研究目的： 1.建立從足月剖宮產(chǎn)孕婦臍帶分離間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）、體外傳代培養(yǎng)擴增的方法，研究其生物學特征，為后續(xù)實驗提供細胞源。 2.培養(yǎng)基中添加TGF-β1誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞（hUCMSCs）定向分化為成纖維細胞（fibroblast），為進一步實驗奠定基礎(chǔ)。 3.通過模擬人類妊娠分娩、難產(chǎn)、產(chǎn)傷、卵巢去勢建立SD大鼠SUI的動物模型，將外源性TGF-β1聯(lián)合hUCMSCs注射于尿道周圍，根據(jù)尿動力學、噴嚏實驗、尿道及膀胱組織形態(tài)學和彈性纖維的改變，觀察細胞移植治療對尿道及其周圍組織和膀胱中Loxl-1、Fibulin-5和Elastin表達的影響，為SUI的治療提供依據(jù)。 方法： 1．無菌條件下取足月剖宮產(chǎn)的健康新生兒近臍部臍帶，應(yīng)用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)。 2．應(yīng)用流式細胞儀檢測細胞表面標志物；光學顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學特征；CCK8法檢測細胞的增殖能力并繪制生長曲線；體外誘導其向成脂細胞和成骨細胞分化來鑒定其多向分化能力。 3.制備細胞爬片，實驗組加TGF-β1（5ng/ml），對照組正常培養(yǎng)，誘導7天后免疫組化鑒定波形蛋...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1AhUCMSCs原代細胞（40×）

3.1hUCMSCs的體外分離培養(yǎng)及形態(tài)特征應(yīng)用組織塊貼壁法，約7-12天可見組織塊的四周有成纖維狀細胞爬出，貼壁生長，組織塊的四周細胞呈集落狀生長時（圖1A），可以進行初次消化傳代，傳代后的細胞均勻分布在細胞培養(yǎng)瓶中。隨著傳代次數(shù)的增加，細胞逐漸得到純化，形態(tài)均一（圖1B），....

圖1BhUCMSCsP3代細胞（40×）

組織塊的四周細胞呈集落狀生長時（圖1A），可以進行初次消化傳代，傳代后的細胞均勻分布在細胞培養(yǎng)瓶中。隨著傳代次數(shù)的增加，細胞逐漸得到純化，形態(tài)均一（圖1B），呈放射狀生長，形態(tài)以長梭形為主，增殖速度加快，一般約3-4天可再次進行消化傳代。3.2hUCMSCs表面抗原的鑒定流式細....

圖2hUCMSCs表面標記的表達

圖2hUCMSCs表面標記的表達3.3hUCMSCs的生長周期和生長曲線的測定細胞生長周期提示大部分細胞處于靜止期及DNA合成前期（G0-G藍色區(qū)域），只有少數(shù)處于DNA復(fù)制期（S期，粉紅色區(qū)域）、DNA合成后期，玫紅色區(qū)域）（圖3）。細胞生長曲線大致呈“....

圖3P3代細胞生長周期

玫紅色區(qū)域）（圖3）。細胞生長曲線大致呈“S”形，傳代培養(yǎng)細胞長較緩慢為潛伏期，對數(shù)生長期為3-5d，之后細胞增殖逐漸緩慢，5-7d期，平臺期后如不進行傳代培養(yǎng)，細胞則受到接觸抑制而逐步死亡。以細時間（d）為橫坐標，細胞吸光度值（OD450nm）為縱坐標繪制生長曲線(圖

本文編號：3930979