研究目的： 1.建立從足月剖宮產(chǎn)孕婦臍帶分離間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）、體外傳代培養(yǎng)擴(kuò)增的方法，研究其生物學(xué)特征，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞源。 2.培養(yǎng)基中添加TGF-β1誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUCMSCs）定向分化為成纖維細(xì)胞（fibroblast），為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。 3.通過模擬人類妊娠分娩、難產(chǎn)、產(chǎn)傷、卵巢去勢建立SD大鼠SUI的動物模型，將外源性TGF-β1聯(lián)合hUCMSCs注射于尿道周圍，根據(jù)尿動力學(xué)、噴嚏實(shí)驗(yàn)、尿道及膀胱組織形態(tài)學(xué)和彈性纖維的改變，觀察細(xì)胞移植治療對尿道及其周圍組織和膀胱中Loxl-1、Fibulin-5和Elastin表達(dá)的影響，為SUI的治療提供依據(jù)。 方法： 1．無菌條件下取足月剖宮產(chǎn)的健康新生兒近臍部臍帶，應(yīng)用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)。 2．應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物；光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征；CCK8法檢測細(xì)胞的增殖能力并繪制生長曲線；體外誘導(dǎo)其向成脂細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化來鑒定其多向分化能力。 3.制備細(xì)胞爬片，實(shí)驗(yàn)組加TGF-β1（5ng/ml），對照組正常培養(yǎng)，誘導(dǎo)7天后免疫組化鑒定波形蛋...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1AhUCMSCs原代細(xì)胞（40×）

3.1hUCMSCs的體外分離培養(yǎng)及形態(tài)特征應(yīng)用組織塊貼壁法，約7-12天可見組織塊的四周有成纖維狀細(xì)胞爬出，貼壁生長，組織塊的四周細(xì)胞呈集落狀生長時(shí)（圖1A），可以進(jìn)行初次消化傳代，傳代后的細(xì)胞均勻分布在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞逐漸得到純化，形態(tài)均一（圖1B），....

圖1BhUCMSCsP3代細(xì)胞（40×）

組織塊的四周細(xì)胞呈集落狀生長時(shí)（圖1A），可以進(jìn)行初次消化傳代，傳代后的細(xì)胞均勻分布在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。隨著傳代次數(shù)的增加，細(xì)胞逐漸得到純化，形態(tài)均一（圖1B），呈放射狀生長，形態(tài)以長梭形為主，增殖速度加快，一般約3-4天可再次進(jìn)行消化傳代。3.2hUCMSCs表面抗原的鑒定流式細(xì)....

圖2hUCMSCs表面標(biāo)記的表達(dá)

圖2hUCMSCs表面標(biāo)記的表達(dá)3.3hUCMSCs的生長周期和生長曲線的測定細(xì)胞生長周期提示大部分細(xì)胞處于靜止期及DNA合成前期（G0-G藍(lán)色區(qū)域），只有少數(shù)處于DNA復(fù)制期（S期，粉紅色區(qū)域）、DNA合成后期，玫紅色區(qū)域）（圖3）。細(xì)胞生長曲線大致呈“....

圖3P3代細(xì)胞生長周期

玫紅色區(qū)域）（圖3）。細(xì)胞生長曲線大致呈“S”形，傳代培養(yǎng)細(xì)胞長較緩慢為潛伏期，對數(shù)生長期為3-5d，之后細(xì)胞增殖逐漸緩慢，5-7d期，平臺期后如不進(jìn)行傳代培養(yǎng)，細(xì)胞則受到接觸抑制而逐步死亡。以細(xì)時(shí)間（d）為橫坐標(biāo)，細(xì)胞吸光度值（OD450nm）為縱坐標(biāo)繪制生長曲線(圖

本文編號：3930979