宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一。在宮頸癌的常見病理類型中,鱗狀細(xì)胞癌占85%,腺癌占15%。其發(fā)病原因主要是HPV高危險(xiǎn)型的持續(xù)感染導(dǎo)致,HPV16型主要與鱗癌相關(guān),HPV18型主要與腺癌相關(guān),但宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展的過程并不是HPV持續(xù)性感染作為唯一原因的,這一過程是一個(gè)多基因參與的復(fù)雜過程,有多個(gè)調(diào)控通路共同作用,具體的分子機(jī)制還尚不明確。血小板反應(yīng)蛋白2(Thrombospondin 2,THBS2)是一種介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-間質(zhì)作用的糖蛋白,在多種腫瘤中抑制血管的形成,基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)家族是一類可通過降解細(xì)胞外基質(zhì)從而影響腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的蛋白酶家族。在我們的前期研究中,已經(jīng)通過生物信息學(xué)證明,THBS2是miR-1246的一個(gè)靶基因,在體外實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)染miR-1246的宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞THBS2表達(dá)水平明顯下降,且體現(xiàn)出促進(jìn)細(xì)胞侵襲與遷移的特性;在下調(diào)miR-1246的宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞THBS2表達(dá)水平明顯上升,在體外實(shí)驗(yàn)中裸鼠移植瘤MMP2和MMP9的蛋白水平表達(dá)下降;且過表達(dá)THBS2后可促進(jìn)SiHa細(xì)胞的...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 過表達(dá)THBS2 后宮頸癌SiHa細(xì)胞中MMPs家族表達(dá)差異
    1.1 材料與方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株來源
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
        1.2.1 細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        1.2.2 實(shí)驗(yàn)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建
        1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組
        1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)THBS2mRNA的表達(dá)水平，并檢測(cè)在宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞中過表達(dá)THBS2后MMP1、MMP2、MMP7、MMP9表達(dá)的差異
        1.2.5 Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染慢病毒后宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞中THBS2、MMP1、MMP2、MMP7、MMP9蛋白表達(dá)的差異
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.4 結(jié)果及分析
        1.4.1 過表達(dá)THBS2慢病毒轉(zhuǎn)染宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞熒光及白光照片
        1.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染過表達(dá)THBS2慢病毒的宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞中THBS2/MMP1/MMP2/MMP7/MMP9的mRNA表達(dá)水平
        1.4.3 Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染過表達(dá)THBS2慢病毒的宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞中THBS2/MMP1/MMP2/MMP7/MMP9的蛋白表達(dá)水平
    1.5 討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 過表達(dá)MMP1/MMP2 對(duì)宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞侵襲遷移的影響
    2.1 材料與方法（部分實(shí)驗(yàn)同上述）
        2.1.1 材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.1.3.CCK8 法檢測(cè)細(xì)胞增值能力
        2.1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        2.1.5 Transwell 法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的實(shí)驗(yàn)
        2.1.6 細(xì)胞劃痕試驗(yàn)
    2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞中MMP1和MMP2 mRNA的表達(dá)水平
        2.3.2 用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染過表達(dá)慢病毒MMP1和MMP2后宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞中MMP1和MMP2蛋白質(zhì)水平相對(duì)表達(dá)量
        2.3.3 CCK8法間接檢測(cè)轉(zhuǎn)染過表達(dá)轉(zhuǎn)染過表達(dá)慢病毒MMP1和MMP2后宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞增殖的變化
        2.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染過表達(dá)轉(zhuǎn)染過表達(dá)慢病毒MMP1和MMP2后宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞凋亡情況的變化
        2.3.5 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染過表達(dá)慢病毒MMP1和MMP2后宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞穿過matrigel膠膜細(xì)胞個(gè)數(shù)來間接反映細(xì)胞侵襲能力的差異
        2.3.6 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染過表達(dá)慢病毒MMP1和MMP2后宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞劃痕愈合能力間接反映細(xì)胞遷移能力的差異
    2.4 討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
不足之處
創(chuàng)新點(diǎn)
綜述 宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)主要機(jī)制的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文



本文編號(hào)：3907638