目的:ErbB3是表皮生長因子受體家族的成員之一,在多種癌癥組織中表達,Ebp1為ErbB3受體主要的結(jié)合蛋白之一,由人PA2G4基因編碼,已有多篇文獻報道Ebp1在人乳腺癌、口腔鱗狀細胞癌、前列腺癌、以及肝癌等癌癥中具有重要的調(diào)節(jié)作用,但是其在宮頸癌中的作用卻罕見報道。已有研究發(fā)現(xiàn)Ebp1在宮頸癌組織中高表達,而在癌旁組織中低表達,但Ebp1對宮頸癌細胞生物學功能的影響尚不明確。因此本研究通過基因干擾技術(shù),初步探討Ebp1對宮頸癌細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、和細胞凋亡等生物學功能的影響。方法:本研究采用重組慢病毒感染宮頸癌HELA細胞使Ebp1蛋白低表達。實驗分為2組:PA2G4-RNAi病毒組(KD組)和陰性對照病毒組(NC組)。兩組細胞感染72 h后用細胞免疫熒光和蛋白免疫印跡法檢測KD組和NC組細胞Ebp1蛋白的表達情況,Ebp1蛋白表達顯著降低說明轉(zhuǎn)染成功。轉(zhuǎn)染成功后用CCK-8檢測KD組和NC組細胞活性,平板克隆和軟瓊脂克隆形成實驗檢測KD組和NC組細胞的增殖能力和集落形成能力,流式細胞術(shù)檢測KD組和NC組細胞的細胞周期和凋亡情況,TUNEL法檢測KD組和NC組細胞凋亡情況,劃痕實驗...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語表
第一章 前言
    1.1 宮頸癌流行病學現(xiàn)狀
    1.2 ErbB3受體的結(jié)構(gòu)和功能
    1.3 Ebp1的表達和功能
第二章 實驗材料
    2.1 實驗細胞
    2.2 實驗試劑
    2.3 實驗儀器
第三章 實驗方法
    3.1 細胞培養(yǎng)及傳代
    3.2 慢病毒感染HELA細胞
    3.3 細胞免疫熒光檢測Ebp1蛋白
    3.4 蛋白免疫印跡法檢測Ebp1蛋白
    3.5 CCK-8檢測細胞增殖
    3.6 平板克隆形成實驗
    3.7 軟瓊脂集落(克隆)形成實驗
    3.8 流式細胞術(shù)檢測細胞周期
    3.9 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡
    3.10 TUNEL法檢測細胞凋亡
    3.11 劃痕實驗檢測細胞遷移能力
    3.12 Transwell小室檢測細胞侵襲能力
    3.13 統(tǒng)計學分析
第四章 實驗結(jié)果
    4.1 重組慢病毒感染HELA細胞效果監(jiān)測
    4.2 Ebp1基因沉默對HELA細胞增殖的影響
    4.3 Ebp1基因沉默對細胞克隆形成能力的影響
    4.4 Ebp1基因沉默對HELA細胞周期的影響
    4.5 Ebp1基因沉默對HELA細胞凋亡的影響
    4.6 Ebp1基因沉默對HELA細胞侵襲的影響
    4.7 Ebp1基因沉默對HELA細胞遷移的影響
第五章 討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄:攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文



本文編號：4040751