目的:Prolactin family 7,subfamily d,member 1(Prl7d1)是催乳素家族成員之一,表達于胎盤。在小鼠妊娠第12天,其表達水平達到高峰。體外研究表明,Prl7d1具有抗血管生成作用,但其在體內(nèi)胎盤發(fā)育中的生理作用尚不清楚。因此,我們利用Prl7d1敲除(Knock-out,KO)小鼠模型,探討Prl7d1在妊娠中期胎盤中的生物學(xué)功能及可能的調(diào)控機制,為闡明正常和病理妊娠的分子機制提供基礎(chǔ)。方法:1.利用TALEN技術(shù)構(gòu)建Prl7d1 KO小鼠模型,繁殖小鼠通過鼠尾DNA測序鑒定基因型,妊娠中期胎兒通過雙重PCR鑒定性別。2.通過western blot和免疫組化觀察PRL7D1在胎盤中的表達情況。3.利用HE染色、PAS染色、MASSON染色及免疫組化等方法觀察胎盤的形態(tài)學(xué)改變。4.收集妊娠中期胎盤組織,進行RNA-Seq高通量測序,分析Prl7d1調(diào)控胎盤發(fā)育可能的下游信號通路。結(jié)果:1.Prl7d1在WT小鼠胎盤的交界區(qū)(Junctional zone,JZ)表達,而在KO小鼠中沒有表達。2.Prl7d1 KO導(dǎo)致母鼠產(chǎn)仔量減少,妊娠中期子宮活胚...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
1 材料
    1.1 實驗動物
    1.2 主要試劑與耗材
    1.3 主要儀器與設(shè)備
    1.4 引物
2 方法
    2.1 主要試劑配制
    2.2 Prl7d1 KO 小鼠制備
    2.3 小鼠基因型鑒定
    2.4 小鼠繁殖實驗
    2.5 妊娠中期胚胎獲取
    2.6 組織蛋白提取及蛋白濃度測定
    2.7 Western blot
    2.8 HE 染色
    2.9 Masson 染色
    2.10 PAS 糖原染色
    2.11 PRL7D1 免疫組化
    2.12 CD34 與 Perforin 1 免疫組化與分析
    2.13 組織總 RNA 提取
    2.14 qR T-PCR
    2.15 RNA-Seq 高通量測序
    2.16 生物信息學(xué)分析
    2.17 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 小鼠基因型測序鑒定結(jié)果
    3.2 western blot 驗證 Prl7d1 有效敲除
    3.3 PRL7D1 在妊娠中期胎盤中的定位
    3.4 Prl7d1 KO 導(dǎo)致孕鼠產(chǎn)仔量及妊娠中期胚胎數(shù)量減少
    3.5 Prl7d1 KO 孕鼠胎盤的一般表型特征
    3.6 Prl7d1 對胎盤糖原滋養(yǎng)層細胞發(fā)育的影響
    3.7 Prl7d1 對蛻膜 uN K 細胞分布的影響
    3.8 Prl7d1 缺失對胎盤血管的影響
    3.9 Prl7d1 缺失對孕鼠胎盤組織基因表達譜的影響
    3.10 組織表達富集分析
4 討論
    4.1 Prl7d1 KO 影響生殖能力
    4.2 Pr17d1 參與胎盤細胞的發(fā)育和分化
    4.3 Pr17d1 參與子宮螺旋動脈重塑
    4.4 Pr17d1 缺失導(dǎo)致胎盤基因表達譜變化
    4.5 Prl7d1 缺失可能導(dǎo)致胎盤細胞類型特異性發(fā)育的改變
5 全文總結(jié)
參考文獻
文獻綜述：小鼠催乳素家族與妊娠
    參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文



本文編號：4032529