殖情況;(3)Annexin-FITC/PI雙染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡;(4)WB分析不同濃度Bev作用SKOV3后Flt-1、KDR及p-KDR表達(dá)變化;(5)通過(guò)Ki8751選擇性抑制KDR受體,初步推斷其下游ERK可能參與Bev直接抑制SKOV3細(xì)胞自分泌通路。3.結(jié)果1)VEGF及其受體VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌組織中的染色強(qiáng)度明顯高于良性卵巢腫瘤及正常卵巢上皮;并且VEGF及其受體在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)與臨床分期及腹水量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在相關(guān)分析中高表達(dá)的VEGF與VEGFR2(r=0.316,p0.05)、VEGFR1與VEGFR2(r=0.415,p0.05)均存在相關(guān)性;VEGF及其受體的三者共高表達(dá)較非共高表達(dá)患者的5年生存率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.044)。2)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3中存在VEGF及其受體Flt-1、KDR的共表達(dá)及相對(duì)高表達(dá)(p0.05),不同濃度的rh VEGF對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3有促進(jìn)增殖作用,且隨著濃度梯度的遞增,增殖成正比,初步推斷該過(guò)程可能由KDR介導(dǎo)(t=7.64;t=5.53;t=4.22;t=6.59,p0.05;),而非Flt-1介導(dǎo)(t=2.05;t=2.34;t=1.32,p0.05),同時(shí)外源性rh VEGF可刺激SKOV3細(xì)胞VEGFR2(KDR)(t=5.81,*P0.05)及p-VEGFR2(p-KDR)(t=12.43,*P0.05)的表達(dá)增高,提示卵巢癌細(xì)胞株VEGF的自分泌機(jī)制主要通過(guò)KDR介導(dǎo),而非Flt-1,并通過(guò)磷酸化受體p-KDR激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮作用。3)不同濃度Bevacizumab對(duì)卵巢癌細(xì)胞株SKOV3有抑制增殖、增加凋亡作用(*P0.05);WB結(jié)果提示Bev以上的作用可能與阻斷VEGF自分泌環(huán)路有關(guān),即降低相應(yīng)受體VEGFR2(KDR)/p-VEGFR2(p-KDR)的表達(dá)(*P0.05),而非VEGFR1(Flt-1)(P0.05)。此外,erk及p-erk分子在Bev、Ki8751(VEGFR2抑制劑)及Bev+Ki8751組中的表達(dá)明顯較空白對(duì)照組顯著減少(*P0.05),提示Bevacizumab可能通過(guò)間接抑制VEGFR2下游信號(hào)通路中erk及p-erk的表達(dá)而抑制細(xì)胞VEGF自分泌功能,進(jìn)一步抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖。4.結(jié)論1)VEGF及VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌組織中顯著高表達(dá),且高表達(dá)VEGF的卵巢癌更易發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移,VEGF及VEGFR1和VEGFR2與腫瘤分期、腹水產(chǎn)生有著密切關(guān)系。預(yù)后分析中共高表達(dá)VEGF及其受體VEGFR1和VEGFR2的患者預(yù)后較差,VEGF及其受體VEGFR1、VEGFR2三者共高表達(dá)不僅可作為卵巢癌患者預(yù)后的參考指標(biāo),也可成為抗腫瘤血管生成靶向治療療效的預(yù)測(cè)指標(biāo),即貝伐珠單抗應(yīng)用于三者共高表達(dá)的患者較三者不表達(dá)或低表達(dá)的患者可能具有更佳的治療效果。2)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3中存在VEGF自分泌機(jī)制,rh VEGF對(duì)SKOV3有促增殖作用,也使腫瘤細(xì)胞表面受體KDR及p-KDR表達(dá)增高。VEGF可激活胞內(nèi)p-KDR,進(jìn)一步活化自分泌環(huán)路的下游信號(hào)。3)Bevacizumab通過(guò)阻斷SKOV3細(xì)胞VEGF自分泌環(huán)路而降低表面受體KDR及p-KDR的表達(dá),同時(shí)Bevacizumab可能通過(guò)間接抑制KDR下游信號(hào)分子erk及p-erk的表達(dá)而抑制細(xì)胞VEGF自分泌功能,進(jìn)一步證明Bev可通過(guò)抑制VEGF自分泌機(jī)制中的MAPK通路而抑制SKOV3細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：卵巢癌 VEGF VEGFR1(Flt-1) VEGFR2(KDR) Bevacizumab(Bev)
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.31
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-14
• 文獻(xiàn)回顧14-27
• 第一部分VEGF及其受體VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)及臨床預(yù)后研究27-37
• 1.材料27-28
• 2 方法28-30
• 3 結(jié)果30-35
• 4 討論35-37
• 第二部分 上皮性卵巢癌細(xì)胞VEGF自分泌機(jī)制研究37-53
• 1 材料37-40
• 2 方法40-46
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理46
• 4 結(jié)果46-51
• 5 討論51-53
• 第三部分Bevacizumab（Bev）對(duì)上皮性卵巢癌細(xì)胞增殖影響及機(jī)制研究53-62
• 1 材料53-54
• 2 方法54-56
• 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析56
• 4 結(jié)果56-60
• 5 結(jié)論60-62
• 小結(jié)62-63
• 參考文獻(xiàn)63-73
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及研究成果73-75
• 致謝75

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9 許幼峰;郭e，

本文編號(hào)：438899