宮頸癌(cervical carcinoma)的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第三位,僅次于乳腺癌。其死亡率高居第二位,嚴重危害女性健康。中晚期宮頸癌患者治療以放化療為主順鉑(Cisplatin,DDP)作為治療宮頸癌的一線化療藥物在臨床中使用廣泛。然而治療過程中產(chǎn)生的獲得性耐藥是其難治愈的原因之一。為探究潛在的順鉑耐藥分子機制,我們在本研究中建立了人宮頸癌細胞順鉑耐藥細胞系模型Hela/DDP,隨后通過轉(zhuǎn)錄組測序(Transcriptome Sequencing,RNA-Seq)檢測與Hela/DDP與Hela細胞中轉(zhuǎn)錄本表達。分析后篩選獲得性耐藥相關(guān)的差異表達基因。通過RNA-Seq數(shù)據(jù)比較人Hela/DDP與其親本細胞系Hela的基因相對表達量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)2,312個差異表達基因(Differentially Expressed Genes,DEGs)。其中包括1,437個上調(diào)基因和875個下調(diào)基因。將DEGs在GO,COG和KEGG數(shù)據(jù)庫進行聚類分析。根據(jù)KEGG數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果,細胞中差異表達基因富集最多的信號通路為PI3K/AKT信號通路。實時熒光定量PCR(RT-q PCR)實驗初...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對照表
第一章 緒論
    1.1 宮頸癌耐藥概述
        1.1.1 宮頸癌簡介
        1.1.2 宮頸癌的治療
    1.2 順鉑概述
    1.3 個體化用藥的概述
    1.4 轉(zhuǎn)錄組測序概述
    1.5 PI3K/AKT信號通路概述
    1.6 MK-22062HCl簡介
    1.7 研究內(nèi)容及意義
第二章 實驗材料及方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 宮頸癌細胞株
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗耗材
        2.1.4 實驗儀器
        2.1.5 常用緩沖液的配制
    2.2 細胞實驗
        2.2.1 傳代培養(yǎng)
        2.2.2 細胞換液
        2.2.3 細胞凍存
        2.2.4 細胞復(fù)蘇
    2.3 耐藥株構(gòu)建
    2.4 細胞毒性實驗
    2.5 轉(zhuǎn)錄組測序與分析
    2.6 PCR實驗驗證轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果
        2.6.1 Trizol法提取RNA
        2.6.2 反轉(zhuǎn)錄
        2.6.3 qRT-PCR實驗
    2.7 siRNA合成及細胞轉(zhuǎn)染實驗
    2.8 蛋白免疫印跡實驗
    2.9 細胞凋亡檢測實驗
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 宮頸癌順鉑耐藥株模型建立
    3.2 轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果分析
    3.3 DEGs的功能聚類分析
    3.4 PCR驗證轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果
    3.5 AKT3在順鉑耐藥中的功能
        3.5.1 AKT3-siRNA和MK-2206抑制AKT3表達
        3.5.2 AKT3-siRNA、MK-2206增加Hela/DDP對順鉑的敏感性
        3.5.3 AKT3-siRNA誘導(dǎo)細胞凋亡
第四章 討論
    4.1 轉(zhuǎn)錄組測序樣本選擇的局限性
    4.2 PI3K/AKT信號通路與宮頸癌順鉑耐藥之間的關(guān)系
    4.3 宮頸癌細胞對順鉑耐藥的其他通路研究
    4.4 順鉑耐藥性與細胞凋亡之間的關(guān)聯(lián)
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果
致謝



本文編號：3937992